葛香麗

·綜述·

現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用

葛香麗

利用分子生物學(xué)方法, 以核酸生化為基礎(chǔ)的新技術(shù)作為微生物檢驗(yàn)的最新方法, 已經(jīng)廣泛的應(yīng)用于微生物檢驗(yàn)的多個(gè)領(lǐng)域當(dāng)中?，F(xiàn)階段的微生物檢驗(yàn)工作已經(jīng)鋪設(shè)到各個(gè)領(lǐng)域當(dāng)中, 通過(guò)采用微生物檢測(cè)的方法, 不僅可以在客觀上獲得較為精確的結(jié)果, 同時(shí)能夠在主觀上節(jié)省檢測(cè)時(shí)間, 對(duì)其他的工作具有較大的積極意義。在微生物檢驗(yàn)當(dāng)中, 比較常用的是現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù), 日后應(yīng)深入研究,健全技術(shù)體系, 促進(jìn)檢驗(yàn)水平的提升。

分子生物學(xué)；微生物；檢驗(yàn)

在實(shí)際的微生物檢驗(yàn)工作中, 現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)主要研究生物大分子--核算機(jī)器表達(dá)產(chǎn)物--蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能、遺傳等相互作用的科學(xué)。在微生物檢驗(yàn)中應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù), 可取得以下效果：①現(xiàn)代分子生物學(xué)的研究領(lǐng)域廣泛, 促使微生物檢驗(yàn), 在檢驗(yàn)精度和檢驗(yàn)范圍上都有提升。②隨著微生物檢驗(yàn)的認(rèn)可程度提升, 現(xiàn)代分子生物學(xué)的發(fā)展會(huì)更加迅速, 這將推動(dòng)各個(gè)領(lǐng)域的工作持續(xù)進(jìn)步, 包括農(nóng)業(yè)、醫(yī)療行業(yè)等。本研究主要討論現(xiàn)代分析生物學(xué)技術(shù)在微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用, 現(xiàn)做如下綜述。

1 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)

微生物檢驗(yàn)的類別較多, 檢驗(yàn)?zāi)康牡牟煌瑢?dǎo)致檢驗(yàn)技術(shù)上的差距較大?，F(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)講究高精度、快速度、高準(zhǔn)確性, 在眾多技術(shù)當(dāng)中, 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)是比較有代表性的現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)。就現(xiàn)階段的工作來(lái)看, 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)能夠?qū)Χ喾N病原微生物進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)或者是鑒定［1］,其原理為：同一個(gè)聚合酶鏈反應(yīng)管中, 可同時(shí)加入多種病原微生物的特異性引物, 進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)擴(kuò)增, 達(dá)到同時(shí)檢測(cè)的效果［2-4］。從某大學(xué)校園附近的垃圾中轉(zhuǎn)站采集新鮮生活垃圾樣品80 kg, 人工分選出其中的廚余垃圾, 主要組成為蔬果、剩飯菜等, 也包括少量的雜草和樹(shù)葉, 約占生活垃圾的40%［5］。通過(guò)應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)可達(dá)到較為理想的效果, 堆肥材料的理化性質(zhì), 見(jiàn)表1。

表1 堆肥材料的理化性質(zhì)

2 基因芯片技術(shù)

現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)為了能夠在微生物檢驗(yàn)中取得更好的效果, 研究出了比較高端的基因芯片技術(shù)。該技術(shù)在20世紀(jì)90年代被開(kāi)發(fā)出來(lái), 主要是將玻片、尼龍膜作為載體,在單位面積上高密度并且有秩序的排列大量生物活性分子,力求達(dá)到一次實(shí)驗(yàn)同時(shí)檢測(cè)多種疾病, 或者是分析多種生物樣品的目的。基因芯片技術(shù)往往用于比較復(fù)雜的微生物檢驗(yàn),經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的發(fā)展與總結(jié), 該項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)非常成熟?；蛐酒夹g(shù)具有較高的優(yōu)越性, 是其他方法所不能超越的：①基因芯片技術(shù)可用于檢測(cè)抗體產(chǎn)生前的感染, 便于臨床上進(jìn)行早期診斷。現(xiàn)今的很多患者臨床癥狀相對(duì)特殊, 并且無(wú)法通過(guò)傳統(tǒng)的檢測(cè)技術(shù)來(lái)獲得精確的數(shù)據(jù)和信息。在治療過(guò)程中,由于數(shù)據(jù)的缺乏, 無(wú)法采取針對(duì)性的治療方式, 不僅耽誤了患者的康復(fù), 同時(shí)也影響了醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展。通過(guò)應(yīng)用基因芯片技術(shù), 可對(duì)疑似患者進(jìn)行早期診斷, 真正意義上實(shí)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)、早治療。②基因芯片技術(shù)解決了其他方法不能確定的感染問(wèn)題。感染在臨床上一直是一個(gè)難以處理的問(wèn)題, 通過(guò)基因芯片技術(shù), 能有效確定感染范圍、感染程度等。

3 核算探針

現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展, 促進(jìn)了微生物檢驗(yàn)體系的不斷健全。由于微生物的影響比較廣泛, 而且對(duì)社會(huì)、醫(yī)學(xué)、生物領(lǐng)域都具有決定性的影響。所以, 單憑前兩項(xiàng)技術(shù)并沒(méi)有辦法取得理想的效果, 還應(yīng)該積極研究其他技術(shù)。經(jīng)過(guò)深入探究, 產(chǎn)生了核算探針技術(shù)。該項(xiàng)技術(shù)與其他兩項(xiàng)具有本質(zhì)的區(qū)別, 從概念上來(lái)講, 核算探針是指帶有標(biāo)記的特異DNA片段, 根據(jù)堿基互補(bǔ)原則, 核算探針能特異性的與目的DNA雜交, 最后用特定的方法測(cè)定標(biāo)記物。就現(xiàn)階段的微生物檢驗(yàn)而言, 核算探針主要應(yīng)用于以下幾個(gè)方面：①核算探針可用于檢測(cè)無(wú)法培養(yǎng), 并且能用作生化鑒定、不可觀察的微生物產(chǎn)物、缺乏診斷抗原等方面的檢測(cè)。臨床上比較明顯的檢測(cè)物質(zhì)就是腸毒素, 通過(guò)應(yīng)用核算探針進(jìn)行檢測(cè), 可有效獲得該物質(zhì)的各項(xiàng)數(shù)據(jù)及指標(biāo), 對(duì)診治工作提供必要的參考。②核算探針可以用于檢測(cè)病毒病, 例如檢測(cè)感染病毒、流行病學(xué)調(diào)查研究, 同時(shí)還可以應(yīng)用該技術(shù)來(lái)區(qū)分有毒、無(wú)毒菌株。對(duì)于核算探針而言, 該項(xiàng)技術(shù)可直接對(duì)檢測(cè)物質(zhì)的本質(zhì)進(jìn)行檢測(cè), 而不是通過(guò)表面檢測(cè)來(lái)獲得結(jié)果。DNA檢測(cè)的準(zhǔn)確率和權(quán)威性都很高, 這就為核算探針的應(yīng)用提供了較為堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。③核算探針還能夠檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)抗藥基因?？顾幓虻臋z測(cè)結(jié)果, 可提供給相關(guān)醫(yī)療機(jī)構(gòu)研究臨床治療藥物, 避免在患者體內(nèi)產(chǎn)生抗藥性, 提高藥物的臨床療效, 減輕患者的病痛。

4 小結(jié)

本研究對(duì)現(xiàn)代分析生物學(xué)技術(shù)在微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)行討論, 相對(duì)而言, 現(xiàn)代分析生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用, 為很多工作都提供了較大的便利, 尤其是臨床醫(yī)學(xué)的研究和治療工作。在采集樣品分析和病毒檢測(cè)等方面, 均有突出表現(xiàn)。在今后的微生物檢測(cè)工作中, 應(yīng)進(jìn)一步應(yīng)用現(xiàn)代分析生物學(xué)技術(shù),促進(jìn)檢測(cè)工作水平和檢測(cè)技術(shù)的提升。相信在今后的微生物檢驗(yàn)中, 不僅可獲得更有效的檢測(cè)結(jié)果, 同時(shí)還能夠促進(jìn)現(xiàn)代分析生物學(xué)技術(shù)的持續(xù)發(fā)展, 促進(jìn)各個(gè)領(lǐng)域的建設(shè)和進(jìn)步。

［1］ 李枷霖, 鄭斯竹, 詹國(guó)輝, 等.皮蠹科昆蟲(chóng)分子生物學(xué)研究進(jìn)展.基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué), 2014, 5(6):1126-1132.

［2］ 呂樹(shù)軍.食品微生物檢驗(yàn)內(nèi)容與檢測(cè)技術(shù)分析.工業(yè)技術(shù), 2013 (17):119.

［3］ 侯海軍, 秦紅靈, 陳春蘭, 等.土壤氮循環(huán)微生物過(guò)程的分子生態(tài)學(xué)研究進(jìn)展.農(nóng)業(yè)現(xiàn)代化研究, 2014, 5(6):588-594.

［4］ 胡原.分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用及發(fā)展趨勢(shì).衛(wèi)生職業(yè)教育, 2014, 19(10):12-13.

［5］ 王立.如何利用分子生物學(xué)技術(shù)鑒定農(nóng)作物品種真實(shí)性和純度.生物技術(shù)世界, 2014, 9(10):35-36, 38.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.13.208

2014-12-05］

454650 濟(jì)源市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科