李春青 牛思強(qiáng) 貴永賢

(新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院腫瘤科，河南新鄉(xiāng)453003)

華蟾素聯(lián)合化療治療消化道腫瘤對CD4+CD25+T細(xì)胞的影響*

李春青 牛思強(qiáng) 貴永賢

(新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院腫瘤科，河南新鄉(xiāng)453003)

目的探討華蟾素聯(lián)合化療對晚期消化道腫瘤患者CD4+CD25+T細(xì)胞的影響。方法選擇72例晚期消化道腫瘤患者，隨機(jī)分為華蟾素聯(lián)合化療治療組(簡稱為觀察組)，單純化療治療組(簡稱為對照組)，完成2個周期治療，觀察兩組患者的臨床療效、生存質(zhì)量，使用流式細(xì)胞儀檢測兩組病人的外周血CD4+CD25+T細(xì)胞水平變化。結(jié)果1.觀察組有效率58.13%高于對照組34.48%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。2.觀察兩組患者的生存質(zhì)量，觀察組有效率為78.04%，高于對照組的63.47%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);3.觀察組患者治療后，CD 4+CD 25+/CD4+、CD 4+CD 25+Foxp3/CD 4+為8.35±1.64、0.99±0.54，觀察組則為12.01±1.89、1.55±0.55，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論華蟾素具有增強(qiáng)體液免疫和細(xì)胞免疫的作用，聯(lián)合化療治療晚期消化道腫瘤，不僅療效佳，安全性高，提高患者生存質(zhì)量，而且可有效抑制CD4+CD25+T細(xì)胞的數(shù)量，提高患者免疫力。

消化道腫瘤;華蟾素;化療;CD4+CD25+T細(xì)胞

消化道腫瘤發(fā)病率較高，早期多無臨床癥狀，容易被忽略，早期診斷十分困難，70%～80%患者就診時已處于晚期，給腫瘤的治療帶來很大的障礙，導(dǎo)致大多數(shù)患者預(yù)后不佳。研究認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展與機(jī)體的抗腫瘤免疫逃逸相關(guān)，有一類具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞，即CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells，Tregs)在機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)中起著重要的作用［1］，通過下調(diào)機(jī)體的免疫應(yīng)答來降低宿主的抗腫瘤免疫反應(yīng)，與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。目前晚期腫瘤治療多以化療為主，雖然延長患者的生存時間，然而大多化療藥物選擇性低，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時，有明顯的毒副作用。因此在腫瘤的治療過程中，人們重視減少腫瘤負(fù)荷的同時，注意恢復(fù)、重建機(jī)體的免疫功能。有研究顯示，密切觀察外周血CD4+CD25+細(xì)胞水平，對合理制定治療方案，以及觀察患者機(jī)體的免疫狀態(tài)具有重要意義?，F(xiàn)回顧分析新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科自2010年1月以來，應(yīng)用華蟾素聯(lián)合化療方案應(yīng)用于晚期消化道腫瘤治療，并觀察患者CD4+CD25+T細(xì)胞水平，現(xiàn)將結(jié)果匯報如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象選擇自2010年1月－2012年12月在我院經(jīng)過細(xì)胞學(xué)或者病理學(xué)確診為消化道腫瘤患者，共72例，預(yù)計生存期多于3個月，Kps評分高于70分，并且排除近3個月使用免疫增強(qiáng)劑、接受放化療。所有患者均為III、IV期晚期腫瘤患者，其中男性38例，女性34例;平均年齡(57.1±2.8)歲;腫瘤類型:食管癌24例，賁門胃癌17例，結(jié)腸癌15例，直腸癌9例，肝癌7例。

1.2 病例分組隨機(jī)將所有患者分為2組，即:華蟾素聯(lián)合化療方案治療組43例患者(簡稱為觀察組)，單純化療方案治療組29例(簡稱為對照組)。

1.3 治療措施對照組:完善化療前的各項檢查，排除化療禁忌癥，給予患者Folfox6方案化療，兩周重復(fù)該方案，兩個周期后，評價效果。觀察組:在對照組“Folfox6化療方案”的基礎(chǔ)上聯(lián)合華蟾素治療，具體用法:5%葡萄糖500 ml+50 ml華蟾素，靜脈滴注，1次/天，15天為1療程，2個療程后評價療效。

1.4 觀察指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)有效率評價:根據(jù)世界衛(wèi)生組織實(shí)體瘤的療效評價標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)腫瘤體積的縮小程度分為完全緩解(CR)，部分緩解(PR)，穩(wěn)定(SD)，病情進(jìn)展(PD)，有效率=(CR+PR)/病例數(shù)× 100%。生存質(zhì)量評價:評價按照KPS評分。具體為:治療后評分增加＞20分，為顯效;評分增加＞10分，為有效;評分下降10分，不能完成化療療程，為無效。流式細(xì)胞儀分析:應(yīng)用熒光直接標(biāo)記法及流式細(xì)胞儀檢測外周血CD4+CD25+T細(xì)胞，取不同熒光標(biāo)記的單克隆抗體，PE標(biāo)記的CD4抗體，F(xiàn)ITC標(biāo)記的CD25抗體，Cychorme標(biāo)記的CD69和CD45RA抗體，各20微升，各樣本加入100微升肝素抗凝的外周血，混勻后，在室溫下避光孵育15～30分鐘，加入紅細(xì)胞裂解液2毫升，混勻后避光放置5～10分鐘至液體透亮，PSB重懸后洗滌2次，用流式細(xì)胞儀檢測，使用Cellquest軟件分析數(shù)據(jù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均采用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析，以P≤0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異，使用卡方檢驗比較兩個總體率或構(gòu)成比之間有無差別，計量資料使用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床療效比較對比兩組患者的治療有效率，觀察組有效率48.28%，對照組有效率31.03%，觀察組優(yōu)于對照組，見表1。

表1 兩組患者臨床療效比較(例)

2.2 兩組患者生存質(zhì)量比較對比兩組患者的生存質(zhì)量，觀察組患者有效率為78.04%，對照組則為64.47%，見表2。

表2 兩組患者生存質(zhì)量對比［例(%)］

2.3 兩組患者的外周CD4+CD25+T細(xì)胞比較治療后，觀察組CD4+CD25+/CD4+、CD 4+CD25+Foxp3/CD 4+為8.35±1.64、0.99±0.54，對照組則為12.01±1.89、1.55±0.55。

表3 兩組患者的外周CD4+CD25+T細(xì)胞比較(±s)

表3 兩組患者的外周CD4+CD25+T細(xì)胞比較(±s)

注:表中CD4+CD25+/CD 4+指CD4+CD25+所占CD4+T細(xì)胞的百分比，CD4+FOXP3+/CD 4+指CD4+FOXP3+所占CD4+T細(xì)胞的百分比。

組別nCD 4+CD 25+/CD4+CD4+CD25+Foxp3/CD4+＜0.05＜0.05 438.35±1.640.99±0.54對照組2912.01±1.891.55±0.55 t值3.312.94 P值觀察組

3 討論

人體內(nèi)有多種免疫成分負(fù)責(zé)識別和清除癌細(xì)胞，然而癌細(xì)胞仍逃避免疫攻擊，在體內(nèi)不斷生長，以至于出現(xiàn)無法控制的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，說明癌細(xì)胞有可能通過多重方式逃避淋巴細(xì)胞的免疫效應(yīng)，重要的機(jī)制之一就是CD4+CD25+T(Tregs細(xì)胞)細(xì)胞的“免疫逃逸”效應(yīng)［2］，該細(xì)胞能抑制性調(diào)節(jié)CD4+或CD8+T細(xì)胞的活化與繁殖，生理狀態(tài)下，可以維持免疫系統(tǒng)的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、免疫耐受、逃避免疫應(yīng)答的平衡，在免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要的負(fù)調(diào)節(jié)作用。腫瘤患者的外周血和腫瘤局部的CD4+CD25+T細(xì)胞比例增加，說明Tregs細(xì)胞調(diào)節(jié)的免疫耐受和腫瘤發(fā)生密切相關(guān)，并直接參與了腫瘤的進(jìn)展。原因可能是，當(dāng)腫瘤發(fā)生時，外周血中CD4+CD25+Tergs細(xì)胞［3］誘導(dǎo)性增高，導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸。其生物學(xué)效應(yīng)的機(jī)制尚未完全明確，可能為:①不依賴抑制性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，通過與靶細(xì)胞(包括初始T細(xì)胞和記憶性T細(xì)胞)的直接接觸，依靠穿孔素和CD18T細(xì)胞，殺死樹突狀細(xì)胞和CD4+T、CD8+T及部分單核細(xì)胞［4］，發(fā)揮抗腫瘤抑制作用;②在免疫應(yīng)答中，Tergs細(xì)胞通過其組成性表達(dá)的CTLA-4和膜型TGF-β的作用，下調(diào)靶細(xì)胞IL-2Rα鏈的表達(dá)，抑制靶細(xì)胞增殖;③Tregs表面的CTLA-4與樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞上的配體B-7結(jié)合后，抑制該細(xì)胞的增殖，同時下調(diào)抗原提呈細(xì)胞APC表達(dá)共刺激因子CD80和CD86，干擾共刺激信號的產(chǎn)生發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)［5］，Treg還與癌癥病人預(yù)后有關(guān);彭啟全［6］分析了117例肝癌患者外周血的CD4+CD25+T細(xì)胞水平，發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞水平與肝癌患者的預(yù)后有關(guān)，比例高的患者5年生存率低于比例低者(P＜0.05)，由此認(rèn)為，高水平的Treg可能使微小的癌灶更容易逃避存活，進(jìn)而影響患者的遠(yuǎn)期生存率。

那么如何清除CD4+CD25+T細(xì)胞，控制該細(xì)胞的功能和數(shù)量是治療的熱點(diǎn)，文獻(xiàn)證明［7］通過各種途徑清除該細(xì)胞或者逆轉(zhuǎn)Tregs細(xì)胞的抑制作用，可增強(qiáng)對腫瘤細(xì)胞的清除。Kuntson［8］在研究轉(zhuǎn)基因鼠中發(fā)現(xiàn)，用白細(xì)胞介素-2免疫毒素去除Treg細(xì)胞后，可導(dǎo)致持續(xù)的抗腫瘤免疫反應(yīng)。然而，癌細(xì)胞通過多種機(jī)制逃避T細(xì)胞的免疫監(jiān)視，多數(shù)免疫治療手段未取得良好的治療效果。研究發(fā)現(xiàn)［9］化療藥物可以通過抑制癌細(xì)胞微環(huán)境的血管生長，減低Tregs的表達(dá)水平，控制腫瘤的進(jìn)展。Nagayama［10］報到，動物腫瘤模型中，使用低劑量化療藥物使Tregs細(xì)胞的數(shù)目和功能明顯減退，即使晚期、化療耐受的腫瘤病人，反復(fù)低劑量給予化療，腫瘤血管生成明顯減少，減輕T細(xì)胞的抑制。張燕等［11］研究了CD4+CD25+T細(xì)胞對細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL)殺傷效果的影響，發(fā)現(xiàn)將這種細(xì)胞清除后，可以提高CTL細(xì)胞殺傷效果，為腫瘤的免疫治療提供新方式，但如果完全清除該細(xì)胞，則可能導(dǎo)致自身免疫疾?。?2］，如何適當(dāng)?shù)恼{(diào)控該細(xì)胞水平，需進(jìn)一步研究。總之，Tregs調(diào)控腫瘤抑制與生長，利用化療藥物清除Tregs細(xì)胞的數(shù)目，腫瘤患者能明顯受益。

然而，化療藥物在清除Tregs細(xì)胞的同時，對正常細(xì)胞也有抑制甚至是毒副作用，免疫功能受到不同程度的抑制，可能導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，還降低患者的生活質(zhì)量。怎樣在確保化療效果的同時，最大程度的減輕毒副作用，提高病人的生存質(zhì)量和治療的依從性，是急需解決的問題，在這方面，傳統(tǒng)中醫(yī)藥華蟾素具有清熱解毒、消腫止痛、活血化瘀、軟堅散結(jié)等功效，可以增強(qiáng)患者的免疫力，增強(qiáng)放化療敏感性，減少不良反應(yīng)，提高患者生存質(zhì)量，延長生存期等。其作用機(jī)制可能與華蟾素可抑制腫瘤細(xì)胞DNA和RNA的復(fù)制有關(guān)。本研究結(jié)果也說明:華蟾素聯(lián)合化療治療晚期消化道腫瘤有效率高，用藥后不良反應(yīng)少，而且可以有效的降低CD4+CD25+T細(xì)胞數(shù)量，增強(qiáng)機(jī)體對癌細(xì)胞的免疫殺傷力，是安全、有效的抗腫瘤方法。

CD4+CD25+細(xì)胞作為一種重要的T細(xì)胞亞群，該細(xì)胞能抑制免疫應(yīng)答、促進(jìn)腫瘤的免疫逃逸，而且在腫瘤患者的外周血中存在大量表達(dá)，可以將該細(xì)胞作為靶點(diǎn)，采取治療措施清除這些細(xì)胞，會提高細(xì)胞毒性T細(xì)胞的免疫功能，誘導(dǎo)腫瘤免疫反應(yīng)，為腫瘤的臨床免疫治療提供一條新的途徑。

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The influence of cinobufacini combined with chemotherapy to CD4+CD25+cancer T cell subsets on advanced gastrointestinal cancer

LI Chun-qing NIU Si-qiang GUI Yong-xian
(Dept.of Oncology，Xinxiang Central Hospital，Xinxiang 453003，China)

Objective:To investigate the influence of cinobufacini combined with chemotherapy to CD4+CD25+T cell on advanced gastrointestinal cancer.Methods:Seventy-two cases of advanced gastrointestinal cancer patients were selected，randomly divided them into cinobufacini added with chemotherapy treatment group(short for the observation group)，and simple chemotherapy treatment group(short for the control group)，the two group patients＇clinical therapeutic effects and quality of life in patients were observed after treatment，flowing cytometry was used to analyze CD4+CD25+T cell in peripheral blood.Results:1.After treatment，effective percentage in the observation group was 58.13%，which was higher than the control group＇s 34.48%，the difference had statistical significance(P＜0.05).2.The quality of life in the observation group was 78.04%，which was better than control group＇s 63.47%，and the difference had significant difference (P＜0.05);3.The percentage of CD4+CD25+T lymphocytes and CD4+CD25+Foxp3 in CD4+T lymphocytes in the observation group were 8.35±1.64、0.99±0.54 respectively，and compared with the control group 12.01±1.89、1.55± 0.55，there was statistical significance between each other(P＜0.05).Conclusion:Cinobufacini，an excellent immunopoteniator，can play important role in enhancing humoral and cellular immunity and the combination with folfox6 project to advanced gastrointestinal cancer not only has good curative effect，high security，but also can inhibit the number of CD4+CD25+T cells，which can improve the patient＇s immune function

gastrointestinal cancer;cinobufacini;chemotherapy;CD4+CD25+T cell

R735

A

1004-7115(2015)07-0747-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2015.07.008

2015-02-08)

李春青(1970—)，本科，副主任醫(yī)師，主要從事腫瘤內(nèi)科工作。