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        不同地區(qū)產(chǎn)牛膝齊墩果酸、蛻皮甾酮含量的比較研究

        2015-06-05 09:33:07潘琦穆春旭張建軍
        中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2015年12期
        關(guān)鍵詞:沁陽齊墩牛膝

        潘琦 穆春旭 張建軍

        遼寧醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院,沈陽110101

        不同地區(qū)產(chǎn)牛膝齊墩果酸、蛻皮甾酮含量的比較研究

        潘琦 穆春旭 張建軍

        遼寧醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院,沈陽110101

        目的測(cè)定不同產(chǎn)地牛膝的皂苷(齊墩果酸)、蛻皮甾酮含量,比較不同產(chǎn)地牛膝的皂苷(齊墩果酸)、蛻皮甾酮含量的差異。方法采用高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè),十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱,齊墩果酸測(cè)定甲醇為流動(dòng)相,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm;蛻皮甾酮測(cè)定乙腈為流動(dòng)相,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm;進(jìn)樣量均為10μl。結(jié)果河南沁陽產(chǎn)牛膝皂苷(齊墩果酸)、蛻皮甾酮的含量最高,質(zhì)量最好,河南安陽、安徽太和、云南曲靖、沈陽地區(qū)產(chǎn)牛膝皂苷(齊墩果酸)、蛻皮甾酮的含量較高,均符合國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論河南沁陽產(chǎn)牛膝的質(zhì)量最好;沈陽等地區(qū)產(chǎn)牛膝質(zhì)量較好,符合《中國(guó)藥典》規(guī)定,適合藥用。

        牛膝;齊墩果酸;蛻皮甾酮;含量比較

        中藥材牛膝來源為莧科牛膝屬多年生草本植物牛膝(Achyranthesbidentata Bl.)的干燥根。牛膝含皂苷(皂苷水解得齊墩果酸)、多糖、羥基促蛻皮甾酮和牛膝甾酮、生物堿、多種微量元素[1]等多種藥用成分,其中所含生物堿,具有良好的降壓作用,所含的脫皮甾酮能改善肝功能,具有降低血漿膽固醇、增強(qiáng)細(xì)胞活性的作用,富含的牛膝多糖有明顯的增強(qiáng)免疫功能的作用[2],具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、逐瘀通經(jīng)、引血下行、利尿通淋等作用[3],主要用于治療腰膝酸痛、筋骨無力、肝陽眩暈、痛經(jīng)閉經(jīng)、牙痛口瘡、吐血等癥,日用量為4.5~9 g。藥用牛膝需冬季莖葉枯萎時(shí)采挖,去除莖葉,除凈泥沙及須根。按根的粗細(xì)、長(zhǎng)短不同分等,分別捆成小把,曬至半干后,用硫磺熏兩次,將頂端切齊,再曬至全干[4]。牛膝主產(chǎn)于河南武陟、沁陽、焦作等地,奉為道地藥材,是著名的四大懷藥之一,又稱懷牛膝。河北、山東、山西、安徽、江西、湖南、四川、云南、貴州等省亦產(chǎn),均為栽培品。全國(guó)牛膝以河南產(chǎn)量最多,占全國(guó)總產(chǎn)量的50%以上,河南產(chǎn)的懷牛膝質(zhì)量最好[5]。最近一段時(shí)間沈陽周邊部分縣區(qū)有人嘗試種植藥用植物牛膝,植物長(zhǎng)勢(shì)很好,采收藥材外觀性狀也較好,但主要成分含量尚不清楚。本文主要針對(duì)沈陽地區(qū)產(chǎn)牛膝與市售不同產(chǎn)區(qū)牛膝,分別采用高效液相色譜(HPLC)紫外測(cè)定法[6]及《中國(guó)藥典》2010年版牛膝項(xiàng)下含量測(cè)定法對(duì)不同產(chǎn)地牛膝的皂苷(齊墩果酸)、蛻皮甾酮含量進(jìn)行測(cè)定,同時(shí)比較不同產(chǎn)區(qū)牛膝的皂苷(齊墩果酸)、蛻皮甾酮的含量差異及臨床藥用價(jià)值。

        1 材料與方法

        1.1 藥材

        牛膝藥材采自遼寧省沈陽市法庫縣馮貝堡鄉(xiāng)和本校(沈陽市蘇家屯區(qū))栽培品,均為1年生。另外,在藥店購(gòu)得牛膝飲片,產(chǎn)地分別為河南安陽、河南沁陽、安徽太和、云南曲靖等地。牛膝藥材及牛膝飲片經(jīng)本院胡德奇教授鑒定均為正品。

        1.2 試藥

        齊墩果酸(上海源葉生物科技公司,批號(hào):YN110 1SA12),蛻皮甾酮(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):111638-201208),水為純化水,甲醇、乙腈為色譜純,其他試劑均為分析純。

        1.3 儀器與設(shè)備

        美國(guó)Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司),四元泵(美國(guó)安捷倫公司),在線脫氣機(jī)系統(tǒng)(美國(guó)安捷倫公司),G1314A型紫外檢測(cè)器(VWD)(美國(guó)安捷倫公司),G217OBALC化學(xué)工作站(美國(guó)安捷倫公司)。十萬分之一電子天平(日本島津公司AEL-40SM)。

        1.4 檢測(cè)方法

        1.4.1 色譜條件色譜柱:美國(guó)Agilent XDB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5μm),填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠,齊墩果酸測(cè)定以甲醇-水為流動(dòng)相,流速:0.8 ml/min,柱溫28℃,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm,進(jìn)樣量10μl;蛻皮甾酮測(cè)定以乙腈-水-甲酸(16∶84∶0.1)為流動(dòng)相,流速:1.0 ml/min,柱溫30℃,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm;進(jìn)樣量10μl。理論板數(shù)應(yīng)不低于4000[7](按齊墩果酸、蛻皮甾酮峰面積計(jì)算)。

        1.4.2 對(duì)照品溶液的制備

        1.4.2.1 齊墩果酸對(duì)照品溶液的制備精確稱取適量的齊墩果酸對(duì)照品,用甲醇配制成濃度約100μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液,備用[8]。

        1.4.2.2 蛻皮甾酮對(duì)照品溶液的制備精確稱取適量的蛻皮甾酮對(duì)照品,用甲醇配制成濃度約100μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)液,備用[9]。

        1.4.3 樣品溶液的制備

        取6批牛膝樣品,分別粉碎過3號(hào)篩,各取約1.0 g,60℃烘干,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加50%甲醇40ml,密塞,采用超聲方法處理40min,放置至冷,過濾,濾液置于容量瓶(100 ml)中,用50%乙醇分別洗滌容器和殘?jiān)?,合并濾液和洗液于100ml容量瓶中,加50%乙醇定容,搖勻[10]。經(jīng)過0.45μm微孔濾膜過濾,精密吸取濾液1 ml于10ml容量瓶中,加50%乙醇定容,搖勻,作為齊墩果酸樣品溶液。

        取6批樣品各約1.0 g,60℃烘干,粉碎,過3號(hào)篩,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加水飽和正丁醇30ml,密塞,浸泡過夜,超聲處理30min[11],濾過,用甲醇10ml分次洗滌容器和殘?jiān)喜V液和洗液,蒸干,加少量甲醇溶解殘?jiān)浦?0ml容量瓶中,加甲醇定容,搖勻,即為蛻皮甾酮測(cè)試樣品。

        1.4.4 樣品檢測(cè)

        分別精密吸取10μl上述對(duì)照品溶液和牛膝樣品溶液,進(jìn)樣,用高效液相色譜儀按“2.1項(xiàng)”的色譜條件進(jìn)行含量的測(cè)定[12]。

        2 結(jié)果

        2.1 不同產(chǎn)地牛膝的皂苷(齊墩果酸)、蛻皮甾酮含量測(cè)定結(jié)果

        將上述“2.3項(xiàng)”制備的樣品溶液采用“2.1項(xiàng)”的色譜條件,對(duì)不同產(chǎn)地牛膝的皂苷(齊墩果酸)、蛻皮甾酮含量進(jìn)行測(cè)定,得到如下齊墩果酸、蛻皮甾酮標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品及牛膝樣品的色譜圖(圖1~圖4)。

        圖1 齊墩果酸對(duì)照品色譜圖

        圖2 牛膝樣品色譜圖

        圖3 蛻皮甾酮對(duì)照品色譜圖

        圖4 牛膝樣品色譜圖

        2.2 牛膝樣品齊墩果酸、蛻皮甾酮的含量

        根據(jù)測(cè)定的不同產(chǎn)地牛膝皂苷(齊墩果酸)、蛻皮甾酮的峰面積,計(jì)算出供試樣品中齊墩果酸、蛻皮甾酮的含量,計(jì)算結(jié)果見表1。

        表1 牛膝樣品齊墩果酸、蛻皮甾酮的含量(%)

        3 討論

        牛膝作為藥用植物臨床應(yīng)用廣泛,藥用價(jià)值高,開發(fā)利用前景廣闊,有較高的經(jīng)濟(jì)效益。通過對(duì)不同產(chǎn)地牛膝中齊墩果酸、蛻皮甾酮含量的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地牛膝中齊墩果酸、蛻皮甾酮的含量有所差別[13]。

        檢測(cè)結(jié)果顯示,河南沁陽產(chǎn)的牛膝中有效成分皂苷(齊墩果酸)、蛻皮甾酮的含量最高,質(zhì)量最好;與河南懷慶府(武涉、博愛、沁陽等地)所產(chǎn)為道地藥材的評(píng)價(jià)一致;有很好的臨床藥用價(jià)值[14]。

        河南安陽產(chǎn)的牛膝齊墩果酸、蛻皮甾酮的含量略低于河南沁陽;安徽太和產(chǎn)的牛膝齊墩果酸含量略低于河南沁陽,蛻皮甾酮含量略高;沈陽地區(qū)產(chǎn)的牛膝齊墩果酸、蛻皮甾酮含量均較高;云南曲靖產(chǎn)的牛膝齊墩果酸、蛻皮甾酮含量均較低,質(zhì)量略差,以上樣品均符合《中國(guó)藥典》(2010年版)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)[15]。

        近年沈陽周邊部分縣區(qū)有人嘗試種植藥用植物牛膝,所栽培的牛膝與市售產(chǎn)自河南安陽、河南沁陽等地的牛膝相比外觀性狀差異不大,均符合藥用要求;其有效成分皂苷(齊墩果酸)、蛻皮甾酮的含量與河南安陽、安徽太和所產(chǎn)含量相當(dāng),符合國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)(2010年版)。同時(shí)沈陽地區(qū)產(chǎn)牛膝產(chǎn)量較高,藥材性狀良好,有效成分含量較高,藥材質(zhì)量較好,適合臨床藥用,有較好的開發(fā)利用前景。

        [1]趙婉婷,孟大利,李銑,等.牛膝的化學(xué)成分[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2007,15(4):207.

        [2]孟大利,李銑.中藥牛膝化學(xué)成分和藥理活性的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥物化學(xué)雜志,2001,11(2):120-124.

        [3]黃志芳,黃志紅,胡吉林,等.土牛膝中齊墩果酸、牛膝多糖的提取與鑒定[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2010,5(17):6-7.

        [4]胡德奇,劉志梅,張建軍,等.遼寧省朝陽地區(qū)產(chǎn)黃芩與市售黃芩黃芩苷含量比較研究[J].中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng),2012,22(4):574-575.

        [5]張翠英,梁生旺,張廣強(qiáng).不同產(chǎn)地牛膝中蛻皮甾酮的含量測(cè)定[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2001,36(10):699-700.

        [6]王源園,張尊建,王興旺,等.牛膝的HPLC/UV/MS指紋圖譜研究[J].中藥材,2003,26(11):787-789.

        [7]何玉川,郭琳,徐艷紅.高效液相色譜法測(cè)定脈絡(luò)寧顆粒中綠原酸含量[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥,2012,19(9):55-56.

        [8]陳惠玲,張麗麗.高效液相色譜法測(cè)定懷牛膝中齊墩果酸的含量[J].云南中醫(yī)中藥雜志,1996,17(3):58.

        [9]林大專,王廣樹,楊曉虹,等.牛膝中新蛻皮甾酮類成分的研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2006,41(17):1295.

        [10]陳阿麗,楊永霞,梁生旺,等.高效液相色譜法測(cè)定婦康寧片中阿魏酸的含量[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥,2013,20(28):71-72.

        [11]楊晨,方成武,韓燕全,等.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地不同采收期牡丹皮中丹皮酚的含量[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥,2010,17(5):5-7.

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        [13]張彥功,楊玉琴,李建,等.不同產(chǎn)地牛膝藥材中齊墩果酸的含量測(cè)定[J].貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,32(1):20-21.

        [14]李先端、胡世林.不同產(chǎn)地牛膝中齊墩果酸含量測(cè)定[J].中國(guó)中藥雜志,1995,20(8):459-460.

        [15]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:282-283.

        Com parative study of content of oleanolic acid and ecdysterone from radix Achyranthis bidentatae in different region

        PAN Qi MU Chun-xu ZHANG Jian-jun
        Liaoning Medicine Vocational College,Shenyang 110101,China

        Objective To determine the content of saponin(oleanolic acid)and ecdysterone of Achyranthes bidentata from different habitat order to compare the difference of content of saponin(oleanolic acid)and ecdysterone of Achyranthes bidentata from different habitat.M ethods High performance liquid chromatography(HPLC)was used and Octadecylsilane chemically bonded silica was selected as chromatographic column.Methanol was selected as mobile phase in determination of oleanolic acid and acetonitrile asmobile phase determination of ecdysterone.The ultraviolet detection wavelength in oleanolic acid and ecdysterone was 280 nm and 250 nm respectively.The sample size was both 10μl.Results The content of saponin(oleanolic acid)and ecdysterone of Achyranthes bidentata was the highestwith the best quality produced in Qinyang of Henan province,and the content of saponin(oleanolic acid)and ecdysterone of Achyranthes bidentata was higher produced in Anyang city of Henan province,Taihe county of Anhui province,Qujing city of Yunnan province,and Shenyang city which allmet the standard of State Pharmacopoeia.Conclusion The quality of Achyranthis bidentatae produced in Qinyang city of Henan province is best and in other regions like Shenyang city is betterwhich allmeet the criteria of China Pharmacopoeia and are suitable formedication.

        Achyranthis bidentatae;Oleanolic acid;Ecdysterone;Content comparison

        R927.2

        A

        1674-4721(2015)04(c)-0010-03

        2015-01-28本文編輯:許俊琴)

        潘琦(1965-),男,遼寧沈陽人,實(shí)驗(yàn)師,研究方向:醫(yī)學(xué)分析檢驗(yàn)及藥品分析檢測(cè)

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