肖玲

摘 要：本文對肉仔雞大腸桿菌病病原的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)進(jìn)行了研究。通過對一例肉仔雞大腸桿菌病原菌進(jìn)行分離培養(yǎng)、涂片鏡檢和細(xì)菌的生化反應(yīng)試驗(yàn)，并對分離菌進(jìn)行了鑒定，確診肉仔雞大腸桿菌感染。對分離株大腸桿菌進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明：分離株對美克和康諾極度敏感，對優(yōu)克特、大安和氟欣康藥物呈現(xiàn)中度敏感，對桿寧、安泰、奇諾和喘泰產(chǎn)生了耐藥性。

關(guān)鍵字：肉仔雞；大腸桿菌病；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

中圖分類號：S858.31 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B 文章編號：1673-1085（2015）08-0049-02

近年來隨著肉仔雞養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，大腸桿菌病在肉仔雞養(yǎng)殖場中不斷發(fā)生，給肉仔雞養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。通過對部分規(guī)?；B(yǎng)殖場和市場養(yǎng)殖戶所送檢的病料進(jìn)行研究，得知該病的發(fā)病率逐漸上升，臨床抗生素的濫用導(dǎo)致的耐藥菌株的不斷產(chǎn)生，給預(yù)防和治療工作增加了難度，值得我們高度重視。

大腸桿菌病發(fā)病率如此高又難以防治是由其危害特點(diǎn)所決定的[1]：抗原構(gòu)造復(fù)雜和血清型極多是其主要原因；傳染途徑多樣；發(fā)病季節(jié)不定性；耐藥現(xiàn)象普遍存在；病原混感性疾病不斷產(chǎn)生。

為了控制大腸桿菌病的流行，并防止耐藥菌株的產(chǎn)生，臨床用藥之前要先進(jìn)行病原菌的分離鑒定和藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥敏試驗(yàn)的結(jié)果，篩選出對病原菌高度敏感的藥物應(yīng)用于臨床，提高藥物的治療效果，控制大腸桿菌病的流行。

本文現(xiàn)對一例患有大腸桿菌病的肉仔雞進(jìn)行了大腸桿菌的分離鑒定，并對其進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料與器材 病料：肉仔雞養(yǎng)殖場送檢的疑似患有大腸桿菌病的病雞。器材：普通濾紙，打孔器，帶棉塞的小瓶，高壓蒸汽滅菌鍋，干燥箱，潔凈箱，冰箱，天平，滅菌注射用水，顯微鏡，載玻片，酒精燈，吸水紙，平皿，接種環(huán)，注射器，離心管，鑷子，棉簽等。

1.1.2 培養(yǎng)基 普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)基、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、醋酸鉛瓊脂培養(yǎng)基、葡萄糖發(fā)酵管、乳糖發(fā)酵管、麥芽糖發(fā)酵管、甘露醇發(fā)酵管、蔗糖發(fā)酵管等。

1.1.3 染色液及試劑 革蘭氏染色液、甲基紅指示劑、V-P指示劑、吲哚試劑、香柏油、二甲苯。1.1.4 抗菌藥物 美克、優(yōu)克特、桿寧、氟欣康、康諾、大安、安泰、奇諾、喘泰。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 準(zhǔn)備藥敏紙片，配制抗菌素藥液，制備藥敏紙片，分離培養(yǎng)病原菌。

1.2.2 革蘭氏染色鏡檢。用接種環(huán)取上述麥康凱培養(yǎng)基中的典型菌落與載玻片上壓印或涂抹成一薄層，自然干燥。染色鏡檢過程：結(jié)晶紫染色1～2min—水洗—碘液媒染1～2min—水洗—95%酒精脫色0.5～1min—水洗—石炭酸復(fù)紅染色2～3min—水洗—濾紙吸干—鏡檢[2]。

1.2.3 進(jìn)行細(xì)菌生化試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、硫化氫試驗(yàn)。

1.2.4 三糖鐵斜面接種試驗(yàn)。用滅菌接種環(huán)從待檢菌純培養(yǎng)中挑取單個(gè)菌落，先涂布于培養(yǎng)基斜面，再穿刺底層，后放置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24 h后，觀察斜面、底面的顏色變化、是否產(chǎn)氣以及硫化氫的產(chǎn)生情況。

1.2.5 藥敏試驗(yàn)。用接種環(huán)取培養(yǎng)的菌落1～2個(gè)放入盛有l(wèi)ml滅菌生理鹽水的小離心管內(nèi)。用滅菌注射器混均勻，以無菌棉簽蘸取菌液，在管壁上擠壓，除去多余液體后，均勻涂布于營養(yǎng)瓊脂平板表面，在室溫下干燥5min，待平板表面稍干即可放置藥敏紙片。用無菌鑷子取藥敏紙片平放于瓊脂平板表面，并輕壓使其緊貼上面，貼牢后不能再移動(dòng)，并做好標(biāo)記和記錄。紙片應(yīng)貼得均勻，各紙片中心距離不小于2.5cm，紙片距平板內(nèi)緣不少于15mm，一張位于中心。將粘貼好的平板于室溫下放l0min左右，再倒置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～18h后，取出觀察結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌分離結(jié)果 肉仔雞養(yǎng)殖場送檢的病料在麥康凱培養(yǎng)基上長出中等大小、邊緣整齊、稍隆起、表面光滑、濕潤、直徑1.5～2mm、粉紅色的圓形菌落。在營養(yǎng)瓊脂上形成圓形凸起、光滑、濕潤、半透明、近似灰白色的菌落，符合大腸桿菌的特征。

2.2 染色鏡檢結(jié)果 分離菌株經(jīng)革蘭氏染色，鏡檢可見有粗短、兩端鈍圓的中等大小桿菌，多單個(gè)散在，個(gè)別成雙排列，無芽孢，為革蘭氏陰性，符合大腸桿菌的特征。

2.3 生化反應(yīng)結(jié)果 結(jié)果見表1。

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2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果見表2。

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3 結(jié)論

通過上述試驗(yàn)得知，從該肉仔雞分離到的病原菌為大腸桿菌，分離菌株對美克和康諾表現(xiàn)極度敏感，對桿寧、安泰、奇諾和喘泰產(chǎn)生了耐藥性。

參考文獻(xiàn)：

[1] 褚玉璽，隋紹輝，王淑俄，等.雞大腸桿菌病的危害特點(diǎn)[J].四川畜牧獸醫(yī)，2001（28）：11.

[2] 姚火春，杜興念，方定一，等.獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006（2）：16-17.

[3] 姚火春，杜興念，方定一，等.獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社.2006（2）：43-45.

[4] 付志新，梁建蘭.雞大腸桿菌病的治療試驗(yàn)及藥敏試驗(yàn)[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2009（3）：90-91.□