辛茶香，陳超

(江西省胸科醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南 昌330006)

結(jié)核病是一種由結(jié)核分枝桿菌感染，嚴(yán)重危害人類健康的慢性傳染病。對肺結(jié)核做出快速準(zhǔn)確的診斷一直是臨床工作中的一個難點(diǎn)。目前細(xì)菌學(xué)檢查仍是肺結(jié)核病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但傳統(tǒng)的涂片抗酸染色敏感性低，分枝桿菌培養(yǎng)時間長(需6~8周)，基因診斷技術(shù)的PCR，由于實(shí)驗(yàn)條件限制在很多基層單位不適合開展。因此尋找敏感、特異、快速、簡便的診斷方法十分重要[1-4]。本文利用膠體金法對活動性肺結(jié)核和非結(jié)核性肺部疾病患者血清中的結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體進(jìn)行了檢測，并以臨床診斷作為金標(biāo)準(zhǔn)評價該方法的敏感性和特異性。

1 材料與方法

1.1 一般資料 120例活動性肺結(jié)核病人均是

2015年1月至2015年4月在我院結(jié)核內(nèi)科住院的患者，其中男86例、女34例，年齡21~73歲，平均39歲，結(jié)核病的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[5]；40例非結(jié)核性肺部疾病患者均是2015年3月在我院腫瘤科和呼吸科住院的患者 (13例肺癌患者、16例COPD、11例急性支氣管炎患者)其中男31例，女9例；年齡34~80歲，平均47歲。全部病例的診斷依據(jù)為細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)、細(xì)胞學(xué)、胸部X線、生化等指標(biāo)來確診。30例健康獻(xiàn)血員由江西省血液中心提供。入選病例均留取晨痰和血清標(biāo)本；健康獻(xiàn)血員只留取血清標(biāo)本。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 試劑 膠體金法檢測結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體試劑由北京健乃喜生物技術(shù)有限公司提供，批號：F0211L4G。改良羅氏培養(yǎng)基由我院檢驗(yàn)科自配。

1.3 血清結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測 (1)在使用前，將試劑盒和待檢樣本取出平衡至室溫；(2)當(dāng)準(zhǔn)備好測試時，打開密封的鋁箔袋取出檢測卡平放于水平桌面上；(3)在檢測卡上標(biāo)上患者的樣本號；(4)用滴管或加樣器從樣本管中取2~3滴或60~90μl血清的樣本滴加于檢測卡上的樣本孔內(nèi)，滴加一滴樣本稀釋液，并保證操作過程中沒有氣泡產(chǎn)生；(5)加入樣本后10min內(nèi)判讀結(jié)果；(6)結(jié)果判讀：在質(zhì)控線C出現(xiàn)的前提下，如果只有T1反應(yīng)線出現(xiàn)，說明抗結(jié)核IgM抗體陽性，如果只有T2反應(yīng)線出現(xiàn)，說明抗結(jié)核IgG抗體陽性，如果T1和T2反應(yīng)線都出現(xiàn)，說明抗結(jié)核IgG/IgM抗體都為陽性。如果僅出現(xiàn)一條質(zhì)控線C，說明沒有檢測到結(jié)核抗體，結(jié)果為陰性。

1.4 痰涂片抗酸染色，分枝桿菌培養(yǎng) 操作方法參見《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[6]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 對試驗(yàn)計數(shù)資料用χ進(jìn)行分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 120例活動性肺結(jié)核病患者中菌陽 (涂陽或培陽)54例，菌陰66例。血清結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測菌陽肺結(jié)核的敏感性為79.6%(43/54)，菌陰肺結(jié)核的敏感性為69.7%(46/66)；診斷活動性肺結(jié)核的總敏感性為74.2%(89/120)，特異性為91.4%(64/70)。120例活動性肺結(jié)核病患者中血清結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體共檢出89例陽性，其中IgG抗體84例陽性，IgM抗體5例陽性，未見IgG和IgM抗體同時陽性。見表1。

表1 結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測結(jié)果分析

2.2 結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測與細(xì)菌學(xué)檢測結(jié)果比較 在120例活動性肺結(jié)核患者中，結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體陽性檢出率為74.2%(89/120)，遠(yuǎn)高于細(xì)菌學(xué)陽性檢出率45.0%(54/120)，χ2=21.2，P<0.005，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

結(jié)核抗體檢測從方法可以分為ELISA法、免疫色譜法(DIG-FA)和免疫膠體層析法，而檢測的效果主要在于抗原表位的選擇及純化水平。目前結(jié)核抗體IgG主要選擇使用純化的結(jié)核菌細(xì)胞壁多糖，最常用的是結(jié)核菌LAM；基因工程表達(dá)的結(jié)核分枝桿菌特異性抗原、38KDa和16KDa蛋白等[7-11]。本實(shí)驗(yàn)用膠體金免疫層析法，檢測條中含有膠體金標(biāo)記的結(jié)核抗原和提取自新西蘭白兔的IgG，小鼠抗人IgM抗體，所用的結(jié)核抗原由重組DNA方法在大腸桿菌表達(dá)獲得，因此同時可檢測血清中結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體。

本實(shí)驗(yàn)活動性肺結(jié)核血清中結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測的敏感性為74.2%，特異性為91.4%。其敏感性低于古翠姣等人報道的96.88%[12]。對菌陰活動性肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測的敏感性為69.7%，具有較高的輔助診斷價值。

結(jié)核病的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)。結(jié)核分枝桿菌再次刺激機(jī)體時，機(jī)體的漿細(xì)胞產(chǎn)生B淋巴細(xì)胞，由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白IgG、IgM抗體[13]，通常的結(jié)核抗體只對IgG進(jìn)行檢測，本實(shí)驗(yàn)對IgG檢測的同時增加了IgM的檢測，在實(shí)驗(yàn)中120例活動性肺結(jié)核血清中結(jié)核分枝桿菌IgG抗體84例陽性，IgM抗體5例陽性，因此同時檢測患者IgG/IgM抗體可以提高陽性檢出率。

40例非結(jié)核呼吸疾病患者結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測陽性率為10%(4/40)，30例健康獻(xiàn)血員結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體檢測陽性率為6.6%(2/30)，其主要原因是：(1)血清中可能存在抗原抗體復(fù)合物，或機(jī)體發(fā)生混合感染等，造成結(jié)核抗體檢測的交叉反應(yīng)；(2)全國有近半的人口感染了結(jié)核桿菌[14，15]，不排除受試者感染結(jié)核桿菌引起血液中結(jié)核抗體存在的可能。

綜上所述，利用膠體金法檢測結(jié)核分枝桿菌IgG/IgM抗體對肺結(jié)核的診斷具有快速、方便、簡單，較好的敏感性和特異性等特點(diǎn)。

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