許青，祝洪濤，徐衛(wèi)益

(1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科 浙江 杭州310003;2、溫州醫(yī)學(xué)院 浙江 溫州325000)

外周血細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察一直被認(rèn)為是細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)的金標(biāo)準(zhǔn)[1]，但其對(duì)操作者細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察水平有較高的要求，當(dāng)血片中觀察到一定比例的異常細(xì)胞時(shí)，有時(shí)較難區(qū)分是髓系還是淋系。血細(xì)胞形態(tài)學(xué)與血細(xì)胞分析儀已聯(lián)合應(yīng)用于白血病檢驗(yàn)[2,3]，隨著血液分析儀分析技術(shù)的不斷提高，一些新的參數(shù)不斷應(yīng)用于臨床[4]。Sysmex XE-2100血細(xì)胞分析儀利用流式細(xì)胞和核酸熒光染色技術(shù)進(jìn)行白細(xì)胞分類，利用IMI通道中特殊溶血?jiǎng)┤芙獬墒旌陀字闪馨图?xì)胞，通過射頻和直流電計(jì)數(shù)IG和髓系幼稚細(xì)胞。已經(jīng)有IG應(yīng)用于炎癥觀察的相關(guān)報(bào)道[5,6]，但通過結(jié)合IG、幼稚細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖來進(jìn)行白血病篩查和初步分類還未見詳細(xì)報(bào)道。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取2014年1月至4月來院就診的門診及住院白血病初發(fā)患者55例，其中AML 30例，其中男性21例，女性9例，平均年齡 39.0歲；CML 10例，其中男性7例，女性3例，平均年齡40.3歲；ALL 15例，男性8例，女性7例，平均年齡38.0歲。所有患者均最終經(jīng)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)和免疫組化分析確診。

1.2 儀器與試劑 日本Sysmex XE-2100全自動(dòng)血液分析儀，原裝配套系列試劑；Sysmex SP-1000i全自動(dòng)推片機(jī)，原裝配套系列試劑。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 2mlEDTA-K2抗凝血標(biāo)本，用Sysmex XE-2100血細(xì)胞分析儀進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，記錄WBC、IG#、IG%、幼稚細(xì)胞數(shù)并觀察白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖；制備血涂片(BASO染液)干燥后用油鏡觀察血片，進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。抽取患者骨髓進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和免疫組化分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS16.0軟件處理測(cè)試數(shù)據(jù)。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，因此，結(jié)果用百分位數(shù)表示，作箱圖進(jìn)行組間比較。

2 結(jié)果

2.1 AML、CML和ALL患者外周血白細(xì)胞各指標(biāo)測(cè)試結(jié)果 AML患者幼稚細(xì)胞百分比、IG%明顯增高，WBC正?；蛑卸壬?；CML患者WBC、IG%、IG#明顯增高，但幼稚細(xì)胞增高不明顯；ALL患者WBC明顯增高、幼稚細(xì)胞百分比輕度增高、IG%、IG#一般不增高，結(jié)果見表1、圖1。

表1 AML、CML和ALL患者外周血白細(xì)胞各指標(biāo)測(cè)試結(jié)果

圖1 AML、CML和ALL患者外周血白細(xì)胞WBC、IG%、幼稚細(xì)胞%三項(xiàng)指標(biāo)測(cè)試結(jié)果

2.2 白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖 各組均有特征性改變，表現(xiàn)為細(xì)胞相應(yīng)區(qū)域散點(diǎn)分布異常，AML患者白細(xì)胞異常散點(diǎn)區(qū)域比ALL組大且往右，CML組具有特征性的散點(diǎn)圖，主要為細(xì)胞數(shù)量增多，粒系幼稚以下細(xì)胞各階段細(xì)胞均有出現(xiàn)，且以成熟粒細(xì)胞為主，嗜酸細(xì)胞散點(diǎn)明顯增多，在BASO通道表現(xiàn)為嗜堿性粒細(xì)胞散點(diǎn)增多。在IMI通道AML和CML檢測(cè)到較多的未成熟粒細(xì)胞和原始細(xì)胞，ALL僅檢測(cè)到很少的未成熟粒細(xì)胞和/或原始細(xì)胞，見圖2。

圖2 白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖

2.3 外周血涂片鏡檢觀察 在AML組和ALL組均見到較高比例的幼稚細(xì)胞，CML組見到一定比例的幼稚細(xì)胞，IG明顯增高，嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞明顯增多，與散點(diǎn)圖相對(duì)應(yīng)，見圖3。

圖3 各組患者外周血涂片細(xì)胞形態(tài)觀察(瑞姬染色，×1000)

3 討論

Sysmex XE-2100血細(xì)胞分析儀IMI檢測(cè)通道利用射頻、電阻抗和細(xì)胞化學(xué)染色法原理，計(jì)數(shù)經(jīng)溶血?jiǎng)┨幚?幼稚細(xì)胞與硫化氨基酸結(jié)合量多于較成熟細(xì)胞，并且對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔?的細(xì)胞懸液中的幼稚細(xì)胞，可定量分析不同類型的幼稚細(xì)胞，包括造血祖細(xì)胞(HPC)、原始細(xì)胞、異型/異常淋巴細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞[7]。Fernandes B等利用顯微鏡鏡檢、流式細(xì)胞計(jì)數(shù)與XE-2100血細(xì)胞分析儀檢測(cè)203例不同疾病(急慢性炎癥、惡性腫瘤、敗血癥等)的IG細(xì)胞數(shù)，認(rèn)為血細(xì)胞分析儀IG計(jì)數(shù)可替代手工顯微鏡鏡檢計(jì)數(shù)，且有很好的準(zhǔn)確性和重復(fù)性[8]。

AML患者外周血血細(xì)胞可出現(xiàn)數(shù)量不等的原始細(xì)胞和未成熟粒細(xì)胞，表現(xiàn)為IG計(jì)數(shù)絕對(duì)和/或相對(duì)增高，由于細(xì)胞總數(shù)增高不明顯，因此，相對(duì)值更有意義，散點(diǎn)圖顯示粒細(xì)胞區(qū)域范圍變大，白細(xì)胞無法正常分類計(jì)數(shù)。CML患者由于外周血細(xì)胞各階段粒細(xì)胞明顯增多，IG計(jì)數(shù)絕對(duì)和相對(duì)增高，散點(diǎn)圖出現(xiàn)粒細(xì)胞區(qū)域散點(diǎn)變多變密，且散點(diǎn)向右上方延伸，表示未成熟、幼稚粒細(xì)胞明顯增多，嗜酸、嗜堿性粒細(xì)胞散點(diǎn)增多，與王霄霞等報(bào)道的血細(xì)胞分析儀CML特征性散點(diǎn)圖描述相符[9]。ALL患者外周血細(xì)胞主要以原始或幼稚淋巴細(xì)胞為主，因此，IG計(jì)數(shù)絕對(duì)和/或相對(duì)僅輕度增高或正常，散點(diǎn)圖出現(xiàn)淋巴細(xì)胞區(qū)域散點(diǎn)往右上方延伸，表示未成熟淋巴細(xì)胞增多，但其中有6例患者幼稚細(xì)胞計(jì)數(shù)僅輕度增高，與血片鏡檢結(jié)果不成比例，分析原因可能為IMI通道溶血?jiǎng)?duì)原始、幼稚淋巴細(xì)胞有一定的破壞作用，需在今后的實(shí)驗(yàn)中繼續(xù)觀察。

因此，初診患者外周血細(xì)胞分析儀出現(xiàn)異常分類散點(diǎn)圖時(shí)，對(duì)血液病往往有篩查或輔助診斷價(jià)值[10,11]，應(yīng)分析白細(xì)胞數(shù)是否明顯增高，有無特征性散點(diǎn)圖，其次，分析IG%和幼稚細(xì)胞百分比。有白細(xì)胞數(shù)明顯增高，CML特征性散點(diǎn)圖，應(yīng)當(dāng)考慮是CML；有白細(xì)胞數(shù)輕度增高，IG%增高，散點(diǎn)圖粒細(xì)胞區(qū)域范圍變大，無法分類，應(yīng)當(dāng)考慮AML；有白細(xì)胞數(shù)中度增高，IG%正?；蜉p度增高，散點(diǎn)圖出現(xiàn)淋巴細(xì)胞區(qū)域散點(diǎn)往右上方延伸，應(yīng)考慮ALL。研究發(fā)現(xiàn)，白細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)的綜合分析對(duì)白血病篩查和鑒別有重要的應(yīng)用價(jià)值。

但有時(shí)一些特殊病例可能沒有明顯的規(guī)律，亦存在血細(xì)胞分析儀對(duì)外周血幼稚細(xì)胞漏檢的情況[12]，還需結(jié)合血片鏡檢一起考慮。血涂片檢查在白血病診斷中有重要意義，較多血液病的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，血涂片優(yōu)于骨髓片[13,14]，一些血液病的定義和診斷也是以外周血細(xì)胞異常為主要依據(jù)的[15]。另外，本次研究只是在利用血液分析儀已有的一些定量參數(shù)客觀分析，對(duì)血液病進(jìn)行篩查，給血片鏡檢細(xì)胞分類某些方向性指導(dǎo)，明確診斷還需進(jìn)一步檢查。

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