陸潞等

【摘要】 目的 研究血清白細胞介素-12水平在廣西壯族骨關節(jié)結核患者與健康體檢者之間的差異及臨床意義。

方法 選取2010年10月～2013年10月收治的廣西壯族骨關節(jié)結核患者150例作為觀察組，同期體檢中心進行健康體檢的165名壯族體檢健康者作為對照組，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測兩組外周血血清IL-12水平，常規(guī)方法測定紅細胞沉降率（ESR）和血漿C反應蛋白（CRP）水平，比較兩組間IL-12、ESR、CRP水平的差異，分析觀察組患者IL-12水平與ESR、CRP水平的相關性。

結果 兩組IL-12、ESR及CRP水平比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01），觀察組IL-12顯著低于對照組，ESR及CRP水平顯著高于對照組。觀察組患者血清IL-12水平與ESR水平及CRP水平均無明顯線性相關（P>0.05）。

結論 廣西壯族骨關節(jié)結核患者血清IL-12水平低于正常人群，IL-12可能在骨關節(jié)結核的發(fā)病中起免疫調節(jié)作用。

【關鍵詞】 骨關節(jié)結核；白細胞介素-12；壯族

中圖分類號：R529.2 文獻標識碼：A

【Abstract】 Objective To explore the difference of serum IL-12 levels between patients with bone and joint tuberculosis and healthy individuals in Guangxi and its clinical significance.

Methods 150 cases of bone and joint tuberculosis admitted to hospital from October，2010 to October，2013 in Guangxi were selected as observation group.And 165 healthy individuals who underwent physical examination in physical examination center in the same period were selected as control group.Levels of serum IL-12 in peripheral blood of both groups were measured by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. Levels of erythrocyte sedimentation rate （ESR） and plasma C reactive protein （CRP） were tested by routine method.Then，differences of IL-12，ESR and CRP levels were compared，and the correlation of IL-12 between ESR and CRP levels were observed and analysed between groups.

Results Difference of levels of serum IL-12，ESR and CRP of both groups was statistically significant（P<0.01），serum IL-12 level of the observation group was significantly lower than that of the control group，but ESR and CRP levels were significantly higher than those of the control group.Levels of ESR and CRP were not linearly correlated with the serum IL-12 level in the observation group（P>0.05）.

Conclusion The serum IL-12 level of patients with bone and joint tuberculosis is lower than that of healthy individuals in Guangxi.IL-12 may play a role of immunoregulation in the pathogenesis of bone and joint tuberculosis.

【Key words】 bone and joint tuberculosis；Interleukin-12，Zhuang ethic group

骨關節(jié)結核（bone and joint tuberculosis）是最常見的肺外結核之一，如診療不及時，極易導致病灶部位組織受到破壞，后期可出現(xiàn)關節(jié)畸形、竇道及瘺管的形成，并有高達10%的截癱率，目前其發(fā)病機制尚未明確。白細胞介素-12（interleukin12，IL-12）是一種具有多種生物活性和免疫調節(jié)功能的異戊二聚體細胞因子，由抗原提呈細胞、樹突細胞、巨噬細胞或B細胞產生，亞基分別由IL-12A基因和IL-12B基因編碼[1]。研究[2，3]證實，IL-12參與了肺結核的免疫調節(jié)，在肺結核的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。本研究通過酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測150例廣西壯族骨關節(jié)結核患者及165例壯族健康體檢者的血清IL-12表達水平，結合其紅細胞沉降率（ESR）及血漿C反應蛋白（CRP）水平進行相關性分析，以探討IL-12在骨關節(jié)結核發(fā)病中的作用。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2010年10月～2013年10月右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院收治的廣西壯族骨關節(jié)結核患者150例作為觀察組，其中男109例，女49例，年齡7～76歲，平均（40.95±16.67）歲。隨機選取同期右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院體檢中心進行健康體檢的165名壯族體檢健康者作為對照組，其中男97例，女68例，年齡18～71歲，平均（39.53±14.39）歲，各項臨床及實驗室檢查指標均正常。兩組受試人群間的性別、年齡比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>005），具有可比性。

1.2 病例納入標準與排除標準

納入標準：未曾接受過任何抗結核藥物治療，術后病理診斷均為骨關節(jié)結核。受試對象籍貫均為廣西，受試者之間無可查親緣關系，向上追溯3代均為壯族的個體，且長期在廣西居住。排除標準：若合并以下情況之一者均不納入研究：從未進行卡介苗接種、患有或曾患有活動性肺結核、長期使用激素、患有或曾患有其他臟器結核病、合并影響機體免疫狀態(tài)的疾病、HIV感染、罹患自身免疫性疾病、合并遺傳性疾病者。

1.3 研究方法

1.3.1 標本采集

用促凝管和枸櫞酸鈉抗凝管于清晨分別抽取受試者肘正中靜脈血4 ml和2 ml，其中4 ml非抗凝血分離血清后用于IL-12及CRP水平檢測；2 ml抗凝血用于ESR水平檢測。

1.3.2 血清IL-12水平檢測

IL-12 ELISA試劑盒為武漢華美生物工程有限公司提供的人白介素-12（IL-12/P70）ELISA Kit，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3.3 ESR及CRP檢測

使用意大利Test 1全自動血沉分析儀檢測ESR水平，使用日本7600全自動生化分析儀檢測CRP水平，以上指標檢測質控均符合英國RIQAS國際質控標準。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，相關性采用Pearson相關分析法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組IL-12、ESR及CRP水平的比較

兩組IL-12、ESR及CRP水平比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01），觀察組IL-12顯著低于對照組，ESR及CRP水平顯著高于對照組。見表1。

2.2 觀察組患者血清IL-12與ESR及CRP的相關性

經Pearson線性相關性分析，觀察組患者血清IL-12水平與ESR水平無明顯相關性（r=-0.115，P>0.05），觀察組患者血清IL-12水平與CRP水平無明顯相關性（r=-0.083，P>0.05）。

3 討 論

結核病的發(fā)病與進展取決于機體自身的免疫狀態(tài)，而T淋巴細胞介導的細胞免疫反應在抗結核免疫中占主導作用，CD4+輔助性T細胞可分為Th1細胞和Th2細胞，體內Th1/Th2應答及細胞因子失衡與結核病的發(fā)生、發(fā)展密切相關[4]。作為最具有代表性的Th1細胞因子之一，IL-12處于Th1/Th2免疫應答的核心地位，在機體結核分枝桿菌感染早期的固有免疫和后期的抗原特異性的適應性免疫之間建立起有效的關聯(lián)[5]：①結核分枝桿菌侵入機體后，抗原提呈細胞合成并分泌IL-12，誘導CD4+初始 T 細胞（Th0）優(yōu)先向Th1細胞分化并促進Th1細胞分泌IFN-γ這一重要的免疫調節(jié)因子。研究表明，在75%的結核性肉芽腫中，IFN-γ和IL-12同時表達陽性[6]。②IL-12能激活NK細胞并增強其細胞毒作用，活化巨噬細胞并誘導其成熟，提高其在細胞內的殺菌能力[7]。③IL-12還能抑制Th2細胞因子（如IL-4）的產生，削弱Th2細胞因子對Th1細胞因子的抑制作用，以維持Thl/Th2平衡的方式參與調節(jié)機體的抗結核免疫功能，在結核桿菌侵入機體后產生保護性免疫反應[8]。Verbon等[9]研究發(fā)現(xiàn)在肺結核患者中，痰涂片結核桿菌陽性患者較陰性患者血清IL-12水平顯著降低。國內奚瑩等人[10]的研究也表明肺結核患者血清IL-12水平顯著低于健康人群，而經正規(guī)抗結核化療后其血清水平明顯上升，IL-12與肺結核活動性密切相關，其水平可作為臨床工作中了解患者免疫狀態(tài)，判斷肺結核活動性和病情轉歸的參考依據(jù)。

當前國內外關于血清IL-12表達水平與結核病相關的研究主要集中在肺結核上，與骨關節(jié)結核相關的研究鮮有報道，因此，本研究采用ELISA法對150例廣西壯族骨關節(jié)結核患者及健康對照組進行了血清IL-12表達水平的檢測，旨在探討IL-12在骨關節(jié)結核發(fā)病中的作用。結果顯示，廣西壯族骨關節(jié)結核患者的血清IL-12表達水平明顯低于健康對照組（P<0.01），這與Verbon[9]及奚瑩等人[10]的研究結果相同，提示骨關節(jié)結核的發(fā)生也可能與Th1為主的免疫抑制有關。骨關節(jié)結核患者感染結核分枝桿菌時可能機體細胞免疫功能低下，不能形成有效的抗結核免疫反應清除病菌而致病，以此推測骨關節(jié)結核患者體內IL-12水平降低導致機體對抗結核分枝桿菌的保護性免疫力也隨之降低，Th1/Th2的平衡被打破，進而導致骨關節(jié)結核的發(fā)生。這一推測也有待今后進一步多因子及多方面的實驗研究去證實。我們同時檢測了兩組人群的ESR及CRP水平，發(fā)現(xiàn)骨關節(jié)結核患者ESR及CRP水平較對照組均明顯升高（P<0.01），提示骨關節(jié)結核病變呈活動性炎癥性反應，本研究未發(fā)現(xiàn)血清IL-12水平與ESR水平或CRP水平有明顯相關性，考慮骨關節(jié)結核患者機體IL-12水平與ESR、CRP水平可能有其各自的調控機制，由于影響ESR及CRP水平的因素較多，機制復雜，指標缺乏特異性，因此IL-12水平與兩者無明顯線性相關并不能否定IL-12在骨關節(jié)結核發(fā)生與進展中的重要作用。

總之，IL-12是一個有效的增強宿主抵御結核分枝桿菌感染的免疫調節(jié)細胞因子，本研究發(fā)現(xiàn)血清IL-12表達水平在骨關節(jié)結核患者中明顯下調，提示IL-12可能與骨關節(jié)結核的發(fā)生密切相關，在機體抗結核免疫中可能發(fā)揮重要作用，隨著IL-12以及結核病病因研究的進一步深入，血清IL-12表達水平的檢測也有望成為骨關節(jié)結核預防、診斷及判斷療效和預后的重要參考指標。

參 考 文 獻

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（收稿日期：2015-02-27 修回日期：2015-04-23）

（編輯：梁明佩）