陳辰，魯曉翔，張鵬，陳紹慧，李江闊

1(天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院，天津市食品生物技術(shù)重點實驗室，天津，300134)2(國家農(nóng)產(chǎn)品保鮮工程技術(shù)研究中心，天津市農(nóng)產(chǎn)品采后生理與貯藏保鮮重點實驗室，天津，300384)

玫瑰香葡萄(Vitis vinifera L.Muscat Hamburg)又名麝香葡萄，風味獨特、糖酸比較高，深受消費者的歡迎。但由于其果粒皮薄且含水、含糖量高，采后生命力仍較活躍，貯藏過程中極易發(fā)生品質(zhì)劣變，降低其商品價值。

適當?shù)暮橇?、含酸量是衡量水果鮮食品質(zhì)的重要指標。傳統(tǒng)的糖酸測定方法需要破壞樣品取汁液測試，耗時長、消耗試劑多、準確性低?？梢?近紅外無損檢測是利用樣品對光的特定吸收、反射、透射而進行定量、定性分析的高新檢測技術(shù)，具有簡便快速、無破壞性、節(jié)約試劑等優(yōu)點。利用此項技術(shù)對果蔬可溶性固形物、總酸含量的檢測在國內(nèi)外已有研究。Kawano等［1］應(yīng)用近紅外與光纖維交叉模式分析桃的糖度，發(fā)現(xiàn)近紅外光譜和果實的糖度有較強相關(guān)性。張鵬等［2］研究了可見/近紅外漫反射光譜技術(shù)對磨盤柿子可溶性固形物的快速檢測，結(jié)果表明方法具有可行性。章海亮等［3］采用主成分回歸和偏最小二乘法建立了贛南臍橙可溶性固形物和總酸含量的定量預(yù)測模型。吳桂芳等［4］應(yīng)用可見/近紅外光譜技術(shù)測定葡萄漿果糖度，并建立MPLS與BP神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)相結(jié)合的數(shù)據(jù)分析模型對葡萄漿果糖度進行預(yù)測。隨著市場對鮮食葡萄品質(zhì)要求的逐漸提高及葡萄保鮮技術(shù)的發(fā)展，針對葡萄采后品質(zhì)的快速、無損檢測技術(shù)研究已成為果蔬保鮮領(lǐng)域的重要研究課題之一。

目前，應(yīng)用近紅外漫反射技術(shù)對葡萄的檢測多集中于品種鑒別及檢測釀酒葡萄的可溶性固形物等，針對貯藏葡萄品質(zhì)及鮮食葡萄品質(zhì)的報道較少［5］。因此，本文結(jié)合我國葡萄物流主要模式，以0℃和10℃貯藏的玫瑰香葡萄為試驗材料，測定果實的可見/近紅外漫反射光譜，以改進偏最小二乘法(MPLS)建立不同貯藏溫度玫瑰香葡萄SSC、TA檢測模型及混合溫度模型，討論不同光譜預(yù)處理方法以及單側(cè)采集光譜與雙側(cè)取平均光譜對建模效果的影響。

1 材料與方法

1.1 試材處理

玫瑰香葡萄:2014年9月17日采于天津市茶淀鎮(zhèn)，果實成熟度約八成、無病蟲害、無機械傷，采收當天運至實驗室，預(yù)冷24 h后稱重、標記、分裝入厚度0.02 mm的葡萄專用膜包裝袋，分別于(0±0.5)℃冷庫、(10±1)℃冷庫貯藏。10℃冷藏樣品每3天、0℃冷藏樣品每8天測定1次，各測定6次，每次測定40個外觀均勻、代表性強的果粒。

每個溫度建模時選取不同冷藏天數(shù)的共200個果實，隨機分為定標集和驗證集，樣品數(shù)分別為150個和50個;此外將2個溫度下建模所用400個樣品混合后同樣以3∶1隨機分為定標集和驗證集。

1.2 近紅外漫反射光譜的采集

試驗儀器NIRS DS2500近紅外漫反射光譜儀(丹麥Foss公司)，集成全息光柵分光系統(tǒng)，配備硅(400～1 100 nm)和硫化鉛(1 100～2 500 nm)檢測器，掃描波長范圍為400～2 500 nm，掃描方式為單波長、快速掃描，掃描次數(shù)32次。內(nèi)置Nova分析軟件和WinISI4定標軟件。測試前，將葡萄果粒在常溫下平衡4 h后，在每個果實一側(cè)赤道附近光滑部位避開表面缺陷(如傷疤、污點等)畫出直徑約1 cm的圈，進行標記并排序，于近紅外漫反射光譜儀Slurry Cup上分別對畫圈一側(cè)及相對一側(cè)進行光譜采集，雙側(cè)采樣用于建立平均光譜模型。

1.3 糖酸指標的測定

以SSC、TA為指標，將采集光譜后的葡萄擠汁、過濾后滴于PAL-1數(shù)字手持折光儀(日本Atago公司)測定 SSC(°Brix)，同時滴于 BRIX-ACIDITY METER(GMK-706R)糖酸測定儀(韓國G-WON公司)測定TA(%)，重復(fù)3次取平均值。

1.4 模型的建立與驗證

使用WinISI4軟件對原始光譜進行濾波和平滑處理，以去除噪聲對模型精確度的影響。分別將0、10℃貯藏樣本及混合后樣本剔除異常光譜后，以3∶1隨機分成定標集和驗證集，定標集樣品應(yīng)用MPLS結(jié)合不同的光譜預(yù)處理建立定標模型，驗證集樣品用于驗證和評價定標模型的預(yù)測性能［6］。定標模型評價指標為交互驗證決定系數(shù)(RCV2)和交互驗證誤差(SECV)，越高，SECV越小，表明近紅外光譜分析值與實測值的相關(guān)性越高，即模型質(zhì)量較高。確定了最優(yōu)的預(yù)處理方法后，應(yīng)用其建立不同貯溫玫瑰香葡萄SSC、TA定標模型以及可同時預(yù)測混合溫度樣本SSC、TA的綜合模型，利用驗證集驗證模型，驗證標準差(SEP)越小、預(yù)測值與化學(xué)值決定系數(shù)()越高，殘差分布均勻、殘差和越小，預(yù)測效果越好。同時，外部相對分析誤差RPD(RPD=SD/SEP)在2～2.5之間，可進行定量分析，當RPD值大于2.5或3.0以上時，說明所建模型具有很好的預(yù)測效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄果實糖酸測定值分布特征

葡萄為非呼吸躍變型水果，貯藏期間SSC為正常生理代謝提供能量，有機酸在生理變化中可能轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)，因而均呈逐漸下降趨勢［7］。本實驗建模定標集和驗證集樣品SSC、TA測定值的變幅范圍、均值和標準偏差見表1。

表1 定標集和驗證集樣品測定值的分布特征Table 1 Characteristics of values in calibration and validation

由表1可見，本試驗所測樣本的SSC、TA值梯度均勻、分布范圍較廣，可以代表整個貯藏期品質(zhì)變化，且驗證集的樣本測定含量都在定標集范圍內(nèi)。因此，所選樣品可以用于建立近紅外檢測模型。

2.2 單側(cè)光譜與平均光譜的比較

雙側(cè)采集光譜后通過WinISI4軟件得到的整個果粒平均光譜及畫圈一側(cè)采集到的單側(cè)光譜，如圖1所示。

有研究表明，樣品采集光譜的部位對近紅外檢測結(jié)果有一定的影響［8］。蔡宋宋等［9］建立了常溫蘋果的近紅外光譜無損檢測模型，結(jié)果表明，陽面2點和陰面2點光譜混合后平均所得光譜建立模型的預(yù)測精度最高。由于葡萄生長過程中果穗逐漸豐滿，外圍果粒向陽面與內(nèi)側(cè)面果皮、果肉成分積累有所差別，且不同物質(zhì)組分對不同頻率近紅外光吸收、透射、反射有選擇性，漫反射光波穿透力低于透射光波，多次反射受介質(zhì)性狀影響較大，因此，利用可見/近紅外光的漫反射在果實不同部位采集的光譜信息差異較大，取雙側(cè)采集光譜求其平均光譜可以更好地表征樣品信息，同時降低環(huán)境、操作及儀器誤差。樣品單側(cè)采集的2條原始光譜和其平均光譜如圖1所示，以波長1 450.0 nm為例，通過軟件標尺得到2條單側(cè)光譜吸光度分別為0.894 9、0.877 1，差異0.017 8，平均光譜吸光度為0.886 0。全光譜范圍內(nèi)數(shù)據(jù)信息節(jié)點數(shù)量龐大，單側(cè)光譜的差異累積隨之變大，對應(yīng)整果SSC、TA有片面性。以10℃樣品單側(cè)光譜建立SSC值的 MPLS定標模型，SECV為 0.638 4，為0.730 5，應(yīng)用平均光譜建模 SECV為0.620 5為0.733 9。可見，平均光譜建模效果明顯優(yōu)于單側(cè)光譜，本試驗選取平均光譜建立模型。

圖1 葡萄果實單側(cè)光譜與平均光譜圖Fig.1 Unilateral and average absorption spectrogram of grapes

圖2為所有參與建模的400個樣品的平均光譜圖。由圖2可見，光譜變化趨勢基本一致，在波長680、978.5、1 181和2 142 nm處有明顯的吸收峰。根據(jù)WinISI4軟件分析，處于680 nm處的吸收主要是可見光區(qū)的電子振動;978.5 nm處吸收峰是O－H的二倍頻吸收，主要由水分引起，這說明水分含量對近紅外光譜影響很大;1 181、2 142 nm附近處主要是－C－H、－CH2鍵的伸縮引起的吸收，是可溶性固形物、有機酸等的特征基團［10］。

2.3 不同光譜預(yù)處理方法的選擇

偏最小二乘法(PLS)是建立定量模型的常用方法之一，相對于PLS法，改進偏最小二乘法(MPLS)由于能增強模型提取有效光譜的能力、優(yōu)化因子數(shù)，故應(yīng)用越來越廣泛。本文采用MPLS法研究不同導(dǎo)數(shù)處理與不同散射和標準化方法相結(jié)合的SSC、TA定標模型。高頻隨機噪聲是近紅外光譜采集中不可避免的誤差來源，為盡可能削弱其影響，提高信噪比，需要對光譜數(shù)據(jù)進行一定的預(yù)處理。針對不同樣本或指標，不同方法能體現(xiàn)出各自的優(yōu)勢，經(jīng)過試驗和驗證可以確定最適宜的預(yù)處理組合，改善建模效果。

圖2 玫瑰香葡萄原始吸收光譜圖Fig.2 Original absorption spectrogram of the Muscat grape

本研究在全光譜范圍內(nèi)比較了原始光譜(Log(1/R))、一階導(dǎo)數(shù)光譜(D1 Log(1/R))、二階導(dǎo)數(shù)光譜(D2 Log(1/R))結(jié)合標準正?；幚砼c去散射處理(SNV+Detrend)、標準正?；?SNV only)、去散射處理(Detrend only)、標準多元離散校正(SMSC)、加權(quán)多元離散校正(WMSC)、反相多元離散校正(IMSC)處理后的10、0℃定標模型的SECV和RCV2，結(jié)果見表 2。

由表2可見，10、0℃樣品SSC定標模型采用MPLS、D1 Log(1/R)、IMSC相結(jié)合的光譜預(yù)處理方法效果較好，其SECV分別為0.241 8、0.372 6，為0.960 9、0.940 7;10℃樣品TA同樣適宜采用該法，其SECV為0.016 2，RCV2為0.898 1;0℃樣品TA效果最好的建模方法為D1 Log(1/R)與SNV only相結(jié)合，SECV 為0.018 9，RCV2為0.879 1。多元離散校正是較常用的光譜預(yù)處理方法，反相多元離散校正(IMSC)是多元離散校正的衍生，其假定了光譜陣中的全部樣品對不同頻率的光波有相同的散射系數(shù)，通過單條光譜的反相移動、旋轉(zhuǎn)，盡可能將其與平均光譜進行擬合，趨向于典型的線性關(guān)系。標準正常化(SNV)與IMSC作用基本類似，認為光譜在不同波長數(shù)據(jù)點的吸光度符合一定分布規(guī)律，用原始光譜與校正后的光譜差除以標準差，可以較好地消除類內(nèi)距離，削減誤差。由于樣品光譜基線漂移的影響較大，采用Log(1/R)和D2 Log(1/R)處理效果均不理想，一階導(dǎo)數(shù)處理更有效地消除了背景噪聲的干擾，銳化扁平峰，區(qū)分重疊峰，提升了分辨能力和靈敏性［11］。但導(dǎo)數(shù)處理在去除低頻基線時，也使高頻噪音被放大，需要結(jié)合平滑和其他預(yù)處理。0℃冷藏后的葡萄建模效果比10℃的稍差，原因可能是隨貯藏期延長，主要含氫成分如水、有機酸、糖類物質(zhì)等受低溫影響，含量和結(jié)構(gòu)都有較大變化，雖然測定溫度相同但內(nèi)部品質(zhì)改變不可逆轉(zhuǎn)，造成光譜擬合度較差。

表2 不同光譜預(yù)處理的定標結(jié)果Table 2 Statistical results of models constructed by different pretreatment

得到最優(yōu)預(yù)處理方法組合后，利用其建立全部樣品的SSC、TA綜合定標模型，應(yīng)用MPLS結(jié)合D1 Log(1/R)、IMSC處理的SSC模型SECV為0.465 8，R2CV為0.920 5。比較MPLS結(jié)合D1 Log(1/R)、IMSC處理與D1 Log(1/R)與SNV only處理的TA模型，其SECV 分別為 0.020 7、0.021 1，RCV2為0.831 2、0.827 0?？梢姡瑧?yīng)用D1 Log(1/R)結(jié)合IMSC預(yù)處理可以建立同時預(yù)測糖酸品質(zhì)的綜合模型。綜合模型與單一溫度、單一指標模型相比較，SECV高、R2CV低，模型效果較差。

2.4 不同貯藏溫度模型及綜合模型的預(yù)測評價

為了驗證定標模型的可靠性與準確性，分別用各自最優(yōu)定標模型對10、0℃貯藏樣品及綜合模型驗證集果實SSC、TA光譜進行分析，預(yù)測結(jié)果如表3所示。可見，10、0℃模型預(yù)測標準差均較低，預(yù)測值和實測值相關(guān)性較好，殘差和較低，模型較穩(wěn)定，均可以起到很好的預(yù)測效果，其中SSC模型RPD達到4以上，預(yù)測效果最優(yōu)，TA模型精度有待提高。綜合模型預(yù)測準確度較單一溫度較低，其TA模型只能起到粗略預(yù)測的作用，模型泛化性不強。

以指標的模型預(yù)測值和實測值作圖直觀體現(xiàn)其相關(guān)性，結(jié)果如圖3～圖5所示。

綜合模型樣本變化覆蓋范圍大，適用范圍寬，可在相同的預(yù)處理條件下同時對SSC、TA進行檢測，但其定標建模效果和分析預(yù)測的精度均變差。原因可能是綜合模型樣本容量大，包含奇異點也較多;樣本SSC、TA分布相對于單一溫度模型樣本均勻性較差;模型同時預(yù)測SSC、TA，功能上的擴展帶來了精度的相對損失。因此，貯藏溫度對玫瑰香葡萄貯藏期間糖酸品質(zhì)模型有一定影響，相同貯溫模型在解決樣本指標變化基本呈線性的問題時較有優(yōu)勢，而通過樣本補充或擬合方法的改進進一步提高綜合模型精度，對近紅外糖酸檢測模型適用性會有很大提高。

表3 不同貯藏溫度模型及綜合模型的預(yù)測結(jié)果Table 3 Prediction results of different storage temperature models and comprehensive model

圖3 10℃貯藏葡萄SSC、TA實測值與預(yù)測值的相關(guān)性Fig.3 Correlation between predicted SSC，TA values and actual values of grapes stored in 10℃

圖4 0℃貯藏葡萄SSC、TA實測值與預(yù)測值的相關(guān)性Fig.4 Correlation between predicted SSC，TA values and actual values of grapes stored in 0℃

圖5 綜合模型SSC、TA實測值與預(yù)測值的相關(guān)性Fig.5 Correlation between predicted SSC，TA values and actual values of grapes in comprehensive model

3 結(jié)論

利用可見/近紅外光譜技術(shù)建立葡萄糖酸品質(zhì)檢測模型時采用平均光譜效果優(yōu)于單側(cè)光譜;MPLS結(jié)合D1 Log(1/R)、IMSC建立10℃貯藏葡萄的SSC、TA定標模型效果最好;0℃貯藏葡萄的SSC同樣適用于MPLS結(jié)合D1 Log(1/R)、IMSC模型，而TA則為D1 Log(1/R)、SNV only相結(jié)合的方法具有較好的預(yù)測效果。以最優(yōu)光譜預(yù)處理方法建立2個貯藏溫度混合樣品SSC、TA綜合模型定標及預(yù)測效果較單一溫度模型的差。

綜上所述，利用可見/近紅外漫反射技術(shù)對貯藏玫瑰香葡萄果實糖酸品質(zhì)的快速無損檢測具有可行性，單一貯藏溫度模型精度較高，建立預(yù)測性能及通用性均較強的綜合模型仍需要進一步試驗和研究。

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