胡冬根黃芳輝梁生林

厚樸皮、葉、花水提液抗炎作用的比較研究*

胡冬根①黃芳輝②梁生林③

目的：探討并比較厚樸皮、葉、花的抗炎作用強弱。方法：采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹炎癥模型，觀察高、低劑量厚樸皮、葉、花水提取液的抗炎作用。結果：厚樸根皮、干皮、枝皮、葉和花水提取液高、低劑量組對小鼠耳廓涂抹二甲苯所致炎癥均有明顯的抑制作用，與蒸餾水模型組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01、P<0.05）；與厚樸干皮所對應劑量組比較，厚樸根皮、枝皮、葉和花水提取液高、低劑量組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。結論：厚樸各部位的皮（根、干、枝皮）以及花和葉水提取液都具有一定的抗炎作用，而且在抗炎方面可以采用枝、根皮以及葉和花代替干皮使用。

厚樸皮、葉、花；水提物；抗炎；耳腫法

厚樸是一種常用的中藥，屬于國家二級保護野生藥材，為木蘭科植物厚樸或凹葉厚樸經(jīng)過干燥處理的根、干及枝的皮。性味苦、辛、溫，歸脾胃、肺以及大腸經(jīng)。主要功效為燥濕消痰、下氣除滿[1]。大量的藥理實驗研究顯示，厚樸具有鎮(zhèn)吐作用、促進消化性潰瘍愈合作用、促進胃腸平滑肌蠕動作用[2-8]；減輕炎癥作用、對炎癥性疼痛具明顯止痛作用、對G+、G-菌具有抑制作用[9-14]；還具有減輕咳嗽、排出痰液作用等[15-17]。長時間以來由于厚樸的過度采伐，使得厚樸資源消耗過度而日漸減少，因而擴大厚樸抗炎藥用部位的研究和尋找新的抗炎藥用資源顯得非常迫切。本實驗采用致炎劑二甲苯涂擦小鼠耳廓造成的小鼠耳廓腫脹急性炎癥模型，來研究厚樸花和葉水提物的抗炎作用，并就其抗炎作用的強

弱與厚樸干皮進行了比較，比較它們在抗炎方面是否無差異，其目的為擴大厚樸的抗炎藥用部位、尋找新的藥用資源提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 KM小鼠，SPF級，體重20 g左右，雌雄各半，購買于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號：SCXK（湘）2011-0003。

1.2 實驗藥物 厚樸皮（根、干、枝皮）、花和葉，均從生長于井岡山上，具有30年樹齡的厚樸樹上所采，經(jīng)井岡山大學基礎醫(yī)學與藥學院藥用植物教研室鑒定為木蘭科植物厚樸（Magnolia officinalis Rehd. et Wils.）；阿司匹林片，規(guī)格0.1 g，批號BJ04931，拜耳醫(yī)藥保健有限公司（進口分裝）。

1.3 主要儀器 RE-52A旋轉蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；SHB-ⅢA循環(huán)水式多用真空泵，上海豫康科教儀器設備有限公司；DG160C型中藥粉碎機，浙江瑞安飛達藥材器械廠；YLQ-Q4耳腫打耳器，山東省醫(yī)學科學院設備站；JA2003N電子天平，上海精密科學儀器有限公司；計時器。

1.4 實驗方法

1.4.1 藥物的制備

1.4.1.1 厚樸干皮水提取液的制備 稱取150 g干燥的厚樸干皮，用中藥粉碎機適度粉碎后，用蒸餾水浸泡0.5 h，加12倍的蒸餾水用文火煎煮1 h，靜止過濾，濾渣再用10倍量蒸餾水用文火煎煮2次，每次各0.5 h，靜止過濾。合并3次濾出液，用旋轉蒸發(fā)儀旋轉蒸發(fā)濃縮為100 mL，得到濃度為生藥1.5 g/mL的溶液，以此作為小鼠灌胃給藥時的高劑量組的給藥濃度，低劑量組的灌胃給藥濃度生藥0.5 g/mL用時用蒸餾水稀釋配制。

1.4.1.2 厚樸根皮水提取液制備 稱取150 g干燥的厚樸根皮，用中藥粉碎機適度粉碎后，用蒸餾水浸泡0.5 h，加12倍的蒸餾水用文火煎煮1 h，靜止過濾，濾渣再用10倍量蒸餾水用文火煎煮2次，每次各0.5 h，靜止過濾。合并3次濾出液，用旋轉蒸發(fā)儀旋轉蒸發(fā)濃縮為100 mL，得到濃度為生藥1.5 g/mL的溶液，以此作為小鼠灌胃給藥時的高劑量組的給藥濃度，低劑量組的灌胃給藥濃度生藥0.5 g/mL用時用蒸餾水稀釋配制。

1.4.1.3 厚樸枝皮水提取液制備 稱取150 g干燥的厚樸枝皮，用中藥粉碎機適度粉碎后，用蒸餾水浸泡0.5 h，加12倍的蒸餾水用文火煎煮1 h，靜止過濾，濾渣再用10倍量蒸餾水用文火煎煮2次，每次各0.5 h，靜止過濾。合并3次濾出液，用旋轉蒸發(fā)儀旋轉蒸發(fā)濃縮為100 mL，得到濃度為生藥1.5 g/mL的溶液，以此作為小鼠灌胃給藥時的高劑量組的給藥濃度，低劑量組的灌胃給藥濃度生藥0.5 g/mL用時用蒸餾水稀釋配制。

1.4.1.4 厚樸葉水提取液制備 稱取150 g干燥的厚樸葉，用中藥粉碎機適度粉碎后，用蒸餾水浸泡0.5 h，加12倍的蒸餾水用文火煎煮1 h，靜止過濾，濾渣再用10倍量蒸餾水用文火煎煮2次，每次各0.5 h，靜止過濾。合并3次濾出液，用旋轉蒸發(fā)儀旋轉蒸發(fā)濃縮為100 mL，得到濃度為生藥1.5 g/mL的溶液，以此作為小鼠灌胃給藥時的高劑量組的給藥濃度，低劑量組的灌胃給藥濃度生藥0.5 g/mL用時用蒸餾水稀釋配制。

1.4.1.5 厚樸花水提取液制備 稱取150 g干燥的厚樸花，用中藥粉碎機適度粉碎后，用蒸餾水浸泡0.5 h，加12倍的蒸餾水用文火煎煮1 h，靜止過濾，濾渣再用10倍量蒸餾水用文火煎煮2次，每次各0.5 h，靜止過濾。合并3次濾出液，用旋轉蒸發(fā)儀旋轉蒸發(fā)濃縮為100 mL，得到濃度為生藥1.5 g/mL的溶液，以此作為小鼠灌胃給藥時的高劑量組的給藥濃度，低劑量組的灌胃給藥濃度生藥0.5 g/mL用時用蒸餾水稀釋配制。

1.4.2 厚樸皮、葉、花水提液對小鼠耳腫法的抗炎實驗 取144只體重為20 g左右的雌雄各半的清潔級昆明種小鼠[18]，按性別和體重隨機分為十二組：蒸餾水陰性對照組（10 mL/kg），阿司匹林陽性對照組（0.5 g/kg），厚樸根皮水提取液高劑量（生藥15 g/kg）組和低劑量（生藥5 g/kg）組，厚樸干皮水提取液高劑量（生藥15 g/kg）組和低劑量（生藥5 g/kg）組，厚樸枝皮水提取液物高劑量（生藥15 g/kg）組和低劑量（生藥5 g/kg）組，厚樸葉水提取液高劑量（生藥15 g/kg）組和低劑量（生藥5 g/kg）組，厚樸花水提取液高劑量（生藥15 g/kg）組和低劑量（生藥5 g/kg）組，每組12只。給藥途徑每鼠均為灌胃給藥，灌胃體積均為10 mL/kg，1次/d，連續(xù)灌胃5 d。最后一次灌胃給藥1 h后，將100%二甲苯0.05 mL均勻涂抹在每鼠左耳廓兩面致炎，以右耳作對照。0.5 h后拉斷頸椎將小鼠處死，從小鼠的耳根部剪下兩耳，用小鼠用鼠耳打孔器（直徑為8 mm）分別在左右兩耳的相同部位打下耳片，用電子天平稱其重量，以左耳片重量減去右耳片重量之差值作為炎癥指標耳腫脹度，計算腫脹抑制率。耳腫脹抑制率（%）=（蒸餾水組腫脹度-給藥組腫脹度） / 蒸餾水組腫脹度×100%。

1.5 統(tǒng)計學處理 應用統(tǒng)計學軟件Stata 8.0分析處理實驗數(shù)據(jù)，計量資料以（±s）表示，采用單因素方差分析對組間進行比較，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

與蒸餾水模型組比較，厚樸根皮水提取液高劑量（生藥15 g/kg）組和低劑量（生藥5 g/kg）組明顯抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，與蒸餾水模型組相比差異顯著（P<0.01）；厚樸干皮水提取液高劑量（生藥15 g/kg）組和低劑量（生藥5 g/kg）組明顯抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，與蒸餾水模型組相比差異顯著（P<0.01）；厚樸枝皮水提取液高劑量（生藥15 g/kg）組和低劑量（生藥5 g/kg）組明顯抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，與蒸餾水模型組相比差異明顯（P<0.01、P<0.05）；厚樸葉水提取液高劑量（生藥15 g/kg）組和低劑量（生藥5 g/kg）組明顯抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹（P<0.01、P<0.05），與蒸餾水模型組相比差異明顯（P<0.01、P<0.05）；厚樸花水提取液高劑量（生藥15 g/kg）組和低劑量（生藥5 g/kg）組明顯抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，與蒸餾水模型組相比差異顯著（P<0.01）；且它們對小鼠耳廓腫脹的抑制程度與所用的劑量之間呈現(xiàn)正相關。阿司匹林（0.5 g/kg）組也顯著抑制二甲苯所引起的小鼠耳廓腫脹（P<0.01）。與阿司匹林組相比，厚樸根皮、干皮、枝皮、葉及花水提取液高劑量組和低劑量組差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與厚樸干皮所對應劑量組比較，厚樸枝皮、根皮、葉及花水提取液組差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

表1 厚樸根皮、干皮、枝皮、葉和花水提液對二甲苯所致小鼠耳腫脹的抑制作用

3 討論

厚樸是一種常用的中藥，為國家二級保護中藥材。由于中國制藥業(yè)采用厚樸配方的中西成藥多達200多種，長時間以來由于厚樸的過度采伐，使得厚樸資源消耗過度而日漸減少，因而擴大厚樸的抗炎藥用部位研究和尋找新的抗炎藥用資源顯得非常迫切。本實驗采用二甲苯刺激小鼠耳廓致耳廓腫脹炎癥模型，研究比較了厚樸皮（根、干、枝皮）、花和葉水提取液對小鼠耳腫脹的抑制作用。

本實驗采用化學致炎劑二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹是一種以血漿滲出及組織水腫為主的急性炎癥反應[18]，本抗炎實驗結果表明厚樸皮（根、干、枝皮）、花和葉水提取液高低劑量灌胃給藥均明顯抑制二甲苯所引起的小鼠耳廓腫脹，說明厚樸皮、葉、花水提取液灌胃給藥對急性炎癥均具有顯著抑制作用。厚樸根皮、干皮、枝皮、葉和花都含有酚性成分厚樸酚和和厚樸酚，且總酚量依次為根皮>干皮>枝皮>花>葉[19-21]；厚樸酚及和厚樸酚可顯著抑制COX-2活性，從而對前列腺素生物合成產(chǎn)生影響[22]；厚樸酚還可通過抑制IκB激酶（IKK）發(fā)揮抗炎作用[23]。由于厚樸根皮、干皮、枝皮、葉、花中酚性成分含量不同，因而呈現(xiàn)的抗炎作用強度也有所差異。

實驗結果還表明對小鼠耳腫法所致炎癥的抗炎作用，厚樸干皮與各對應劑量組的根皮、枝皮、葉和花水提取液比較均無統(tǒng)計學差異，說明在抗炎方面厚樸根皮、枝皮、花和葉可以代替厚樸干皮使用。

綜上，在抗炎方面，厚樸皮（根、干、枝皮）、花和葉水提取液灌胃給藥均明顯，而且在抗炎方面厚樸枝及根皮、花和葉可以代替厚樸干皮使用，為厚樸在抗炎方面的藥用部位的擴大提供了實驗依據(jù)。

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Comparative Study on the Anti-inflammatory Effects of Magnolia Officinalis Bark，Leaf and Flower Water Extract in Mice

HU Dong-gen，HUANG Fang-hui，LIANG Sheng-lin.//Medical Innovation of China，2015，12（33）：014-017

Objective：To investigate and compare the anti-inflammatory effect of Magnolia officinalis bark， leaf，flower in mice.Method： By using the ear edema induced by xylene in mice， the anti-inflammatory effect of high and low doses of Magnolia officinalis root， stem and branch bark， flower， leaf water extract were observed.Result：High and low doses of Magnolia officinalis bark （root， stem and branch bark）， flower and leaf water extract could inhibit ear edema in mice， compared with the distilled water model group the differences were statistically significant （P<0.01，P<0.05）. High and low doses of Magnolia officinalis root and branch bark， flower and leaf water extract with the corresponding doses of stem bark water extract had no statistical significance （P>0.05）.Conclusion：The results shows Magnolia officinalis bark （root， stem and branch bark）， flower and leaf water extract possesses the anti-inflammatory effects， Magnolia officinalis root bark， branch bark， leave， flower could replace Magnolia officinalis stem bark for anti-inflammatory.

Magnolia officinalis bark， leaf， flower；Water extract；Anti-inflammatory；Ear edema

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.33.005

2015-09-07）（本文編輯：蔡元元）

國家科技支撐計劃課題（2012BAC11B02-6）

①江西省吉安市永豐縣八江鄉(xiāng)衛(wèi)生院 江西 永豐 331502

②江西省吉安市婦幼保健院

③井岡山大學基礎醫(yī)學與藥學院

梁生林

First-author’s address： Yongfeng County Eight River Health Hospital， Yongfeng 331502， China