孫玉成 金恩鴻

作者單位：133000 吉林延吉 延邊大學(xué)附屬醫(yī)院普外科

臨床經(jīng)驗(yàn)

CGA與COX-2在直腸癌中的表達(dá)及臨床意義

孫玉成 金恩鴻

作者單位：133000 吉林延吉 延邊大學(xué)附屬醫(yī)院普外科

目的 探討嗜鉻粒蛋白A（chromogranin A，CGA）、環(huán)氧合酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）在直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法 采用免疫組化ABC法檢測106例直腸癌及癌旁組織CGA、COX-2的表達(dá)水平，并分析其臨床意義。結(jié)果 CGA及COX-2在直腸癌組織中的陽性表達(dá)率分別為43.4%和50.0%，明顯高于在癌旁組織中的陽性表達(dá)率13.2%和15.1%，二者比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。CGA及COX-2的陽性表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤大小均無關(guān)（P均＞0.05）；而與腫瘤分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Duke′s分期有關(guān)（P均＜0.05）。CGA和COX-2的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.42，P＜0.05）。結(jié)論 CGA及COX-2在直腸癌組織中高表達(dá)并在直腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起一定作用，檢測CGA、COX-2對直腸癌預(yù)后評估及治療均有重要臨床意義。

直腸腫瘤；嗜鉻粒蛋白A；環(huán)氧合酶2；表達(dá)；臨床意義

直腸癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。直腸癌惡性程度較高、侵襲力較強(qiáng)、易發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，但其發(fā)生機(jī)制尚不完全清楚。研究表明，一些腫瘤相關(guān)基因及其蛋白質(zhì)因子可能參與直腸癌發(fā)生、發(fā)展并起重要作用。

嗜鉻粒蛋白A（chromogranin A，CGA）是目前公認(rèn)最具代表性的神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物之一，直腸癌組織中出現(xiàn)陽性表達(dá)意味著該直腸癌組織具有神經(jīng)內(nèi)分泌分化。研究表明具有神經(jīng)內(nèi)分泌分化的腫瘤惡性程度高，預(yù)后不良［1］。環(huán)氧合酶 2（cyclooxygenase-2，COX-2）是前列腺素合成過程中的一個限速酶，有研究證實(shí)COX-2參與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程，COX-2陽性表達(dá)的腫瘤更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移和術(shù)后復(fù)發(fā)。本實(shí)驗(yàn)檢測CGA和COX-2在直腸癌組織中的表達(dá)并分析其臨床意義，探討兩種因子在直腸癌發(fā)病機(jī)制中的作用，為直腸癌的預(yù)后評估和個體化治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本

直腸癌組織標(biāo)本取自延邊大學(xué)附屬醫(yī)院2008年5月至2013年5月手術(shù)切除治療的106例患者存檔蠟塊，同時切取距癌旁至少2 cm且經(jīng)病理檢查證實(shí)無癌細(xì)胞的癌旁組織作對照。其中男75例，女31例，年齡29～81歲，中位年齡55歲；其中低分化43例，中高分化63例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移73例；Duke′s分期中A期+B期67例，C期+D期39例；全組臨床資料完整，所有患者術(shù)前均未經(jīng)放化療治療。

1.2 主要試劑與檢測方法

全組組織標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟常規(guī)包埋，標(biāo)準(zhǔn)5μm切片。兔A430抗人CGA多抗為丹麥Dako公司產(chǎn)品，COX-2兔抗人單抗購自日本IBL公司，DAB和ABC底物試劑盒為美國Vector公司產(chǎn)品。采用免疫組化ABC法檢測，嚴(yán)格按照各試劑盒要求進(jìn)行操作。用PBS液代替一抗作陰性對照，用已知的陽性切片作陽性對照。

1.3 檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

CGA實(shí)驗(yàn)中凡細(xì)胞質(zhì)顯示棕黃色染色顆粒者為陽性。COX-2實(shí)驗(yàn)中，細(xì)胞質(zhì)或核膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，每張切片取5個高倍鏡視野，根據(jù)細(xì)胞陽性率（陽性細(xì)胞數(shù)/計數(shù)細(xì)胞總數(shù)×100%）計分，0分：≤10%；1分：11%～25%；2分：26%～50%；3分：＞50%。根據(jù)細(xì)胞染色程度記分，0分：無色；1分：淺黃色；2分：棕黃色；3分：深褐色。以上述2項(xiàng)記分乘積值作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，陰性（-）：0分；弱陽性（+）：1～3分；陽性（++）：4～6分；強(qiáng)陽性（+++）：7～9分；所有（+）以上者均視為陽性表達(dá)。全部結(jié)果由2位高年資病理科醫(yī)生共同閱片判定。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS 10.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理和分析。兩組計數(shù)資料的比較用χ2檢驗(yàn)；兩者相關(guān)關(guān)系用Spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CGA、COX-2在直腸癌組織中的表達(dá)水平

CGA在106例直腸癌組織中的陽性表達(dá)率為43.4%（46/106），在癌旁組織中的陽性表達(dá)率為13.2%（14/106），兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=9.302，P＜0.05）；COX-2在直腸癌組織中的陽性表達(dá)率為50.0%（53/106），明顯高于其在癌旁組織中的陽性表達(dá)率15.1%（16/106），兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=7.529，P＜0.05）。CGA與COX-2在直腸癌組織中的表達(dá)見圖1。

2.2 CGA及COX-2的陽性表達(dá)與直腸癌臨床病理特征的關(guān)系

CGA及COX-2的陽性表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤大小均無關(guān)（P均＞0.05），而與腫瘤分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Duke′s分期均有關(guān)（P均＜0.05）。見表1。

圖1 CGA和COX-2在直腸癌組織中的陽性表達(dá)（ABC×400）

表1 CGA及COX-2的陽性表達(dá)與直腸癌臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］

2.3 直腸癌組織中CGA與COX-2表達(dá)的相關(guān)性

46例CGA陽性表達(dá)的直腸癌組織中COX-2陽性42例（91.3%），陰性4例（8.7%）；60例CGA陰性表達(dá)的直腸癌組織中COX-2陽性11例（18.3%），陰性49例（81.7%）。二者的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.42，P＜0.05）。

3 討論

CGA曾是一個備受關(guān)注的腫瘤相關(guān)因子，但由于受到技術(shù)條件的限制，自90年代末對其研究基本處于停止?fàn)顟B(tài)。近年隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的不斷深入，對CGA的研究再次成為熱點(diǎn)并取得了一些新的成果。研究表明，CGA是一種由439個氨基酸組成的酸性親水性分泌蛋白，其基因位于人14號染色體上，是目前發(fā)現(xiàn)最具代表性的神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物，主要存在于人腎上腺髓質(zhì)及神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中，在嗜鉻細(xì)胞瘤、類癌等內(nèi)分泌腫瘤中CGA常常呈高表達(dá)。近年研究發(fā)現(xiàn)，CGA在內(nèi)分泌腫瘤以外的多種惡性腫瘤如膽管癌、前列腺癌、子宮頸癌中呈高表達(dá)［2］。于紅梅等［3］報道胃癌CGA陽性表達(dá)者1年和3年生存率均明顯低于陰性者。本研究發(fā)現(xiàn)，CGA在直腸癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織（P＜0.05），這一結(jié)果與國內(nèi)報道基本一致。本實(shí)驗(yàn)顯示CGA的陽性表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤大小無關(guān)，而與腫瘤分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及Duke′s分期有關(guān)（P均＜0.05），提示CGA陽性表達(dá)的直腸癌具有較高的惡性度，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。目前關(guān)于CGA在直腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機(jī)制尚不十分清楚。有研究發(fā)現(xiàn)CGA首先在細(xì)胞內(nèi)合成，而后由其N末端信號肽引導(dǎo)，通過高爾基體介導(dǎo)的旁路分泌到細(xì)胞外，經(jīng)多種蛋白酶分解后，形成不同的生物活性片段而發(fā)揮相應(yīng)的作用［4］。閔曉紅等［5］研究發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌組織內(nèi)的內(nèi)分泌細(xì)胞通過旁分泌產(chǎn)生一些生物活性物質(zhì)，這些物質(zhì)能增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲能力，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增長和轉(zhuǎn)移。Arnold等［6］研究報道，CGA陽性表達(dá)的大腸癌常規(guī)化療方案的效果不如腺癌，而加用易瑞肽等生長抑制素類藥物后其化療效果得到明顯改善，但對一般腺癌則無影響。這一研究結(jié)果提示檢測CGA可能對直腸癌的治療具有一定的指導(dǎo)意義。

COX-2是前列腺素合成過程中的一種限速酶，在正常組織中幾乎不表達(dá)，但在一些具有促癌作用的因子如細(xì)胞因子、生長因子和癌基因等作用下，其表達(dá)可呈不同程度上調(diào)，并參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［7］。研究表明，胃癌、前列腺癌、肝癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程均有COX-2參與［8］，綜合國內(nèi)外報道，COX-2在結(jié)直腸癌中的表達(dá)率為59%～71%。本實(shí)驗(yàn)顯示COX-2在直腸癌組織中的陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織（P＜0.05），較國內(nèi)外報道略低，這可能與入組病例數(shù)差異較大以及本實(shí)驗(yàn)組在病例選擇上未包括結(jié)腸癌有一定關(guān)系。此外，COX-2的表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤大小無關(guān)，而與腫瘤分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Duke′s分期有關(guān)（P＜0.05），表明COX-2陽性表達(dá)的直腸癌惡性程度高，容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CGA的表達(dá)與COX-2的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.42，P＜0.05）。目前，有關(guān)CGA與COX-2表達(dá)的相關(guān)性報道較少。有研究［9］顯示，CGA能通過其自身的鈣離子結(jié)合位點(diǎn)及多聚谷氨酸和堿性氨基酸與一些功能蛋白結(jié)合，在翻譯或翻譯后階段影響p53蛋白的表達(dá)，使其不能與TATA-結(jié)合蛋白競爭COX-2啟動子上的結(jié)合位點(diǎn)，從而促進(jìn)COX-2的表達(dá)。另有報道，CGA可通過上調(diào)表皮生長因子受體的表達(dá)促進(jìn)COX-2蛋白、COX-2 mRNA的表達(dá)［10］。然而，要確定CGA與COX-2在直腸癌中表達(dá)的相關(guān)性仍需進(jìn)行大量的基礎(chǔ)和臨床實(shí)驗(yàn)研究。

綜上，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CGA和COX-2在直腸癌組織中高表達(dá)，兩者表達(dá)呈正相關(guān)且與直腸癌的生物學(xué)行為有一定關(guān)系。檢測CGA和COX-2對直腸癌預(yù)后的評估和個體化治療方案的制訂均有重要臨床意義。

［1］ 李瑞芳，熊前程.嗜鉻顆粒蛋白A研究進(jìn)展［J］.生命科學(xué)研究，2010，14（4）：350-354.

［2］ 陳吉添.子宮頸小細(xì)胞癌的臨床病理分析［J］.中國癌癥防治雜志，2012，4（4）：355-356.

［3］ 于紅梅，劉曉文，龍子雯，等.胃癌伴神經(jīng)內(nèi)分泌分化的臨床病理及預(yù)后分析［J］.中國癌癥雜志，2013，23（1）：42-46.

［4］ 謝燁卿，陳瑞珍.嗜鉻粒蛋白A的基礎(chǔ)研究與臨床意義［J］.中國病理生理雜志，2010，26（7）：1440-1443.

［5］ 閔曉紅，陸建波，宋精玲，等.結(jié)腸腺癌伴神經(jīng)內(nèi)分泌分化的臨床病理學(xué)意義［J］.昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013，34（3）：67-72.

［6］ Ar n old R，Si mo n B，W i ed M.T r e a tme n t of n e u r oe n doc ri n e GE P t u mo u r s w i t h som a tost a t i n ana lo g u es：a r ev i ew［J］.D ig est i o n，2000，62（1）：84-91.

［7］ 王繼貴.環(huán)氧化酶-2與腫瘤發(fā)生關(guān)系的研究進(jìn)展［J］.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，29（5）：459-462.

［8］ 強(qiáng)占榮，覃泱，林中，等.選擇性C O X-2抑制劑防治胃癌的研究現(xiàn)狀［J］.西部醫(yī)學(xué)，2010，22（5）：939-941，944.

［9］ K a m a d a R，N om u r a T，A n de r so n C W，et a l.C an ce r-a ssoc i a ted p53 tet r a me ri za t i o n dom a i n m u t an ts：q uan t i t a t i ve ana lys i s r eve a ls a low t h r es h old fo r t u mo r s u pp r esso r i na ct i v a t i o n［J］.J B i ol C h em，2011，286（13）：252-258.

［10］ Ar n old R，W i lke A，R i n ke A，et a l.P l a sm a c h r omo gr an i n A a s m a r ke r fo r s u r v i v a l i n p a t i e n tsw i t h met a st a t i c e n doc ri n e g a st r oe nte r op an c r e a t i c t u mo r s［J］.C l i n G a st r oe n te r ol H ep a tol，2008，6（7）：820-827．

［2015-02-05收稿］［2015-03-20修回］［編輯 阮萃才］

R735.3+7

A

1674-5671（2015）04-03

10.3969/j.issn.1674-5671.2015.04.11

孫玉成。E-mail：ybyysyc@163.com