陳麗娟，羅俐鶯，魏權(quán)，詹燕婷

(龍巖人民醫(yī)院，福建 龍巖364000)

UF-1000i應(yīng)用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞/核酸熒光染料技術(shù)，對(duì)各種有形成分的細(xì)胞膜、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行特異性的核酸熒光染色;且具有獨(dú)立的雙檢測(cè)通道(沉渣通道和細(xì)菌通道)，能快速提供 WBC、RBC、EC、CAST 和 BACT 等參數(shù)定量報(bào)告[1]。但按照CNAS:2014醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則，要求臨床實(shí)驗(yàn)室在儀器投入使用前，需對(duì)分析系統(tǒng)進(jìn)行性能驗(yàn)證，要達(dá)制造廠(chǎng)商規(guī)定的性能要求方可使用[2]，以達(dá)到實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化管理的要求，這樣才能保證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量。因此，筆者依據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)頒布的H56-A文件[3]及UF-1000i全自動(dòng)尿液有形成分析儀病例研究手冊(cè)[4]和UF-1000i說(shuō)明書(shū)對(duì)本院新購(gòu)置待投入使用的 UF-1000i主要定量參數(shù)(RBC、WBC、EC、CAST和BACT)的批內(nèi)精密度、批間精密度、準(zhǔn)確度、攜帶污染率、線(xiàn)性范圍、檢測(cè)模式比對(duì)分析和生物區(qū)間參考范圍進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)[5-7]。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑 Sysmex UF-1000i尿液有形成分全自動(dòng)分析儀及原廠(chǎng)配套試劑和尿液有形成分質(zhì)控物。

1.2 樣本來(lái)源 采用2013年9月到10月在本院住院、門(mén)診患者和健康體檢人員新鮮尿液標(biāo)本，2h內(nèi)完成測(cè)定[8]。

1.3 評(píng)價(jià)方法 將UF-1000i尿分析儀按使用要求調(diào)整至最佳檢測(cè)狀態(tài)，再進(jìn)行如下各性能參數(shù)的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。

1.3.1 批內(nèi)精密度 選用高、中、低三個(gè)濃度水平的新鮮尿液分別于當(dāng)日用UF-1000i重復(fù)測(cè)定11次，棄用第1次檢測(cè)數(shù)據(jù)，計(jì)算后10次測(cè)定結(jié)果的變異系數(shù)CV值。

1.3.2 批間精密度 用高、低兩個(gè)水平濃度的質(zhì)控(按說(shuō)明書(shū)要求混勻)，連續(xù)測(cè)定20d，計(jì)算其變異系數(shù)CV值。

1.3.3 準(zhǔn)確度 用高、低兩個(gè)水平濃度的質(zhì)控(按說(shuō)明書(shū)要求混勻)，用UF-1000i連續(xù)測(cè)定5次，計(jì)算平均值，看是否在質(zhì)控范圍內(nèi)，質(zhì)控批號(hào)：YS3017。

1.3.4 殘留率 取高濃度新鮮尿液樣本(約含RBC：5000 個(gè)/μl,BACT：10000 個(gè)/μl)，混合均勻后連續(xù)測(cè)定三次，測(cè)定值分別為H1、H2、H3；再取低濃度尿樣(約含 RBC：20 個(gè)/μl,BACT：150 個(gè)/μl)，連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為L(zhǎng)1、L2、L3。按以下公式計(jì)算攜帶污染率：(CV%)=[(L1-L3)/(H3-L3)]×100%。

1.3.5 線(xiàn)性范圍 取富含紅細(xì)胞、白細(xì)胞、細(xì)菌和上皮細(xì)胞的尿樣 (RBC約10000個(gè)/μl、WBC約6000個(gè)/μl、BACT 約 10000 個(gè)/μl、EC 約 220 個(gè)/μl)，以鞘液做稀釋液， 進(jìn)行 1：2，1：4，1：16， 1：64，1：256(EC 稀釋度為 1：2，1：4，1：8，1：16，1：32;) 稀釋?zhuān)飨♂岦c(diǎn)均各測(cè)3次，取其均值為實(shí)測(cè)值；以稀釋計(jì)算值作為理論值。各稀釋尿樣的實(shí)測(cè)值與理論值進(jìn)行線(xiàn)性回歸和相關(guān)分析 ，計(jì)算公式。要求a值在1±0.05 范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù) r≥0.975。

1.3.6 檢測(cè)模式比對(duì) 準(zhǔn)備10份新鮮尿液樣本，濃度覆蓋生物參考區(qū)間，整個(gè)實(shí)驗(yàn)在樣本老化之前完成。在手動(dòng)模式和自動(dòng)模式下檢測(cè)這10份樣本，每個(gè)樣本在各個(gè)模式下檢測(cè)3次，取其均值，計(jì)算手動(dòng)模式和自動(dòng)模式之間的結(jié)果偏差百分比。

1.3.7 生物參考區(qū)間驗(yàn)證 隨機(jī)選擇40例健康人群的樣本(男女各20例)，檢測(cè)結(jié)果至少90%在擬定的參考區(qū)間內(nèi),說(shuō)明實(shí)驗(yàn)室使用的參考區(qū)間有效。

1.4 統(tǒng)計(jì)軟件 用EXECEL 2010進(jìn)行線(xiàn)性回歸和相關(guān)分析。

2 結(jié)果

UF-1000i各項(xiàng)參數(shù) (RBC、WBC、EC、CAST 和BACT)檢測(cè)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果如下：(1)批內(nèi)精密度見(jiàn)表 1；(2)批間精密度見(jiàn)表 2；(3)準(zhǔn)確度見(jiàn)表 3；(4)攜帶污染率見(jiàn)表4；(5)線(xiàn)性分析見(jiàn)表5；(6)檢測(cè)模式比對(duì)分析見(jiàn)表6；(7)生物區(qū)間參考范圍驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表7。

表1 批內(nèi)精密度 [個(gè)/μl(CV%)]

表2 批間精密度單位：[個(gè)/μl(CV%)]

表3 準(zhǔn)確度(n=5)

表4 攜帶污染率

表5 線(xiàn)性分析

表6 檢測(cè)模式比對(duì)分析單位：(個(gè)/μl)

表7 生物參考區(qū)間(個(gè)/μl)

3 討論

由以上驗(yàn)證結(jié)果可知，我院購(gòu)進(jìn)的UF-1000i 5項(xiàng)主要定量參數(shù) (RBC、WBC、EC、CAST和BACT)指標(biāo)的批內(nèi)、批間精密度、線(xiàn)性、檢測(cè)模式比對(duì)、殘留率、準(zhǔn)確度、檢測(cè)模式比對(duì)分析的性能指標(biāo)均符合廠(chǎng)商標(biāo)示的性能參數(shù)及質(zhì)控品的要求[9]。本科室還同時(shí)對(duì)Sysmex公司提供的生物參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證， 結(jié)果 RBC 、WBC、EC、 CAST、BACT 均在要求范圍內(nèi)。在線(xiàn)性范圍驗(yàn)證上，由于紅細(xì)胞上限值的樣本難于獲得，我們通過(guò)在尿液樣本中加入適量的EDTA-K2抗凝血作為紅細(xì)胞高值樣本[10,11]。在CAST方面，我院實(shí)在難以獲得廠(chǎng)家高限值的樣本，所以該項(xiàng)目的線(xiàn)性未加以驗(yàn)證，而是用高值的質(zhì)控樣做準(zhǔn)確度等參數(shù)的驗(yàn)證。

雖然UF-1000i具有規(guī)范化、方便快捷、檢測(cè)率高的優(yōu)點(diǎn)，但由于其基本原理仍是根據(jù)有形成分的大小及核酸量的多寡進(jìn)行非形態(tài)分析，尿沉渣成分復(fù)雜，有時(shí)受干擾物質(zhì)影響，且儀器的靈敏度高易受干擾，易致假陽(yáng)性率高，所以其結(jié)果只能供篩選之用[12，13]，不能完全取代傳統(tǒng)的化學(xué)檢查和尿有形成份顯微鏡檢查，比如：UF-1000i管型的假陽(yáng)性率高，且不能將病理管型進(jìn)一步分類(lèi)，而尿管型的數(shù)量和類(lèi)型對(duì)急性腎炎和某些腎外疾病[14]有重要的診斷價(jià)值[15,16]。因此，UF-1000i提供的陰性結(jié)果可以免檢，但為陽(yáng)性時(shí)，必須以鏡檢復(fù)檢為準(zhǔn)，以免引起臨床不必要的誤診。

綜上所述，我院新購(gòu)進(jìn)的UF-1000i尿液有形成分全自動(dòng)分析儀其精密度良好，準(zhǔn)確度高，線(xiàn)性等各項(xiàng)性能指標(biāo)均符合要求，可應(yīng)用于臨床尿液分析的篩查實(shí)驗(yàn)。

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