壽爽，徐勝，呂潔，李靜云，成軍，孫長貴

(解放軍第一一七醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江 杭州310013)

隨著科技的發(fā)展和應(yīng)用，各類自動(dòng)化儀器不斷更新，其性能與檢驗(yàn)質(zhì)量密切相關(guān)，穩(wěn)定的檢測(cè)系統(tǒng)是保障檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量的前提[1]。血細(xì)胞分析儀是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的檢測(cè)儀器之一，BC-6900全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(BC-6900血球儀)是目前深圳邁瑞公司生產(chǎn)的國際上高檔的儀器之一，分為血液和體液兩種模式。根據(jù)《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室--質(zhì)量和能力的專用要求》[2]的要求，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定設(shè)備(在安裝時(shí)及常規(guī)使用中)能夠達(dá)到所要求的性能標(biāo)準(zhǔn)，并且符合相關(guān)檢驗(yàn)所要求的條件。為進(jìn)一步了解該機(jī)性能，筆者以國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(ICSH)和美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和指南，對(duì)血液模式各種性能進(jìn)行初步評(píng)價(jià)，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下 。

1 材料與方法

1.1 40份患者標(biāo)本均是按照世界衛(wèi)生組織(WHO)《靜脈采血的最佳操作》[3]采集的靜脈血液，使用EDTA-K2真空采血管。

1.2 主要儀器與試劑 邁瑞B(yǎng)C-6900全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(BC-6900血球儀)、廠家配套校準(zhǔn)品(批號(hào)：PLUS044)，高、中、低值質(zhì)控品(批號(hào)：MB054H，N，L)及檢測(cè)試劑，SYSMEX XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀(XE-2100血球儀)及相應(yīng)配套檢測(cè)試劑。

1.3 方法 性能評(píng)價(jià)前用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)，兩儀器狀態(tài)良好(XE-2100血球儀參加了全國和浙江省內(nèi)全血細(xì)胞計(jì)數(shù)室間質(zhì)評(píng)，成績優(yōu)秀)，對(duì)BC-6900血球儀的白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)，血紅蛋白(Hb)，血小板計(jì)數(shù)(PLT)的空白計(jì)數(shù)，攜帶污染率，精密度，準(zhǔn)確度，線性范圍和相關(guān)性比較等方面進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。所有操作均嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[4]的要求，判斷標(biāo)準(zhǔn)參考儀器說明書。

1.3.1 空白計(jì)數(shù) BC-6900血球儀開機(jī)后，以稀釋液為標(biāo)本，連續(xù)檢測(cè)3次，取3次結(jié)果的最大值。

1.3.2 攜帶污染率 選擇高值和低值的質(zhì)控品，分別在BC-6900上連續(xù)檢測(cè)高值質(zhì)控品3次(H1，H2，H3)，立即檢測(cè)低值質(zhì)控品 3 次(L1，L2，L3)，計(jì)算四個(gè)項(xiàng)目(WBC、RBC、Hb和PLT)的攜帶污染率(%)，與廠家提供的技術(shù)指標(biāo)比較，其攜帶污染率計(jì)算公式：

1.3.3 精密度評(píng)價(jià) 全血高、中、低值質(zhì)控品連續(xù)檢測(cè)20d，每天測(cè)兩批次，上午9時(shí)一次，下午4時(shí)一次，每批次測(cè)兩次[5]。計(jì)算四個(gè)項(xiàng)目(WBC、RBC、Hb及PLT)的精密度，用Sr表示批內(nèi)精密度，Srr表示批間精密度，Sdd表示日間精密度，ST表示總不精密度，如果 Srr2為負(fù)數(shù)，說明批間變異幾乎都由批內(nèi)變異形成，因此取值為0；如果 Sdd2為負(fù)數(shù)，說明日間變異幾乎都由批間變異形成，因此也取值為0[6]。

1.3.4準(zhǔn)確度評(píng)價(jià) 校準(zhǔn)品校準(zhǔn)儀器后，重復(fù)10次測(cè)定校準(zhǔn)品，取其均值與其靶值比較，計(jì)算四個(gè)項(xiàng)目(WBC，RBC，Hb，PLT)的相對(duì)偏倚(%)[7,8]：

1.3.5 線性范圍 將WBC，RBC，Hb高值標(biāo)本用血漿按 100%，80%，60%，40%，20%，10%比例稀釋，每個(gè)濃度檢測(cè)兩次取均值。將PLT值為3000×109/L的標(biāo)本用血漿按 5/6，2/3，1/2，1/3比例稀釋，每個(gè)濃度檢測(cè)兩次取均值；將PLT值為1000×109/L的標(biāo)本用血漿按 100%，80%，60%，40%，20%，10%比例稀釋，每個(gè)濃度檢測(cè)兩次取均值。計(jì)算WBC，RBC，Hb和不同范圍PLT測(cè)定值與樣本濃度的直線回歸方程及相關(guān)系數(shù)[9,10]。

1.3.6 相關(guān)性比較 (1)兩儀器四個(gè)項(xiàng)目測(cè)定結(jié)果的相關(guān)性：參照CLSI EP9-A2[11]文件，在 5個(gè)工作日內(nèi)，每日選擇 8份樣本，檢測(cè)參數(shù)濃度滿足文件要求，標(biāo)本采集2h內(nèi)，在室溫下分別在BC-6900和XE-2100血球儀上按文件要求測(cè)定順序進(jìn)行測(cè)定，判斷檢測(cè)結(jié)果有效性后，進(jìn)行相關(guān)分析。(2)白細(xì)胞分類儀器法與顯微鏡法的相關(guān)性：參照CLSI H20-A[12]文件內(nèi)容進(jìn)行白細(xì)胞分類相關(guān)性評(píng)價(jià)。取40份患者EDTA-K2抗凝靜脈血標(biāo)本在BC-6900血球儀上重復(fù)測(cè)定2次取均值。同時(shí)取5μl血樣45度角推片，制成符合質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的血涂片3張，1張備用，2張瑞氏染色后由兩名經(jīng)驗(yàn)豐富的主管技師采用雙盲法進(jìn)行白細(xì)胞分類：每張血涂片在油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行中性粒細(xì)胞(N)，淋巴細(xì)胞(L)，單核細(xì)胞(M)，嗜酸性細(xì)胞(E)，嗜堿性細(xì)胞(B)分類，每張血涂片每人分類3次，計(jì)算兩張血涂片各類細(xì)胞百分比均值，以顯微鏡法為參照與儀器結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析[13]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用Microsoft Excel2007軟件中的統(tǒng)計(jì)學(xué)函數(shù)及SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 空白計(jì)數(shù) 四個(gè)項(xiàng)目的空白計(jì)數(shù)結(jié)果均符合標(biāo)準(zhǔn)要求，見表1。

表1 空白計(jì)數(shù)結(jié)果

2.2 攜帶污染率 四個(gè)項(xiàng)目的攜帶污染率分別為WBC：0.199%，PLT：0.4%，RBC，Hb均為 0%， 均在1.0%以下(廠家標(biāo)準(zhǔn))。

2.3 精密度評(píng)價(jià) 按照CLSI指南要求進(jìn)行精密度測(cè)定和計(jì)算，結(jié)果見表2。

表2 精密度評(píng)價(jià)結(jié)果

2.4 準(zhǔn)確度評(píng)價(jià) 四個(gè)項(xiàng)目測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏倚均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果見表3。

2.5 線性范圍 四個(gè)項(xiàng)目在覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平范圍內(nèi)的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)結(jié)果見表4。

2.6 相關(guān)性

2.6.1 BC-6900和XE-2100血球儀測(cè)定四個(gè)項(xiàng)目的相關(guān)性結(jié)果見表5，兩儀器間測(cè)定值的相對(duì)偏倚WBC≤3%，RBC，Hb，PLT均≤2%。

2.6.2 BC-6900血球儀與顯微鏡分類所得五類細(xì)胞的百分比結(jié)果相關(guān)性分別為N%：0.9927；L%：0.9839；M%：0.9070；E%：0.9858；B%：0.7835。

表3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

表4 線性回歸方程結(jié)果

表5 BC-6900(X)與XE2100血球儀(Y)的相關(guān)性

3 討論

BC-6900血球儀將流式細(xì)胞儀普遍采用的熒光技術(shù)引入到白細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞和有核紅細(xì)胞的檢測(cè)中，利用激光流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合熒光染色技術(shù)手段，可以將細(xì)胞中核酸含量的多少通過熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來，結(jié)合細(xì)胞體積或者細(xì)胞內(nèi)部復(fù)雜信息來區(qū)分各種細(xì)胞類型，使其提高了對(duì)幼稚細(xì)胞和原始細(xì)胞的精準(zhǔn)識(shí)別和檢測(cè)[14]。該儀器血液模式能夠提供準(zhǔn)確、全面的血細(xì)胞分析結(jié)果，有利于血液系統(tǒng)疾病的早發(fā)現(xiàn)、早治療。

從保證檢驗(yàn)質(zhì)量考慮，檢驗(yàn)工作者在使用新的儀器和檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行患者標(biāo)本檢測(cè)前，應(yīng)當(dāng)評(píng)價(jià)和驗(yàn)證檢測(cè)系統(tǒng)的基本性能指標(biāo)，只有檢測(cè)系統(tǒng)的各項(xiàng)性能指標(biāo)符合臨床使用要求，才可以將檢測(cè)系統(tǒng)用于常規(guī)工作。本次對(duì)BC-6900血球儀的評(píng)估試驗(yàn)結(jié)果如下：WBC，RBC，Hb和 PLT4項(xiàng)參數(shù)空白計(jì)數(shù)結(jié)果良好，各項(xiàng)指標(biāo)均合格。攜帶污染率均在允許范圍內(nèi)，達(dá)到了廠家的技術(shù)要求。精密度評(píng)價(jià)，四個(gè)項(xiàng)目參數(shù)的總精密度除低值Hb外，均低于廠商提供的精密度，說明儀器的重復(fù)性較好，基本符合儀器的設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)；低值的重復(fù)性相對(duì)稍差，而且主要由批內(nèi)不精密度較大造成，說明儀器對(duì)低值的測(cè)定重復(fù)性有待改進(jìn)。準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)，校準(zhǔn)品的相對(duì)偏倚均符合行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，說明儀器有較高的準(zhǔn)確性。采用覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平的臨床標(biāo)本評(píng)價(jià)線性范圍，四個(gè)項(xiàng)目的相關(guān)系數(shù)均大于0.99以上，線性誤差均小于2%，表明儀器實(shí)測(cè)值和理論值具有良好的相關(guān)性(檢測(cè)濃度與稀釋倍數(shù)呈線性相關(guān))。在與XE-2100血球儀進(jìn)行結(jié)果比較時(shí)，相關(guān)系數(shù)均大于0.99以上，具有良好的相關(guān)性，說明BC-6900血球儀與同類血球儀具有可比性；與手工鏡檢進(jìn)行分類比較時(shí)，儀器對(duì)中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞的分類效果較好，相關(guān)性高且均在手工分類測(cè)定值99%區(qū)間內(nèi)，而單核細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞的分類效果稍差，此結(jié)果與其它類型血球儀類似[15]。單核細(xì)胞雖然比一般淋巴細(xì)胞體積大，核酸含量高，熒光方向和側(cè)向散色光位置高，但與大淋巴細(xì)胞、顆粒型淋巴細(xì)胞、單核型異性淋巴細(xì)胞接近，是否容易引起計(jì)數(shù)誤差，值得探討；嗜堿性細(xì)胞可能因?yàn)榧?xì)胞少比例低，手工鏡檢計(jì)數(shù)的細(xì)胞與儀器分析幾千個(gè)細(xì)胞相比誤差較大。各項(xiàng)結(jié)果表明該儀器比BC-5380有更好的性能[16]。

總之，通過對(duì)BC-6900血液細(xì)胞分析儀空白計(jì)數(shù)、攜帶污染率、精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍、儀器比對(duì)和手工白細(xì)胞分類比對(duì)的初步性能評(píng)價(jià)，筆者認(rèn)為該儀器具有良好的性能?？梢詾榕R床診斷提供快速、準(zhǔn)確的血細(xì)胞分析結(jié)果，適合各大中型醫(yī)院檢驗(yàn)科使用。

[1]張莉,吳炯,郭瑋,等.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)用前的性能評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2006,21(5):560-564.

[2]中國國家實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可委員會(huì).醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力的要求[S].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:21-22.

[3]WHO.WHO guidelines on drawing:blood best practices in phlebotomy[S].Atlanta,USA:WHO,2010．

[4]葉應(yīng)嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社,2006:123.

[5]CLSI.EP5-A2.Clinicaland Laboratory Standards Institute．Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods;Approved Guideline-Second Edition[S].CLSI,2002.

[6]韓弋戟,黃潤華,郭明琴,等.血細(xì)胞分析儀不同檢測(cè)模式精密度性能評(píng)估及比較分析[J].中國輸血雜志,2012,25(4):390-391.

[7]陳曉玲,武錦彪,王文娟.Sysmex XE-2100血液分析儀臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014,32(1):26-29.

[8]楊友業(yè),張秀明.臨床檢驗(yàn)方法學(xué)評(píng)價(jià)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:136-141.

[9]CLSI EP6-A.Clinicaland Laboratory Standards Institute．Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures:A Statistical Approach;Approved Guideline[S].CLSI,2003.

[10]呂賽平,鄒學(xué)森.定量檢測(cè)系統(tǒng)線性評(píng)價(jià)方法-EP6-A法[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2009,27(3):303-304．

[11]CLSI EP9-A2.Clinicaland Laboratory Standards Institute.Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline-Second Edition[S].CLSI,2002.

[12]CLSI H20-A.Clinicaland Laboratory Standards Institute．Reference Leukocyte Differential Count(Proportional)and Evaluation of Instrumental Methods;Approved Standard[S].CLSI,1992．

[13]劉成玉,羅春麗.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M].第5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2012:47.

[14]伍柏青,傅新文.當(dāng)代五分類血細(xì)胞分析儀技術(shù)原理分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(4):391-394.

[15]許永志,謝志雄,朱小東.CoulterLH750全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的性能評(píng)價(jià)[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,28(4):399-400．

[16]劉志昂,陸婷婷,蘇靖凱.BC-5380全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的性能評(píng)價(jià)[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,31(4):407-408.