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        八寶驚風(fēng)散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

        2015-06-05 09:33:07隆穎栗建明孫麗麗王洪皓喬莉
        中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2015年12期
        關(guān)鍵詞:冰片梔子天麻

        隆穎栗建明孫麗麗王洪皓喬莉▲

        1.廣東省食品藥品檢驗(yàn)所,廣州510180;2.廣州市藥品檢驗(yàn)所,廣州510160

        八寶驚風(fēng)散質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

        隆穎1栗建明2孫麗麗1王洪皓1喬莉1▲

        1.廣東省食品藥品檢驗(yàn)所,廣州510180;2.廣州市藥品檢驗(yàn)所,廣州510160

        目的完善八寶驚風(fēng)散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用顯微鑒別對(duì)鉤藤、防風(fēng)、梔子進(jìn)行定性鑒別,采用薄層色譜法對(duì)黃芩、冰片、人工牛黃、梔子進(jìn)行定性鑒別,采用高效液相色譜法對(duì)八寶驚風(fēng)散中的天麻素進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果顯微特征專屬性強(qiáng),薄層色譜斑點(diǎn)顯色清晰,陰性無(wú)干擾,專屬性強(qiáng)。天麻素在0.0252~5.0400μg檢測(cè)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,r=0.9996,平均回收率為97.4%,RSD為0.5%(n=6)。結(jié)論建立的分析方法簡(jiǎn)便可行,專屬性強(qiáng),可用于八寶驚風(fēng)散的質(zhì)量控制。

        八寶驚風(fēng)散;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);顯微鑒別;薄層色譜;高效液相色譜

        八寶驚風(fēng)散由天麻、天竺黃、鉤藤、人工牛黃、梔子、珍珠、沉香、冰片、防風(fēng)等19味藥材組成,具有祛風(fēng)化痰、退熱鎮(zhèn)驚的功效,用于小兒驚風(fēng),發(fā)熱咳嗽,嘔吐痰涎等癥狀[1]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為部頒標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑)第20冊(cè),標(biāo)準(zhǔn)編號(hào):WS3-B-3742-98,原標(biāo)準(zhǔn)包括性狀項(xiàng)、顯微鑒別(川貝母、茯苓、黃芩、珍珠)、2個(gè)理化鑒別、丁香的薄層鑒別和檢查項(xiàng),顯然,原有標(biāo)準(zhǔn)不能很好地控制質(zhì)量,為此,筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)[2-20]對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)重新進(jìn)行研究,新增加鉤藤、防風(fēng)、梔子的顯微鑒別和黃芩、冰片、人工牛黃及梔子的薄層鑒別,同時(shí)建立八寶驚風(fēng)散中天麻素含量的測(cè)定方法,以更全面有效地控制本品質(zhì)量。

        1 儀器與試藥

        Olympus BX41-32P02奧林巴斯顯微鏡,Waters 2695-2487、Agilent 1100高效液相色譜儀,Sartorius-CP224S電子天平,昆山KQ-300DA超聲波清洗儀,薄層硅膠G薄層板(Merck預(yù)制板)。

        黃芩苷對(duì)照品(批號(hào):110715-200805);黃芩對(duì)照藥材(批號(hào):120955-200607);冰片對(duì)照品(批號(hào):110743-200303);膽酸對(duì)照品(批號(hào):100078-200414);梔子苷對(duì)照品(批號(hào):110749-200512);天麻素對(duì)照品(批號(hào)110807-200205)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。1005010、1006012、0604006由廣東聯(lián)康藥業(yè)有限公司提供;100517由江西民濟(jì)藥業(yè)有限公司提供,陰性對(duì)照由廣東聯(lián)康藥業(yè)有限公司提供。試劑:乙腈為德國(guó)默克MERCK色譜純,水為液相色譜用超純水;其他為分析純。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 顯微特征鑒別[3-5]

        取本品,置顯微鏡下觀察:草酸鈣砂晶存在于薄壁細(xì)胞中,有時(shí)含晶細(xì)胞連接成行(鉤藤)。油管含金黃色分泌物,直徑17~60μm(防風(fēng))。種皮石細(xì)胞顏色多為黃色或淡棕色,表面現(xiàn)為長(zhǎng)多角形或方形,也有部分形狀不規(guī)則,細(xì)胞壁稍厚,層紋明顯,多為圓形,胞腔內(nèi)含棕紅色物(梔子)(圖1)。

        圖1 顯微鑒別圖

        2.2 薄層色譜鑒別

        2.2.1 黃芩的薄層色譜鑒別[6-8]

        稱取樣品約5 g,用50ml甲醇回流提取60 min,提取液濾過(guò),置水浴上蒸干,殘?jiān)?0ml實(shí)驗(yàn)用水,微熱使溶解,放冷至室溫,加石油醚Ⅱ(60~90℃)30ml振搖提取,棄去石油醚Ⅱ提取液,分取下層水液,用鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至2,再加乙酸乙酯振搖提取兩次(30、30ml),合并乙酸乙酯提取液,置水浴上蒸干,殘?jiān)?ml甲醇溶解,制成供試品溶液。另稱取黃芩對(duì)照藥材約0.15 g,按上述供試品溶液的提取方法制成黃芩對(duì)照藥材溶液。稱取黃芩苷對(duì)照品約2mg,加入1ml甲醇溶解,制成黃芩苷對(duì)照品溶液。稱取黃芩陰性樣品約5 g,按上述供試品溶液的提取方法同法制成黃芩陰性對(duì)照溶液。按照中國(guó)藥典一部附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn),吸取黃芩苷對(duì)照品溶液2μl,黃芩供試品溶液和黃芩陰性對(duì)照溶液各1μl、黃芩對(duì)照藥材溶液1μl,點(diǎn)狀點(diǎn)樣于同一Merck硅膠G預(yù)制板上,展開劑為乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(7∶3∶1∶1),置展開缸中預(yù)飽和30min后展開,取出薄層板,揮干展開劑,噴以顯色劑(1%三氯化鐵乙醇溶液)。結(jié)果顯示,試品溶液色譜中,在與黃芩苷對(duì)照品和黃芩對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的色譜斑點(diǎn),且黃芩陰性對(duì)照在相應(yīng)位置上無(wú)干擾(圖2)。

        圖2 黃芩薄層色譜鑒別圖

        2.2.2 冰片的薄層色譜鑒別[9-12]

        取本品4.6 g,加石油醚(60~90℃)25ml,置超聲波清洗儀中超聲提取15min,提取液濾過(guò),濾渣備用,濾液揮至約0.5ml,即得。稱取冰片對(duì)照品約3mg,加1ml乙酸乙酯溶解作為冰片對(duì)照品溶液。稱取冰片陰性樣品4.6 g,按上述供試品溶液的提取方法,同法制成冰片陰性對(duì)照溶液。按照中國(guó)藥典一部附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn),分別吸取冰片供試品溶液、冰片對(duì)照品溶液和冰片陰性對(duì)照溶液3μl,點(diǎn)狀點(diǎn)樣于同一Merck硅膠G預(yù)制板上,展開劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯(9∶1),置展開缸中展開,取出薄層板,揮干展開劑,噴以顯色劑(5%香草醛硫酸溶液)后,將薄層板在110℃加熱5~10min。結(jié)果顯示,供試品溶液色譜中,在與冰片對(duì)照品色譜斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上,顯兩個(gè)相同顏色的色譜斑點(diǎn),冰片陰性對(duì)照在相應(yīng)位置上無(wú)干擾(圖3)。

        圖3 冰片薄層色譜鑒別圖

        2.2.3 人工牛黃的薄層色譜鑒別[2,13-14]

        稱取膽酸對(duì)照品約2mg,加1ml甲醇溶解制成膽酸對(duì)照品溶液。另稱取人工牛黃陰性樣品約5 g,按上述2.2.1黃芩供試品溶液的提取方法,制成人工牛黃陰性對(duì)照溶液。按照中國(guó)藥典一部附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn),分別吸取2.2.1黃芩鑒別項(xiàng)下的供試品溶液、人工牛黃陰性對(duì)照溶液和膽酸對(duì)照品溶液各3μl,點(diǎn)狀點(diǎn)樣于同一Merck硅膠G預(yù)制板上,展開劑為正己烷-乙酸乙酯-36%乙酸-甲醇(20∶25∶2∶3)的上層溶液,置展開缸中展開,取出薄層板,揮干展開劑,噴以顯色劑(10%硫酸乙醇溶液)后,薄層板置105℃加熱至斑點(diǎn)顏色清晰。結(jié)果顯示,供試品溶液色譜中,在與膽酸對(duì)照品色譜斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的色譜斑點(diǎn),人工牛黃陰性對(duì)照在相應(yīng)位置上無(wú)干擾(圖4)。

        圖4 人工牛黃薄層色譜鑒別圖

        2.2.4 梔子的薄層色譜鑒別[15-16]

        取2.2.2冰片鑒別項(xiàng)下的濾渣,加入30ml甲醇,置超聲波清洗儀中超聲提取20 min,提取液濾過(guò),置水浴上蒸干,殘?jiān)?0 ml實(shí)驗(yàn)用水,置水浴上微熱使溶解,加入30 m l正丁醇(水飽和)振搖提取,正丁醇提取液置水浴上蒸干,殘?jiān)?m l甲醇溶解,再加入1 g中性氧化鋁(100~200目),在水浴上攪拌均勻,加在中性氧化鋁柱(100~200目,柱內(nèi)徑為1 cm,2 g)上,加40%甲醇50 ml于中性氧化鋁柱中進(jìn)行洗脫,收集40%甲醇洗脫液,置水浴上蒸干,殘?jiān)?ml甲醇溶解,制成供試品溶液。另稱取梔子苷對(duì)照品約2mg,加1m l甲醇溶解,制成梔子苷對(duì)照品溶液。稱取梔子陰性樣品約4.6 g,按上述供試品溶液的提取方法,制成梔子陰性對(duì)照溶液。按照中國(guó)藥典一部附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn),分別吸取梔子供試品溶液、梔子陰性對(duì)照溶液和梔子苷對(duì)照品溶液各5μl,點(diǎn)狀點(diǎn)樣于同一Merck硅膠G預(yù)制薄層板上,展開劑為二氯甲烷-甲醇(4∶1),置展開缸中展開,取出薄層板,揮干展開劑,噴以顯色劑(10%硫酸乙醇溶液)后,薄層板置105℃加熱至斑點(diǎn)顏色清晰。結(jié)果顯示,供試品溶液色譜中,在與梔子苷對(duì)照品色譜斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的色譜斑點(diǎn),梔子陰性對(duì)照在相應(yīng)位置上無(wú)干擾(圖5)。

        圖5 梔子薄層色譜鑒別圖

        2.3 天麻素的含量測(cè)定[2,17-20]

        2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

        色譜柱:Analytical C18(150 mm×4.6 mm,5μm);以乙腈-0.05%磷酸溶液(3∶97)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。進(jìn)樣體積為20μl。

        2.3.2 溶液的制備

        2.3.2.1 天麻素對(duì)照品溶液的制備稱取天麻素對(duì)照品0.01008 g,置20ml容量瓶中,加流動(dòng)相溶解,并稀釋至刻度,制成天麻素對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.504 mg/ml)。精密吸取天麻素對(duì)照品儲(chǔ)備液2 ml,置50ml容量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,制成天麻素對(duì)照品溶液(20.16μg/ml)。

        2.3.2.2 樣品溶液的制備取樣品混勻,取約2 g,精密稱定,置于100 ml具塞錐形瓶中,再精密加入50 ml稀乙醇溶液,密塞,并稱定重量,置超聲波清洗儀內(nèi)超聲提?。üβ蕿?00W,頻率為45 kHz)60 min,取出錐形瓶,放冷至室溫,再稱定錐形瓶重量,用稀乙醇補(bǔ)足超聲過(guò)程中損失的重量,將溶液搖勻,濾過(guò)。再精密吸取上述續(xù)濾液10m l,置于水浴上蒸至近干,殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解并轉(zhuǎn)移至10m l容量瓶中,加流動(dòng)相定容至刻度,即得。

        2.3.2.3 天麻陰性對(duì)照溶液的制備取廣東聯(lián)康藥業(yè)有限公司提供天麻陰性對(duì)照2 g,同2.3.2.2樣品溶液的制備方法制備天麻陰性對(duì)照溶液。

        2.3.3 專屬性試驗(yàn)

        取上述樣品溶液、天麻素對(duì)照品溶液及天麻陰性對(duì)照溶液,按2.3.1色譜條件進(jìn)樣,記錄色譜圖,結(jié)果天麻陰性對(duì)照溶液在天麻素對(duì)照品保留時(shí)間相同的位置上未見(jiàn)色譜峰,表明天麻陰性對(duì)照無(wú)干擾,方法專屬性良好(圖6)。

        圖6 天麻素液相色譜圖

        2.3.4 線性關(guān)系

        取天麻素對(duì)照品適量,精密稱定,加流動(dòng)相制成對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.504mg/ml)。再分別精密吸取適量,加稀乙醇制成系列天麻素對(duì)照品溶液。精密吸取上述系列天麻素對(duì)照品溶液各20μl,注入高效液相色譜儀測(cè)定,以天麻素對(duì)照品進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)峰面積(Y)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得線性方程Y= 1769844X-12541;r=0.9996。表明天麻素對(duì)照品在0.0252~5.0400μg檢測(cè)范圍內(nèi),進(jìn)樣量與對(duì)應(yīng)的峰面積具良好的線性關(guān)系。

        2.3.5 精密度試驗(yàn)

        取同一天麻素對(duì)照品溶液(濃度為20.16μg/ml),連續(xù)測(cè)定6次,記錄天麻素色譜峰面積,計(jì)算平均峰面積的RSD=0.3%,表明所用儀器的精密度良好。

        2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

        取同一批八寶驚風(fēng)散樣品混勻,稱取約2 g,平行稱取6份,精密稱定,按照2.3.2.2樣品溶液的制備方法制備樣品溶液,進(jìn)樣,測(cè)定,用外標(biāo)法計(jì)算樣品中天麻素的含量,結(jié)果天麻素含量為0.370 mg/g,RSD= 0.9%(n=6),表明擬定實(shí)驗(yàn)方法的重復(fù)性良好。

        2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

        取同一批樣品,按2.3.2.2樣品溶液的制備方法制備樣品溶液,在室溫放置,分別在0、1、4、6、12、24 h進(jìn)樣,測(cè)定,結(jié)果天麻素的平均峰面積的RSD=1.6%(n=6),表明樣品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.3.8 回收率試驗(yàn)

        取同一批樣品混勻,精密稱定樣品約1 g,平行稱取6份樣品,置于100ml具塞錐形瓶中,精密加入天麻素對(duì)照品適量,按2.3.2.2樣品溶液的制備方法制備溶液,計(jì)算天麻素的回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知,天麻素平均回收率為97.4%,RSD為0.5%,說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度較好。

        表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

        2.3.9 樣品測(cè)定

        取4批樣品,按2.3.2.2樣品溶液的制備方法制備溶液,測(cè)定天麻素的含量,結(jié)果批號(hào)為1005010、1006012、0604006、100517的樣品中天麻素的含量分別為0.45、0.44、0.37、0.11mg/g。

        3 討論

        3.1 色譜柱的選擇

        參照2010年版《中國(guó)藥典》一部天麻[2]項(xiàng)下的含量測(cè)定方法,采用C18鍵合硅膠為填料的反相色譜柱。同時(shí)考察本品在使用不同色譜柱測(cè)定的情況下,天麻素含量測(cè)定結(jié)果受影響的程度。分別采用Hypersil ODSC18、Analytical C18、Kromasil C18三種品牌的色譜柱測(cè)定。結(jié)果顯示,用三種品牌的色譜柱測(cè)定,結(jié)果無(wú)明顯差異,表明擬定方法耐用性好。

        3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

        中國(guó)藥典2010年版一部天麻項(xiàng)下的檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在200~400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描,結(jié)果在220、270 nm波長(zhǎng)處均有最大吸收,在220 nm波長(zhǎng)處的靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于270 nm波長(zhǎng),故首選220 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

        3.3 提取方法的選擇

        試驗(yàn)研究過(guò)程中考察了不同的提取溶劑(甲醇、稀乙醇、水)和提取方法(加熱回流、超聲),結(jié)果表明采用稀乙醇超聲提取,操作簡(jiǎn)便,提取效率高且提取雜質(zhì)少;考查了不同體積的提取溶劑(25、50、100 m l)和不同的超聲時(shí)間(30、60、90 min)對(duì)提取效率的影響,結(jié)果表明50 ml稀乙醇提取效果好且色譜的響應(yīng)值適中;不同超聲提取時(shí)間效果相差不大,最終確定文中的供試品提取方法。方法學(xué)考察結(jié)果表明,所建立的方法簡(jiǎn)便,專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好,可作為八寶驚風(fēng)散的質(zhì)量控制。

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        Study on quality standard of Babao Jingfeng powder

        LONG Ying1LIJian-ming2SUN Li-li1WANG Hong-hao1QIAO Li1▲
        1.Institute of Food and Drug Control of Guangdong Province,Guangzhou 510180,China;2.Institute of Drug Control of Guangzhou City,Guangzhou 510160,China

        Objective To perfect the quality standard of Babao Jingfeng powder.M ethods Themicroscopic characteristics of Uncaria tomentosa,Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk.,Gardenia jasminoides Elliss were developed bymicroscope.Scutellaria baicalensis,Borneolum Syntheticum,Bovis Calculus Artifactus,Gardenia jasminoides Elliss were identified by TLC.The content of gastrodin in Babao Jingfeng powder was determined by HPLC.Results The microscopic characteristics were exclusive.TLC spots were clear and well-separated without interference from negative sample.The linear range of gastrodin was 0.0252-5.0400μg(r=0.9996)and the average recovery rate was 97.4%,RSD=0.5%(n=6). Conclusion Themethod is simple and highly accurate.It can be used for the quality control of Babao Jingfeng powder.

        Babao Jingfeng powder;Quality standard;Microscopical identification;TLC;HPLC

        R931.5

        A

        1674-4721(2015)04(c)-0017-05

        2015-01-20本文編輯:李亞聰)

        國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)提高研究課題(99)

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