楊 東

(泰安市中醫(yī)醫(yī)院，山東泰安271000)

HPLC法測定參鹿的侯丸中淫羊藿苷的含量*

楊 東

(泰安市中醫(yī)醫(yī)院，山東泰安271000)

目的建立參鹿的侯丸中淫羊藿苷的含量測定方法。方法采用HPLC，Agilent(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈:水(0～10分鐘，25～30:75～70;10～20分鐘，30:70)，檢測波長為270nm，流速1.0 ml· min－1，柱溫25℃。結(jié)果淫羊藿苷對照品進(jìn)樣量在0.112～1.12mg呈良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=1637.4x+ 40.6，相關(guān)系數(shù)為r=0.9991。平均回收率為98.6%，RSD為2.09%(n=9)。結(jié)論該方法簡便，重現(xiàn)性好，可作為參鹿的侯丸的質(zhì)量控制方法。

參鹿的侯丸;淫羊藿苷;含量測定;高效液相色譜法

參鹿的侯丸為我院院內(nèi)制劑，批準(zhǔn)文號為魯藥制字Z09080148。該品種臨床已應(yīng)用多年，療效顯著。處方由淫羊藿、人參、鹿角膠、菟絲子等18味中藥飲片組成，功效為補(bǔ)腎益脾，活血通經(jīng)。用于排卵功能障礙兼腎虛或兼脾虛氣血不足而運(yùn)行無力者。方中淫羊藿具有補(bǔ)腎陽，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕，為君藥。以前該制劑品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只含當(dāng)歸、川芎的定性鑒別項(xiàng)目，無飲片含量測定項(xiàng)目，為控制該產(chǎn)品質(zhì)量，確保其臨床療效，我們依據(jù)藥典方法［1］，采用高效液相色譜(HPLC)法測定淫羊藿苷的含量。

1 材料

1.1 儀器Agilent1200高效液相色譜儀(美國安捷倫)，ChemStation色譜工作站，VWD檢測器; CP114分析天平(奧豪斯儀器(上海)有限公司)。

1.2 樣品與試劑甲醇、乙腈為色譜純;其余試劑為分析純;娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)。淫羊藿苷對照品(批號:110737-200415，中國藥品生物制品檢定所);參鹿的侯丸及陰性樣品(本院制劑室自制，批號分別為131212，131213，131214)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱Agilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相乙腈:水(0～10分鐘，25～30:75～70;10～20分鐘，30: 70);檢測波長270 nm;流速1.0 ml/min;進(jìn)樣量10 μl。在上述色譜條件下進(jìn)樣，以淫羊藿苷峰計(jì)算，理論板數(shù)為35391，淫羊藿苷峰與最相鄰峰分離度為R=5.11，對稱因子為1.01，符合藥典要求。陰性色譜圖中，在與淫羊藿苷峰保留時(shí)間相同位置上未見干擾峰，表明其他組分不干擾淫羊藿苷的含量測定。色譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定為14.0 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得淫羊藿苷對照品儲(chǔ)備液;精密量取上述儲(chǔ)備液1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(含量為0.056 mg· ml－1)。

圖1 參鹿的侯丸高效液相色譜圖

2.2.2 供試品溶液制備取本品裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物適量，取其中粉約2.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20 ml，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)1小時(shí)，放冷，再稱定質(zhì)量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備按處方比例稱取去淫羊藿的其余藥味，依本品制備工藝制備陰性樣品，參照2.2.2項(xiàng)下制備陰性供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察吸取對照品溶液2、5、10、15、20 μl，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積(A)對進(jìn)樣質(zhì)量(M，μg)進(jìn)行線性回歸，得方程Y =1637.4X+40.6，相關(guān)系數(shù)r=0.9991，結(jié)果表明淫羊藿苷溶液在0.112～1.12 μg線性關(guān)系良好。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)吸取對照品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別測定其峰面積，平均峰面積為981.7，RSD為0.59%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取供試品溶液，分別于0、1、2、4、6小時(shí)，精密量取10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積，RSD=1.6%。結(jié)果表明，供試品溶液在6小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)在不同實(shí)驗(yàn)室條件下，取同一批樣品，采用不同儀器(SPD-20AT島津與Agilent 1200色譜儀)、不同操作人(兩人)，按照擬定的色譜條件測定樣品，測定其峰面積值，淫羊藿苷的平均含量為0.420 mg·g－1，RSD=2.64%(n=3)，表明方法重現(xiàn)性好。

2.7 加樣回收實(shí)驗(yàn)取已知含量的供試品(批號: 131212)約1.0 g，精密稱定，共取6份，分別精密加入一定量的淫羊藿苷對照品溶液，按供試品溶液制備方法和色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算回收率。結(jié)果表明，此方法測定本品中淫羊藿苷的含量，加樣回收率良好。見表1。

表1 參鹿的侯丸中淫羊藿苷加樣回收試驗(yàn)

2.8 樣品測定取本品(3批)，按2.2.2方法制備供試品溶液，分別精密吸取樣品溶液10 μl注入液相色譜儀，測定淫羊藿苷含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定

3 討論

參考《中國藥典》2010年版一部及文獻(xiàn)，淫羊藿苷在稀乙醇中溶解性較好，藥典中中藥材淫羊藿是以稀乙醇為提取溶劑，采用超聲法進(jìn)行提取。本實(shí)驗(yàn)參考其實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行提取參數(shù)考察，考察結(jié)果表明使用稀乙醇溶解，既可實(shí)現(xiàn)在色譜分離時(shí)所產(chǎn)生的溶劑峰不干擾淫羊藿苷的準(zhǔn)確定量，又做到其溶解度滿足實(shí)際樣品分析的要求。

《中國藥典》2010年版一部淫羊藿藥材項(xiàng)下含量測定樣品超聲處理1小時(shí)，經(jīng)研究，本品超聲處理1小時(shí)與0.5小時(shí)提取率幾乎無變化，即超聲0.5小時(shí)即可將本品中淫羊藿苷提取充分，因此采用超聲處理0.5小時(shí)。

方法研究過程中采用不同人、不同儀器、不同試驗(yàn)場所、不同溫度等條件驗(yàn)證本方法，結(jié)果不同條件下RSD均小于3%，因此本方法合理，可以將其作為本制劑的含量控制方法。

［1］國家藥典委員會(huì)編.中國藥典.一部［S］.2010:908－909.

Determination of content of Icariin in Shenludihou Pill by HPLC

YANG Dong
(Taian City Hospital of Traditional Chinese Medicine，Taian 271000，China)

Objective:To establish a quantitative method for determination of icariin in Shenludihou Pill.Methods:A HPLC method was used to determine the content of icariin with acetonitrile-water(0～10min，25～30:75～70;10～20min，30:70);as the mobile phase and detection wavelength was 270nm，The flow rate was 1.0 ml·min－1and the column temperature was 25℃.Results:The linearity of icariin were good in range of 0.112～1.12(g，and the regression equation was Y=1637.4x+40.6(r=0.9991).The average recovery was 98.6%and the RSD value of repeatability was 2.09%(n =9).Conclusion:This method is simple and reproducible，which can be used for quality control of Shenludihou Pill.

Shenludihou Pill;icariin;content determination;HPLC

R943

A

1004-7115(2015)07-0790-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2015.07.026

2015-01-14)

楊東(1971－)，男，山東泰安人，主管藥師，本科，主要從事制劑研制工作。