楊麗，張寧，張嬌，胡明

(1 青島市婦女兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科,山東 青島 266034； 2 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

?

金標(biāo)法檢測(cè)胎膜早破孕婦B族鏈球菌感染及藥敏試驗(yàn)

楊麗1，張寧1，張嬌1，胡明2

(1 青島市婦女兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科,山東 青島 266034； 2 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

目的 了解胎膜早破孕婦B族鏈球菌(GBS)感染和藥物敏感(藥敏)試驗(yàn)情況，以及金標(biāo)法用于門診大規(guī)模篩查的可行性。方法 因胎膜早破在我院住院治療的孕婦185例(胎膜早破組)，取孕婦陰道和肛拭子，分別應(yīng)用金標(biāo)法和細(xì)菌培養(yǎng)法檢測(cè)GBS，并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。以150例正常孕婦作為對(duì)照。結(jié)果 胎膜早破組有33例GBS陽性，正常對(duì)照組有12例陽性，兩組比較差異有顯著性(χ2=6.89，P<0.05)。GBS陽性產(chǎn)婦45例發(fā)生早產(chǎn)和產(chǎn)褥感染及新生兒肺炎的概率高于GBS陰性的產(chǎn)婦(χ2=5.44～56.94，P<0.05)。藥敏結(jié)果顯示，確診的45例GBS對(duì)青霉素等抗生素靈敏度為100.00%，對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類耐藥達(dá)51.11%。金標(biāo)法檢測(cè)GBS與細(xì)菌培養(yǎng)法相比具有較高靈敏度(U=2.69,P<0.01)，而特異度差異無顯著性(P>0.01)。結(jié)論 GBS感染可能是產(chǎn)婦胎膜早破和不良妊娠結(jié)局的高危因素，金標(biāo)法可在臨床用于初診篩查。

B族鏈球菌；胎膜早破；感染；金標(biāo)法

B族鏈球菌(GBS)是一種β-溶血革蘭陽性鏈球菌，當(dāng)人體免疫功能降低時(shí)，易進(jìn)入泌尿生殖道繁殖，引起感染[1]。在孕婦分娩時(shí)，新生兒一旦感染此菌，有可能引發(fā)肺炎、敗血癥、腦膜炎等嚴(yán)重感染性疾病，具有發(fā)病率、致殘率、病死率高的特點(diǎn)，對(duì)妊娠婦女及新生兒的健康造成嚴(yán)重威脅[2]。1996年美國疾病預(yù)防控制中心(CDC)明確提出，對(duì)所有孕婦在圍生期均應(yīng)進(jìn)行GBS篩查。我國《孕前和孕期保健指南》(2011年)推薦對(duì)35～37周孕婦進(jìn)行GBS檢查。對(duì)GBS感染孕婦，孕期或分娩時(shí)應(yīng)用抗生素是防止新生兒GBS感染的主要措施。但傳統(tǒng)檢測(cè)GBS方法是細(xì)菌培養(yǎng)，該法耗時(shí)長，整個(gè)過程至少需要48 h,而新生兒一旦發(fā)生敗血癥48 h內(nèi)即可致死，而且假陰性較高[3-4]。2013年我院引進(jìn)GBS檢測(cè)的金標(biāo)方法，10 min就可以出結(jié)果，靈敏度較高，提高了GBS的檢出率，為臨床孕婦及新生兒感染的救治贏取了寶貴時(shí)間。本文旨在分析青島地區(qū)胎膜早破孕婦GBS感染情況及其與不良妊娠結(jié)局間的聯(lián)系，以及該菌對(duì)抗生素的敏感情況，并比較金標(biāo)法與傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法的差異，以驗(yàn)證臨床使用金標(biāo)法進(jìn)行大規(guī)模篩檢GBS的可行性。

1 材料與方法

1.1一般資料

2013年9月—2014年12月，選擇我院因胎膜早破住院治療的病人185例(胎膜早破組),同時(shí)選擇正常孕婦150例作為對(duì)照組。入選孕婦均無感染性疾病，取樣1周前均未使用青霉素及其他抗生素。以無菌棉拭子涂擦陰道下1/3分泌物及肛周分泌物，每例孕婦均同時(shí)采集兩份標(biāo)本，一份做金標(biāo)法快診，另一份做細(xì)菌培養(yǎng)。

1.2檢測(cè)方法

1.2.1GBS金標(biāo)法快診 試劑盒由華澳生物科技公司提供。操作方法如下：在試管中加入1號(hào)、2號(hào)抽取液各5滴，混勻后立即放入待測(cè)棉拭子，反復(fù)擠壓提取，棄棉拭子，用專用吸管吸出試管中提取液3滴于樣品孔中，室溫放置8～10 min后判定結(jié)果。

1.2.2細(xì)菌培養(yǎng) 將標(biāo)本接種于專用GBS鑒別平板，于35 ℃、CO2環(huán)境(體積分?jǐn)?shù)0.05～0.10)培養(yǎng)24～48 h，挑取單個(gè)菌落上機(jī)進(jìn)行鑒定和藥敏試驗(yàn)。

1.2.3藥敏試驗(yàn) 應(yīng)用法國梅里埃VITEK-2全自動(dòng)鑒定藥敏儀，質(zhì)控菌株肺炎鏈球菌ATCC49619購于中國衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。

1.2.4兩種方法檢測(cè)結(jié)果不一致時(shí)的校正 將兩種方法檢測(cè)不一致的標(biāo)本送青島大學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室行16S rDNA PCR檢測(cè)，并將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析，確定結(jié)果。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)間比較采用χ2檢驗(yàn)及U檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組GBS感染率及兩種方法檢測(cè)結(jié)果比較

胎膜早破組33例GBS陽性，金標(biāo)法與細(xì)菌培養(yǎng)法結(jié)果一致；正常對(duì)照組有12例GBS陽性，兩組比較差異有顯著性(χ2=6.89，P<0.05)。

2.2GBS感染與不良妊娠結(jié)局的關(guān)系

以早產(chǎn)、孕婦產(chǎn)褥感染、胎兒窘迫和新生兒肺炎作為不良妊娠結(jié)局的入選指標(biāo)。GBS感染的孕婦發(fā)生早產(chǎn)、產(chǎn)褥感染和新生兒肺炎的概率明顯高于正常對(duì)照組,差異有顯著性(χ2=5.44～56.94，P<0.05)；而兩組新生兒窘迫發(fā)生率比較差異無顯著性(P>0.05)。見表1。

2.3GBS陽性病人的藥敏試驗(yàn)結(jié)果

本文45例GBS陽性病人對(duì)青霉素、氨芐西林、萬古霉素等均未發(fā)現(xiàn)耐藥株，而對(duì)紅霉素等大環(huán)內(nèi)酯類的抗生素有較強(qiáng)耐藥性。見表2。

2.4兩種方法檢測(cè)GBS感染的比較

2.4.1陽性率的比較 本文335例標(biāo)本中金標(biāo)法(-)、細(xì)菌培養(yǎng)法(+)者僅1例，后經(jīng)測(cè)序鑒定為GBS。而細(xì)菌培養(yǎng)法(-)、金標(biāo)法(+)者為16例，其中10例鑒定為GBS。細(xì)菌培養(yǎng)法鑒定陽性36例，陽性率為10.75%(36/335)；金標(biāo)法檢測(cè)為陽性51例，陽性率為15.22%(51/335)。兩種方法檢測(cè)結(jié)果比較，差異無顯著性(P>0.05)。

2.4.2兩種方法靈敏度和特異度比較 最后確定GBS陽性孕婦為45例，陰性290例，細(xì)菌培養(yǎng)法靈敏度為80.00%(36/45)，特異度為100.00%(290/290)；金標(biāo)法靈敏度為97.78%(44/45),特異度為97.93%(284/290)。兩種方法靈敏度比較，差異有顯著性(μ=2.69,P<0.01)；特異度比較差異無顯著性(P>0.01)。

表1 GBS感染與不良妊娠的關(guān)系(例)

表2 GBS陽性病例的藥敏試驗(yàn)結(jié)果(n=45,χ/%)

3 討 論

GBS又稱無乳鏈球菌,是一種寄生于人類下消化道及泌尿生殖道的細(xì)菌。20世紀(jì)60年代，有研究顯示GBS可以導(dǎo)致嚴(yán)重的新生兒感染；隨后大量研究顯示，在圍生期感染中，GBS是第一位的致病菌，可以導(dǎo)致圍生兒死亡，同時(shí)也是孕產(chǎn)婦生殖道感染的重要致病菌，可導(dǎo)致泌尿系統(tǒng)感染、羊膜絨毛膜炎、產(chǎn)褥感染、孕產(chǎn)婦敗血癥和早產(chǎn)[5-6]。在我國，由于對(duì)胎膜早破孕婦早期廣泛使用抗生素，血培養(yǎng)技術(shù)較落后，臨床GBS病原學(xué)診斷陽性率很低，尚無確切的流行病學(xué)資料。本研究結(jié)果顯示，GBS感染組胎膜早破以及不良妊娠結(jié)局的發(fā)生率高于正常對(duì)照組，而且后續(xù)新生兒發(fā)生肺炎的概率也要高于正常對(duì)照組，差異有顯著性。

以往研究認(rèn)為，我國新生兒感染GBS較少見；而近年來新生兒GBS感染率有逐年增長的趨勢(shì)，一些嚴(yán)重的并發(fā)癥也開始多見，有感染10 h后即死亡的病例報(bào)告[7]，有一些GBS腦膜炎病人，臨床表現(xiàn)不特異，易并發(fā)神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，預(yù)后不佳。雖然很

多學(xué)者認(rèn)為，GBS疫苗是減少母體定植、預(yù)防母嬰傳播的最有效工具，但目前仍在研究階段，臨床上尚未推廣使用。因此，產(chǎn)前預(yù)防、早期發(fā)現(xiàn)和及時(shí)有效的治療對(duì)病兒非常重要[7]。

本文研究結(jié)果顯示，GBS主要對(duì)青霉素類靈敏度好，與美國CDC的推薦用藥相符，而對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素相對(duì)耐藥。目前認(rèn)為，由emA、emB基因編碼的核糖體甲基化酶和由mefA基因編碼的特異大環(huán)內(nèi)酯類外排機(jī)制增強(qiáng)是GBS對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物耐藥的兩大主要原因[8-9]。

1996年，美國CDC明確提出對(duì)所有孕婦圍生期均應(yīng)進(jìn)行GBS篩查。而我國在2011年《孕前和孕期保健指南》中推薦對(duì)35～37周孕婦進(jìn)行GBS檢查。由于國內(nèi)抗生素的濫用，使得全國范圍對(duì)圍生期GBS的篩檢幾乎空白。如今國家不斷出臺(tái)相關(guān)的政策，對(duì)抗生素的臨床應(yīng)用與管理進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控，加之GBS的危害比較嚴(yán)重，使得GBS的篩檢日益受到重視。一直以來，鏈球菌檢測(cè)的金標(biāo)法是細(xì)菌培養(yǎng)，但該法需要的時(shí)間較長，一般為48 h，而且操作較為繁瑣，因此限制了該技術(shù)在臨床的應(yīng)用。近年來文獻(xiàn)報(bào)道熒光定量PCR具有快速、準(zhǔn)確度高、靈敏度高等特點(diǎn)，但是該法需要的設(shè)備復(fù)雜，同時(shí)檢測(cè)成本較高，使其應(yīng)用于大規(guī)模的臨床篩查受到限制。金標(biāo)法具有操作簡便快捷、價(jià)格相對(duì)較低和無需特殊儀器等優(yōu)點(diǎn)，是快速診斷的主要方法之一,已經(jīng)在臨床上大規(guī)模應(yīng)用于檢測(cè)多種傳染病。用該法檢測(cè)GBS，在床邊取樣，10 min左右就能出結(jié)果，靈敏度較高，費(fèi)用也相對(duì)低廉；同時(shí)本文結(jié)果表明，金標(biāo)法檢測(cè)GBS與傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)方法相比有更高的靈敏度，而且假陰性率較低，在臨床用于大規(guī)模初診篩查GBS可行。由于細(xì)菌培養(yǎng)法為檢測(cè)細(xì)菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于金標(biāo)法檢測(cè)出的陽性病例，需用細(xì)菌培養(yǎng)法進(jìn)一步證實(shí)。

[1] VAN DYKE M K, PHARES C R, LYNFIELD R, et al. Eva-luation of Universal antenatal screening for group B streptococcus[J]. The New England Journal of Medicine, 2009,360(25):2626-2636.

[2] BARCAITE E, BARTUSEVICIUS A, TAMELIENE R, et al. Prevalence of maternal group B streptococcal colonisation in European countries[J]. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica, 2008,87(3):260-271.

[3] 朱敏麗,朱將虎,李海靜,等. 新生兒B族鏈球菌腦膜炎13例臨床分析和隨訪[J]. 中華兒科雜志, 2014,52(2):133-136.

[4] 時(shí)春艷,曲首輝,楊磊,等. 妊娠晚期孕婦B族鏈球菌帶菌狀況的檢測(cè)及帶菌對(duì)妊娠結(jié)局的影響[J]. 中華婦產(chǎn)科雜志, 2010,45(1):12-16.

[5] GARLAND S M, COTTRILL E, MARKOWSKI L, et al. Antimicrobial resistance in group B streptococcus: the Australian experience[J]. Journal of Medical Microbiology, 2011,60(2):230-235.

[6] PARK K H, KIM K H, KANG J H, et al. Current status and clinical presentations of invasive neonatal Group B streptococcal infections in Korea[J]. Pediatrics International: Official Journal of the Japan Pediatric Society, 2011,53(2):236-239.

[7] 翁秀琴,秦潔,丁香翠,等. β-族溶血性鏈球菌感染與胎膜早破及母兒預(yù)后[J]. 中國優(yōu)生與遺傳雜志, 2009,17(9):68-69.

[8] 劉成,孫寧. 胎膜早破與生殖道B族溶血性鏈球菌和解脲支原體感染的關(guān)系[J]. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2006,21(1):51-53.

[9] 王麗燕,申桂芝. 嬰兒重癥肺炎并心力衰竭148例病原學(xué)分析[J]. 齊魯醫(yī)學(xué)雜志, 2008,23(6):538-539.

(本文編輯 黃建鄉(xiāng))

DETECTION OF GROUP B STREPTOCOCCAL INFECTION IN PREGNANT WOMEN WITH PREMATURE RUPTURE OF MEMBRANE USING COLLOIDAL GOLD METHOD

YANGLi,ZHANGNing,ZHANGJiao,HUMing

(Department of Clinical Laboratory, Women and Children's Hospital of Qingdao, Qingdao 266034, China)

ObjectiveTo investigate group B streptococcal (GBS) infection and drug sensitivity test in pregnant women with premature rupture of membrane (PRM), and the feasibility of colloidal gold (CG) method for mass screening in outpatient service.MethodsEmploying CG method and germiculture, vaginal and anal swabs were collected from 185 pregnant women with PRM, hospitalized in our hospital, for GBS culture and drug sensitivity test. A control group consisted of 150 normal pregnant women.ResultsThere were 33 cases of GBS positive in PRM group versus 12 cases in normal control group, the difference between the two groups was significant (χ2=6.89,P<0.05). In 45 GBS-positive pregnant women, the probability of premature birth, puerperal infection and neonatal pneumonia was higher than that in GBS negative ones (χ2=5.44-56.94,P<0.05). The drug sensitivity test showed that in 45 cases of confirmed GBS was 100 percent sensitive to penicillin, and 51.11% were resistant to macrolides. CG method had a higher sensitivity than germiculture in detecting GBS (U=2.69,P<0.01), but the difference in specificity was not significant (P>0.01).ConclusionGroup B streptococcal is likely to be a high risk factor for premature rupture of membrane and harmful pregnancy outcome. Colloidal gold method can be used for preliminary screening.

streptococcus agalactiae; fetal membranes, premature rupture; infection; colloidal gold method

2015-04-16;

2015-09-03

楊麗(1984-)，女，碩士，檢驗(yàn)師。

胡明(1985-)，男，博士，講師。

R714.43

A

1008-0341(2015)06-0698-03