張 娜，武孔云

(1.貴陽中醫(yī)學院，貴州 貴陽 550002；2.貴陽學院，貴州 貴陽 550005)

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米槁精油對半夏鐮刀菌的抑制作用研究

張 娜1，武孔云2

(1.貴陽中醫(yī)學院，貴州 貴陽 550002；2.貴陽學院，貴州 貴陽 550005)

目的：明確米槁精油對半夏鐮刀菌的抑制作用。方法：以半夏鐮刀菌為供試菌種，采用生長速率法測定不同濃度米槁精油的抑菌活性。結(jié)果：米槁精油對半夏鐮刀菌有較好的抑制作用，其作用大小與精油的濃度相關，濃度越大，抑制作用越強。結(jié)論：米槁精油在較低濃度下對半夏鐮刀菌有較高的抑制作用，可將其作為新型植物源生物農(nóng)藥的來源。

米槁精油；抑菌活性；半夏鐮刀菌；生長速率法

米槁(CinnamomummigaoH. W. Li)為樟科(Lauraceae)樟屬木本植物，藥用部位為其干燥成熟果實，為中國貴州省苗族、布依族民間習用藥材[1]。有關文獻資料證明米槁果實的揮發(fā)油具有明顯的體外體內(nèi)抗菌、抗病毒、殺蟲等功效[2]，并證實該揮發(fā)油中不含對人體有害的黃樟醚[3]。目前，對于米槁體外抗菌作用的研究一般以金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和致病性大腸桿菌等為供試菌種，而對于植物病原真菌抑制作用的研究較少。本課題以半夏鐮刀菌[4]為供試菌種，測定其對半夏鐮刀菌的抑菌活性，期望找到新的抗病資源，為植物源殺菌劑的開發(fā)提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試藥材：米槁果實購于貴州宏宇藥業(yè)有限公司，并由貴陽學院武孔云教授鑒定。供試菌種：半夏鐮刀菌(Fusariumsp.)由貴州省農(nóng)業(yè)科學院中藥材研究所曾令祥老師提供。培養(yǎng)基：采用馬鈴薯瓊脂固體培養(yǎng)基[5]。試劑：吐溫-80，50%多菌靈可濕性粉劑，純化瓊脂粉，葡萄糖，無菌水。儀器：烘箱，手提式粉碎機，恒溫培養(yǎng)箱，高壓滅菌鍋，個人無菌操作臺，分析天平(感量0.1mg)，基礎實驗器材。

1.2 實驗方法

1.2.1 精油制備 采用水蒸氣蒸餾法[6]提取米槁精油，經(jīng)無水亞硫酸鈉干燥后置于棕色瓶中備用。

1.2.2 試液配制 取一定體積的精油與等體積的吐溫-80均勻混合后，用無菌水定容至一定體積，配制成200mL/L的溶液，然后采用倍比稀釋法將其依次用無菌水稀釋成100mL/L，50mL/L，25mL/L，12.5mL/L濃度梯度的溶液，備用。依相同方法配制相同系列濃度的吐溫-80溶液為陰性對照。用無菌水配制系列濃度(800mg/L，400mg/L，200mg/L，100mg/L，50mg/L)的多菌靈溶液為陽性對照。

1.2.3 抑菌試驗 采用菌絲生長速率測定法[7]測定各試液對半夏鐮刀菌的抑制效果。將配制好的系列濃度的精油溶液、吐溫-80溶液和多菌靈溶液分別加至已接種好且已知直徑的菌落上，完全覆蓋菌絲，3次重復，并以無菌水為空白對照，26℃恒溫培養(yǎng)，待空白對照菌落接近培養(yǎng)皿邊緣時，以十字交叉法測定菌落直徑，計算抑制率。按公式計算抑制率：

菌絲生長抑制率=(對照菌落菌絲生長量-處理菌落菌絲生長量)/對照菌落菌絲生長量×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 3種試液的抑菌效果

采用生長速率法分別測定米槁精油、多菌靈和吐溫-80對半夏鐮刀菌的室內(nèi)抑制作用，結(jié)果見表1。由表1可知，不同濃度下的米槁精油和多菌靈對半夏鐮刀菌均有抑制作用，并且抑制率隨濃度的增加而增加；而吐溫-80對半夏鐮刀菌沒有明顯抑制作用。

表1 3種藥劑對半夏鐮刀菌菌絲生長的抑制效果

2.2 抑制作用與藥劑濃度的相關性分析

用SPSS17.0軟件對藥劑處理結(jié)果進行統(tǒng)計分析，計算抑制率和回歸方程，統(tǒng)計結(jié)果如表2所示。由表2可知，多菌靈與米槁精油的回歸方程的相關系數(shù)均在0.95以上，說明抑制作用與藥劑濃度呈正相關。

表2 米槁精油與多菌靈的回歸方程

3 討論

本研究結(jié)果顯示，米槁精油對半夏鐮刀菌有較好的抑制作用，且在濃度為12.5ml/L時，抑制率為58.74%，說明其低濃度下也表現(xiàn)出較好的抑制作用。然而，本研究只是對米槁精油的粗提物進行了室內(nèi)抑菌活性的測定，其具體的抑菌活性成分有待明確。同時，本研究對于半夏鐮刀菌的抑制作用只著眼于對菌絲的抑制效果，其作用機制也需做進一步研究。根據(jù)研究結(jié)果，有必要進行針對性的深入研究，為充分、合理利用植物資源以及進一步開發(fā)植物源殺菌劑提供依據(jù)。

[1] 趙立春, 邱明華, 邱德文, 等. 苗藥大果木姜子果實揮發(fā)油化學成分研究[J]. 西北藥學雜志, 2009,24(5):353.

[2] 陳達, 楊佃志. 大果木姜子不同組方提取物體外抗菌試驗研究[J]. 中國民族民間醫(yī)藥, 2010,19(18):42- 44.

[3] 李天祥. 米槁精油提取與分離及其化學成分的研究[D]. 天津：天津大學, 2004.

[4] 曾令祥, 李德友. 貴州地道中藥材半夏病蟲害種類調(diào)查及綜合防治[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科技, 2009,15(1):92-95.

[5] 趙永強, 張成玲, 張薇, 等. 4種殺菌劑對煙草根黑腐病菌的室內(nèi)毒力測定[J]. 中國煙草學報, 2009,37(1):49.

[6] 國家藥典委員會. 中國藥典[M]. 一部.北京: 化學工業(yè)出版社, 2005:136-137，143， 附錄: 57-58.

[7] 吳文君. 植物化學保護實驗技術(shù)導論[M]. 西安: 陜西科技出版社, 1998：3.

(責任編輯：宋勇剛)

Study on the Inhibition Effect of Essential Oil of Cinnamomum Migao Pinellia Fusarium

Zhang Na1, Wu Kongyun2

(1 Guiyang College of Traditional Chinese Medicine ,Guizhou 550002,China; 2 Guiyang University, Guizhou 550005, China)

Objective:The study aimed to determine the inhibition effect of essential oil extracted from Migao on Fusarium sp. in Pinellia ternate(Thunb.)Breit.Methods:The antifungal activity of essential oil in different concentration extracted from Migao against Fusarium sp. in Pinellia ternate(Thunb.)Breit was determined by growth rate methods.Results:Essential oil extracted from Migao showed significant inhibition effect on Fusarium sp. in Pinellia ternate(Thunb.)Breit. Its antifungal effect was positively correlative with its concentration, and the antifungal effect was stronger with the increasing concentration.Conclusion:The essential oil extracted from Migao at low concentration could play higher inhibition function, which could be used as the good resource of new botanical bio-pesticides.

Essential Oil; Antifungal Activity; Fusarium sp.; Growth Rate Methods

2014-09-06

張娜(1989-)，女，貴陽中醫(yī)學院碩士研究生，研究方向為天然產(chǎn)物化學。

R285.5

A

1673-2197(2015)01-0015-02

10.11954/ytctyy.201501008