李靜平，起榮林

1云南中醫(yī)學(xué)院，云南昆明650500；2昆明滇虹藥業(yè)股份有限公司

“膚敏膏”對(duì)濕疹皮炎模型的影響

李靜平1，起榮林2

1云南中醫(yī)學(xué)院，云南昆明650500；2昆明滇虹藥業(yè)股份有限公司

目的：研究“膚敏膏”對(duì)豚鼠濕疹皮炎模型皮膚組織病理學(xué)的影響，探討其治療作用及機(jī)理。方法：以2，4-二硝基氯苯(DNFB)建立豚鼠濕疹皮炎模型，采用HE常規(guī)病理及透射電鏡超微病理學(xué)檢測方法，觀察“膚敏”膏對(duì)實(shí)驗(yàn)性豚鼠濕疹皮炎的治療作用。結(jié)果：“膚敏膏”能改善動(dòng)物濕疹皮炎模型皮膚組織病變，減少炎性細(xì)胞浸潤。結(jié)論：“膚敏膏”對(duì)Th1/Th2細(xì)胞平衡失調(diào)所引起的后續(xù)皮膚炎癥反應(yīng)和組織損傷有明顯抑制作用，從而間接調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡，改善過敏癥狀。

濕疹皮炎；豚鼠；膚敏膏

“膚敏膏”由云南省名中醫(yī)李慶生教授在長期臨床實(shí)踐和科研工作中總結(jié)、結(jié)合文獻(xiàn)篩選確定，前期各項(xiàng)臨床研究已證實(shí)“膚敏膏”為療效確切、主要用于治療濕疹等過敏性皮膚病的有效復(fù)方制劑。

輔助細(xì)胞亞群(Th1/Th2)功能失調(diào)是誘發(fā)過敏性皮膚病的關(guān)鍵因素，是決定過敏性皮膚病炎癥反應(yīng)和組織損傷發(fā)生的前提［1］。Th細(xì)胞分泌多種Th1和Th2型細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素(IL-2、4、5、13)，IFN-γ，TNF-β、CSF等，既可刺激B細(xì)胞合成大量IgE，介導(dǎo)經(jīng)典Ⅰ型超敏反應(yīng)；又能趨化嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤，或直接殺傷靶細(xì)胞，激發(fā)Th2細(xì)胞主導(dǎo)的Ⅳ型超敏反應(yīng)，從而引起皮膚炎癥反應(yīng)和組織損傷［2］。因此，本研究從病理形態(tài)學(xué)角度探索“膚敏”對(duì)Thl/Th2細(xì)胞的干預(yù)調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)豚鼠，體質(zhì)量200～400 g，雌雄兼用，由四川醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(川)2011-0007。

1.2 實(shí)驗(yàn)用藥與試劑“膚敏膏”浸膏(總提物)，褐色粉末，提取率為29.8%，由云南省藥物研究所科研科提供；人用量口服7.7g/次，3次/d，共23g (相當(dāng)于77 g生藥)。實(shí)驗(yàn)時(shí)用電子天平稱取適量膚敏浸膏粉，加蒸餾水稀釋后配制成適當(dāng)濃度的溶液供動(dòng)物灌胃用；2，4二硝基-1-氟苯(DNCB，上?；瘜W(xué)試劑公司)；丙酮、橄欖油等其他常用試劑均市購；分析純。

1.3 儀器 TGL-20M高速臺(tái)式離心機(jī)(上海第三儀器廠生產(chǎn))；XSP-18A型生物顯微鏡(江南光學(xué)儀器廠生產(chǎn))；JEDL-100CE透射電子顯微鏡(南京皓海儀器儀表有限公司生產(chǎn))；PL403型Sar to-rius電子天平(上海第二天平儀器廠生產(chǎn))。

1.4 方法

1.4.1 豚鼠濕疹皮炎模型的建立［3-4］采用2，4-二硝基氯苯(DNCB)一次大劑量致敏，多次小劑量激發(fā)的方法誘發(fā)豚鼠濕疹皮炎模型。豚鼠背部去毛，用5%DNCB-丙酮溶液50μL涂于去毛皮膚上致敏，2周后豚鼠右耳內(nèi)測涂0.1%DNCB-丙酮溶液100μL激發(fā)，每周1次，連續(xù)4周。第4次激發(fā)后48小時(shí)，即造成豚鼠變應(yīng)性濕疹皮炎模型。模型評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)：豚鼠右耳出現(xiàn)明顯腫脹、充血，表皮角化并伴有一定量丘疹或紅斑，少許滲液，出現(xiàn)血痂、脫皮等。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)分組 豚鼠30只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組10只，分別為“膚敏膏”組、模型組和正常組。于致敏當(dāng)天灌胃給藥。劑量為6.45 g/kg,模型組和正常組予同體積生理鹽水。灌胃每日1次，連續(xù)灌胃30天(至末次激發(fā)后第2天止)。然后處死豚鼠，用直徑8mm打孔器沿左右耳廓相同部位打孔取材，制作切片。

1.4.3 觀測項(xiàng)目

1.4.3.1 常規(guī)病理學(xué)檢測［5］取耳組織，10%福爾馬林液固定，石蠟包埋、切片、HE(蘇木精-伊紅)染色，光鏡下觀察組織學(xué)改變。

1.4.3.2 超微病理學(xué)檢測［6］取耳組織，2.5%戊二醛多聚甲醛固定，再由1%四氧化鋨固定，乙醇逐級(jí)脫水，Epon812環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片約50～70nm厚，醋酸鈾、檸檬酸鉛染色，在JEDL-100CX透射電子顯微鏡下觀察組織學(xué)改變。

2 結(jié)果

2.1 光鏡觀察 與正常組比較，模型組動(dòng)物表皮增厚、角化過度或灶性角化不全及淺表結(jié)痂、表皮突延長增厚，棘層細(xì)胞水腫肥厚、顆粒層肥厚等情況；真皮血管擴(kuò)張充血、內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，細(xì)胞間水腫，炎性細(xì)胞浸潤(淋巴細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、肥大細(xì)胞)等。與模型組比較，用藥后“膚敏膏”組豚鼠以上皮膚病變情況不同程度地減輕或抑制。表皮輕度角化，角化不全呈小灶性，且僅偶見，表皮稍增厚或增厚不明顯，水腫細(xì)胞偶見；真皮內(nèi)少數(shù)炎性細(xì)胞浸潤，偶見嗜酸性粒細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞未見或僅輕度腫脹，見圖1。

圖1 豚鼠常規(guī)病理學(xué)圖片

2.2 電鏡觀察 與正常組比較，模型組動(dòng)物表皮病變：炎性細(xì)胞(如淋巴細(xì)胞)變形、細(xì)胞漿突起及細(xì)胞間橋粒變性或高度增生，表皮基底板彌漫性增厚、表皮漿內(nèi)可見邊緣不規(guī)則塊狀角質(zhì)顆粒，細(xì)胞間可見團(tuán)塊狀蛋白質(zhì)沉著，細(xì)胞內(nèi)張力原纖維束增生等。真皮病變：早期膠原間質(zhì)水腫，后期間質(zhì)纖維增生等。

活化的免疫應(yīng)答細(xì)胞如淋巴細(xì)胞長胞漿突起、細(xì)胞核變大、核仁增大，肥大細(xì)胞胞漿突起、顆粒溶解或排出，巨噬細(xì)胞胞漿豐富及不規(guī)則突起等。另觀察到淋巴細(xì)胞與肥大細(xì)胞或巨噬細(xì)胞等相互吻合，細(xì)胞膜相插的細(xì)胞接觸現(xiàn)象。用藥后，與模型組比較，“膚敏膏”組以上皮膚病變情況不同程度減輕或改善。如淋巴細(xì)胞胞漿稍突起，細(xì)胞間橋粒偶有變性或輕度增生，表皮基底板偶見增厚；少見膠原間質(zhì)水腫；淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的細(xì)胞核核仁增大、胞漿突起、顆粒溶解或排出情況明顯減輕，各種炎性細(xì)胞間的吻合接觸現(xiàn)象顯著改善，見圖2。

3 討論

通過常規(guī)病理和超微病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，“膚敏膏”不同程度減輕或改善了動(dòng)物濕疹皮炎模型皮膚組織病變，減少炎性細(xì)胞數(shù)量。提示“膚敏膏”對(duì)Th1/Th2細(xì)胞平衡失調(diào)所引起的后續(xù)皮膚炎癥反應(yīng)和組織損傷有明顯的抑制作用，從而間接調(diào)節(jié)Th1/Th2細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡［7-8］。

［1］ 張玉環(huán)，沈偉，紀(jì)華安，等.異位性皮炎超微病理、免疫病理改變及臨床意義［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚病性病學(xué)雜志，2003，2(3)：158-161.

［2］ 張玉環(huán)，紀(jì)華安，張峻玲，等.免疫反應(yīng)致異位性皮炎病理形態(tài)學(xué)改變［J］.現(xiàn)代診斷與治療，2000，11(6)：358-360.

［3］ 許宗嚴(yán)，吳鐵，吳志華.鼠皮炎濕疹模型建立的研究進(jìn)展［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2005，10(7)：730-733.

［4］Tang A，Judge TA，Nickolof f BJ，et al.Suppression of murine al lergic contact dermatitis by CTLA4Ig tolerance induction of Th2 responses requires additional blockade of CD40-l igand［J］.J Immunol，1996，157:117-125.

［5］Hopkins JE，Naisbitt DJ，Kit teringham NR，et al.Selective haptenation of cel lular or extracel lular protein by chemical al lergens:association with cytokine polarization［J］.Chem Res Toxicol，2005，18(2)：375-381.

［6］Mosmann TR，Cherwinski H，Bond MW，et al.Two types of murine helper T cel l clone:def inition according to prof iles of Lymphokine activites and secreted proteins［J］.J Immunal，1986，136(7):2348-2357.

［7］ 李光武.現(xiàn)代生命科學(xué)研究與中藥研發(fā)模式轉(zhuǎn)變［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2004，22(12)：2231-2232.

［8］ 李慶生，陳子君，田芳.從學(xué)科特點(diǎn)論臨床中藥學(xué)與中藥臨床藥學(xué)［J］.中藥材，2002，25(1)：49-53.

Effectof FuMin Cream on theModelw ith EczematousDermatitis

LIJingping1,QIRonglin2
1 Yunnan University of Chinese Medicine,Kunming 650500,China
2 Kunming Dianhong Pharmaceutical Co.,Ltd

Objective:To investigate the influence of FuMin cream on skin pathology of guinea pigs suffering from eczematous dermatitis,explore its therapeutic function and the pathogenesis.Methods:Modelswere prepared by DNFB,curative effects of FuMin cream on themodelswere observed by HE stainingmethod and ultrastructural pathological detection of transm ission electronm icroscope.Results:FuM in cream could improve skin pathological changes of the animals w ith eczematous dermatitis and reduce inflammatory cells infiltration.Conclusion:FuMin cream could inhibit inflammatory reaction and tissue damage significantly induced by the imbalance of TH1/Th2 cells,consequently,regulate dynamic balanceof TH1/Th2 cells indirectly and improveallergic symptoms.

eczematous dermatitis;guinea pig;FuMin cream

R275

A

1004-6852(2015)01-0013-03

2013-12-27

李靜平(1979—)，女，博士學(xué)位，講師。研究方向：臨床中藥學(xué)。