王為東 秦 琴 陳文芳 李玉軍

(1.蒙陰縣人民醫(yī)院病理科，山東蒙陰276200;2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，山東青島266003)

肝細胞癌中p53和survivn的表達及臨床意義*

王為東1秦 琴1陳文芳1李玉軍2

(1.蒙陰縣人民醫(yī)院病理科，山東蒙陰276200;2.青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，山東青島266003)

目的探討抑癌基因p53和survivin在肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)中的表達及臨床意義。方法采用免疫組化和組織芯片技術(shù)檢測296例HCC中p53和survivin的表達，并采用統(tǒng)計學(xué)方法比較其臨床意義。結(jié)果在296例HCC中，p53總的陽性率為13.9%，其陽性表達與HCC的組織學(xué)分級、術(shù)后無瘤生存時間、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝臟被膜浸潤有關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或0.01)，與其他指標(biāo)無關(guān)(P均＞0.05)。survivin在HCC中總的陽性表達率為72.3%，其陽性表達與HCC的組織學(xué)分級、臨床分期、術(shù)后無瘤生存時間、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝臟被膜浸潤有關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或0.01)，與其他指標(biāo)無關(guān)(P均＞0.05)。Kaplan-Meier生存分析顯示，p53和survivin在HCC中陽性表達患者無論其術(shù)后無瘤生存時間還是總生存時間均縮短，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義并(P均＜0.01)。Pearson相關(guān)分析顯示，二者在HCC中表達呈正相關(guān)(r=0.141，P= 0.015)。結(jié)論p53和survivin在HCC中的表達與腫瘤的臨床預(yù)后密切相關(guān)，兩者均可作為HCC患者預(yù)后不良的判斷因子。

肝細胞癌;p53;survivin;組織芯片;免疫組化

原發(fā)性肝癌是嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤，發(fā)病率逐年上升，在我國發(fā)病率居各種惡性腫瘤的第二位［1］。在所有原發(fā)性肝癌中，約90%為肝細胞癌(HCC)。抑癌基因p53被稱為細胞的守門員，在各種致癌因素的作用下，使p53基因發(fā)生突變，由野生型p53突變?yōu)橥蛔冃蚿53，失去對腫瘤的抑制作用，從而使細胞發(fā)生癌變。Survivin，即生長素，具有抑制細胞凋亡和調(diào)節(jié)細胞有絲分裂的雙重功能，同時促進腫瘤血管生長［2］，。本研究采用組織芯片和免疫組化技術(shù)研究296例HCC中p53和survivin的表達情況，探討二者對HCC患者預(yù)后的影響及二者表達的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源選自青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2004.1－2009.12經(jīng)中性福爾馬林固定、石蠟包埋的386例原發(fā)性肝癌組織，在386例原發(fā)性肝癌組織中失訪28例(失訪率為7.25%)，另因術(shù)前行肝動脈栓塞化療、隨訪時間不足、非HCC及脫片等原因，剩余296例納入分析，296例HCC中男性249例，女性47例，年齡27～82歲，中位年齡55歲，根據(jù)WHO組織學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)及國際抗癌聯(lián)盟制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)等連同患者的術(shù)后無瘤生存時間、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管癌栓、腫瘤大小等指標(biāo)一同納入分析。

1.2 試劑與方法

1.2.1 組織芯片構(gòu)建根據(jù)HE染色選擇具有代表性的部位，芯片制備系統(tǒng)制片時取樣針直徑為1.5 mm，組織間距為1 mm。

1.2.2 免疫組化染色免疫組化采用SP法，兔抗人單克隆抗體p53和survivin均來自北京中杉生物有限公司，用PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性切片作陽性對照。

1.3 結(jié)果判定p53陽性部位為細胞核，survivin陽性部位主要為細胞漿，部分表達于細胞核。結(jié)果判定綜合細胞染色強度和陽性細胞百分數(shù)計算，染色強度分4個等級:不著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。陽性細胞所占百分比分為5級計分:陽性細胞率≤5%為0分，陽性細胞率6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。兩種評分標(biāo)準(zhǔn)相乘:0分為“－”，1～3分為“+”;4～8分為“++”;9～12分為“+++”。把“－～+”作為“陰性”處理，把“++～+++”作為“陽性”處理。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行處理，定性資料用χ2檢驗和pearson相關(guān)分析，生存分析采用Kaplan-Meier和Log-rank檢驗分析。

2 結(jié)果

2.1 p53和survivin的表達與HCC患者臨床病理特征的關(guān)系p53的表達與HCC患者組織學(xué)分級、術(shù)后無瘤生存時間、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝臟被膜浸潤相關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=9.075，7.763，12.671，7.024;P=0.003，0.005，0.000，0.008)，與其他指標(biāo)無關(guān)(P均＞0.05)。survivin的表達與HCC患者組織學(xué)分級、臨床分期、術(shù)后無瘤生存時間、腫物直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和肝臟被膜浸潤相關(guān)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.057，22.334，4.384，5.934，6.481，15.435;P=0.025，0.000，0.036，0.015，0.011，0.000)，與其他指標(biāo)無關(guān)(P均＞0.05)，見表1。

表1 HCC中survivin和p53的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.2 p53和survivin的表達情況與HCC患者術(shù)后無瘤生存時間和總生存時間的關(guān)系Kaplan-Meier生存分析顯示，HCC中p53陽性表達患者其中位復(fù)發(fā)時間和中位總生存時間較陰性表達者縮短，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=9.560，10.071;P=0.002，0.002)。HCC中survivin陽性表達患者其中位復(fù)發(fā)時間和中位總生存時間較陰性表達者縮短，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=9.822，11.453;P=0.002，0.001)。見表2、圖1、2。

2.3 HCC中p53和survivin表達的相關(guān)性Pearson相關(guān)分析顯示，P53和survivin在HCC中的表達呈正相關(guān)(r=0.141，P=0.015)。

表2 survivin和p53的表達情況與無瘤生存和總生存期的關(guān)系

圖1 p53在HCC中的表達與術(shù)后總生存分析

圖2 survivin在HCC中的表達與術(shù)后總生存分析

3 討論

P53是人類最早發(fā)現(xiàn)的抑癌基因之一，其主要生物學(xué)功能是穩(wěn)定染色體、促進細胞分化和衰老，誘導(dǎo)細胞凋亡［3－4］。在各種致瘤因子的作用下，由野生型p53突變?yōu)橥蛔冃蚿53，不但失去抑癌活性，后者還會促進癌細胞的生長，由抑癌基因變?yōu)榘┗颍?］。野生型p53蛋白的半衰期短，免疫組化技術(shù)檢測到的是突變型p53，而不是野生型p53［6］。

在HCC中，p53基因突變是最為頻發(fā)的事件，突變型p53蛋白的過表達是肝癌細胞低分化、高轉(zhuǎn)移、預(yù)后差的生物學(xué)標(biāo)志之一［7］。在本實驗中，p53陽性表達患者其組織學(xué)分級、術(shù)后無瘤生存時間、肝被膜浸潤等預(yù)后不良指標(biāo)均較陰性表達患者差，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，與以上實驗及研究基本吻合。

Survivin是近年發(fā)現(xiàn)的抑制蛋白家族新成員，是最強的凋亡抑制蛋白，與腫瘤的分化、增殖密切相關(guān)，在絕大多數(shù)分化完全的組織內(nèi)不表達，但在多數(shù)腫瘤中表達活躍［8］。Survivin在腫瘤組織的過表達可能是因為survivin基因在SP1位點依賴性轉(zhuǎn)錄失調(diào)引起，在癌細胞中survivin啟動子的活性較正常細胞增加10倍以上［9］。多種研究［9－12］顯示，survivin在乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、卵巢癌、結(jié)腸癌等中的高表達提示預(yù)后不良，與本實驗中survivin在HCC中的高表達與組織學(xué)分級、臨床分期、術(shù)后無瘤生存時間、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肝臟被膜浸潤等相關(guān)，陽性表達患者其中位復(fù)發(fā)時間及中位總生存時間均較陰性表達患者短，與以上研究吻合，說明survivin可作為提示HCC預(yù)后不良的一個標(biāo)記物。

免疫組化只是標(biāo)記腫瘤細胞中蛋白的表達情況，有時不能完全真實的反應(yīng)該蛋白的基因情況，因此準(zhǔn)確檢測以上兩種標(biāo)記物的基因表達情況，并探討作為基因靶點在腫瘤靶向治療中的可行性，是今后研究的方向之一。

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The expression and clinical significanceof p 53 and survivin in hepatocellelur carcinoma(HCC)

WANG Wei-dong1QIN Qin1CHEN Wen-fang1LI Yu-jun2
(1.Dept.of Pathology，the People＇s Hospital of Mengyin County，Mengyin 276200，China; 2.Dept.of Pathology，Qingdao University Medical College，Qingdao 266003，China)

Objective:To investigate the expression of p53 and survivin and their clinical significance in HCC.Methods:The expression of p53 and survivin were determined by immunohistochemistry and tissue microarray in 296 cases of HCC and their clinical significance was observed by SPSS.Results:The positive rate of p53 was 13.9%，and was closely correlated to the histological grade，the survival months with no tumor after operation，lymph node metastasis and liver capsule invasion(all the P＜0.05 or 0.01)，but not to the rest of parameters(all the P＞0.05).The positive rate of survivin was 72.3%and was closely correlated to the histological grade，TNM clinical stage，the survival months with no tumor after operation，lymph node metastasis tumor diameter and liver capsule invasion(all the P＜0.05 or 0.01)，but not to the rest of parameters(all the P＞0.05).The positive expression of p53 and survivin were significantly related to short-term survival by Kaplan-Meier analysis(P＜0.01).The two biomarkers were positively interrelated(r=0.146，P=0.015).Conclusion:The positive expression of p53 and survivin closely correlates with multiple clinicopathological parameters，which may indicate the poor prognosis of HCC.

hepatocellular carcinoma(HCC);p53;survivin;tissue microarray;immunohistochemistry

R735.7

A

1004-7115(2015)07-0733-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2015.07.004

2015-02-11)

王為東(1973－)，男，主治醫(yī)師，碩士研究生，主要從事病理診斷工作。

李玉軍，主任醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師。