劉會(huì)民 ，劉蓬蓬

(1.朝陽市第二人民醫(yī)院，遼寧 朝陽 122000；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600)

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正交試驗(yàn)優(yōu)選關(guān)黃柏炭最佳炮制工藝研究

劉會(huì)民1，劉蓬蓬2

(1.朝陽市第二人民醫(yī)院，遼寧 朝陽 122000；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600)

目的：優(yōu)選關(guān)黃柏炭的炮制工藝。方法：以鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀為指標(biāo)，選擇炒制溫度、炒制時(shí)間為考察因素并結(jié)合飲片炒炭后的外觀性狀要求，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選關(guān)黃柏炭的最佳炮制工藝。結(jié)果：關(guān)黃柏炭的炮制工藝為每100g關(guān)黃柏在240℃條件下炒4min。結(jié)論：優(yōu)化的關(guān)黃柏炭炮制工藝穩(wěn)定、可行。

關(guān)黃柏；炮制；炒炭；正交試驗(yàn)

關(guān)黃柏為蕓香科植物黃檗PhellodendronamurenseRupr.的干燥樹皮,其藥性苦、寒，入腎、膀胱經(jīng)，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的功效[1]。關(guān)黃柏中生物堿為其主要有效成分，其中包含小檗堿、黃柏堿、巴馬汀、藥根堿，具有抗炎、解熱的功效。關(guān)黃柏制炭后，苦寒之性大減，收澀之性增加，清濕熱之中兼具澀性，可用于治療便血，崩漏下血[2]。本實(shí)驗(yàn)以鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀為指標(biāo)，選擇炒制溫度、炒制時(shí)間為考察因素，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選關(guān)黃柏炭的最佳炮制工藝，為工業(yè)化大生產(chǎn)提供研究基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695高效液相色譜儀，Waters 2998型檢測(cè)器；METTLER AE240型十萬分之一分析天平(瑞士METTLER公司)；FA1004B型電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；DFT-100型高速萬能粉碎機(jī)(溫嶺市林大機(jī)械有限公司)；KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)等。

1.2 藥材

生關(guān)黃柏飲片購(gòu)自大連開發(fā)區(qū)保健大藥房，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)翟延君教授鑒定為蕓香科植物黃檗PhellodendronamurenseRupr.的干燥樹皮。

1.3 試藥

鹽酸巴馬汀對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，批號(hào)110732-200506)，鹽酸小檗堿對(duì)照品(成都曼斯特生物科技有限公司，純度≥98%，批號(hào)MUST-10090303)；乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)

根據(jù)炮制規(guī)范對(duì)炒炭工藝進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)關(guān)黃柏按照L9(34)正交因素水平表進(jìn)行炮制，以關(guān)黃柏中的主要成分鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量為考察指標(biāo)，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際選擇炒制時(shí)間、炒制溫度為考察因素，因素水平見表1。

表1 關(guān)黃柏炭工藝因素水平

2.2 樣品制備

取9份關(guān)黃柏，每份20g，按照正交試驗(yàn)因素表炮制樣品。

2.3 鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀含量測(cè)定[3]

2.3.1 對(duì)照品溶液制備 取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含105.2、14.96μg的對(duì)照品溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液制備 取各樣品粉末(過60目篩)約0.2g，精密稱定，置50mL量瓶中，加入60%乙醇40mL，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)45min，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 色譜條件 Agilent TC-C18(150mm×4.6mm，5μm)色譜柱，以乙腈為流動(dòng)相A，以0.1%磷酸溶液(加入磷酸二氫鈉使其達(dá)到0.02mol/L)為流動(dòng)相B，按表2中的規(guī)定進(jìn)行洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)：345nm，流速：1.0mL·min-1，柱溫：25 ℃，進(jìn)樣量：10μL，結(jié)果見表3。色譜見圖1-圖3。

表2 流動(dòng)相洗脫

圖1 鹽酸巴馬汀對(duì)照品色譜

圖2 鹽酸小檗堿對(duì)照品色譜

圖3 關(guān)黃柏炭炮制品色譜

2.3.4 線性關(guān)系考察 精密吸取各生物堿對(duì)照品溶液適量，注入液相色譜儀，按“2.3.3”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，并記錄峰面積，以對(duì)照品的進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)X，峰面積(A)為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得鹽酸小檗堿與鹽酸巴馬汀回歸方程分別為：Y=4 062 106.770 8X- 12 224.201 8(r=0.999 3)，Y=4 131 597.030 5X+9 112.494 4(r=0.999 1)，結(jié)果表明鹽酸小檗堿在0.005 26～0.157 8μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，鹽酸巴馬汀在0.006～0.09μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對(duì)照品溶液5μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.3.3”項(xiàng)下條件測(cè)定各對(duì)照品的色譜峰面積，計(jì)算其RSD分別為1.1%和1.3%，表明儀器精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一關(guān)黃柏炭供試品，放置于室溫，于0、2、4、6、8、10、12、24h后，按“2.3.3”項(xiàng)下條件操作，結(jié)果鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀的峰面積RSD分別為1.5%和2.3 %，表明該供試品溶液在室溫下24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一關(guān)黃柏炭供試品6份，按“2.3.3”項(xiàng)下條件測(cè)定鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀各成分的含量，計(jì)算其RSD分別為1.8%和1.5%，結(jié)果表明供試品重復(fù)性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 取6份已知含量樣品0.2g，精密稱定，分別精密加入鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對(duì)照品各10mL，按“2.3.2”項(xiàng)下條件操作。測(cè)得鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀的平均回收率分別為101.97%和99.83 %，RSD分別為1.9%和1.2%。

2.4 炒炭工藝優(yōu)選

鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀均為關(guān)黃柏中指標(biāo)性成分，且在2010 年版《中國(guó)藥典》中以鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀為檢測(cè)指標(biāo)，故在綜合評(píng)分中將鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀權(quán)重系數(shù)均定為0.5。綜合指標(biāo)OD=(mAi×0.5/mAmax+mBi×0.5/mBmax)×100。炒炭試驗(yàn)結(jié)果見表3，方差分析見表4。

表3 正交試驗(yàn)優(yōu)化關(guān)黃柏炭炮制工藝測(cè)定結(jié)果

表4 方差分析結(jié)果

注：F0.05(2,2)=19.0。

2.5 結(jié)果

方差分析結(jié)果表明，炒制溫度和炒制時(shí)間對(duì)關(guān)黃柏炭中小檗堿和巴馬汀含量均有顯著性影響，主次順序?yàn)锳(炒制溫度)>B(炒制時(shí)間)。從正交試驗(yàn)結(jié)果可以看出A1B3綜合評(píng)分最高，但結(jié)合關(guān)黃柏炭成品質(zhì)量，即表面焦黑色，內(nèi)部深褐色的要求，最終選定關(guān)黃柏的制炭?jī)?yōu)化工藝為A2B2，即每100g關(guān)黃柏在240℃條件下炒4min。

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

按“2.5”項(xiàng)得到的炮制參數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證性試驗(yàn)，得到以下結(jié)果，見表5。從結(jié)果可以看出所指定的關(guān)黃柏炭工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

試驗(yàn)中考察指標(biāo)為鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀，為盡量客觀反映各個(gè)因素之間的關(guān)系及因素水平對(duì)關(guān)黃柏炮制品質(zhì)量的影響，擬采用綜合加權(quán)評(píng)分法。即以一個(gè)綜合指標(biāo)(overall desirability，OD)，將各個(gè)考察指標(biāo)統(tǒng)一綜合考察，以綜合指標(biāo)進(jìn)行直觀分析。在綜合評(píng)分中將鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀權(quán)重系數(shù)均定為0.5。綜上，綜合指標(biāo)OD=(mAi×0.5/mAmax+mBi×0.5/ mBmax)×100。同時(shí)，在確定關(guān)黃柏炒炭的最佳工藝時(shí)將炮制后的飲片外觀性狀是否符合要求作為首要篩選條件。

本試驗(yàn)中鹽酸小檗堿和鹽酸巴馬汀的含量測(cè)定方法參照2010版藥典中關(guān)黃柏的含量測(cè)定內(nèi)容。由于在實(shí)際進(jìn)樣時(shí)發(fā)現(xiàn)在同一進(jìn)樣量下各樣品中指標(biāo)成分含量差別較大，為了使其在同一線性范圍內(nèi)，故在1～20μL范圍內(nèi)根據(jù)實(shí)際情況選取不同的進(jìn)樣量。

本實(shí)驗(yàn)參照了文獻(xiàn)中的關(guān)于鹽酸小檗堿和巴馬汀的測(cè)定方法，最終選定藥典的方法，其操作方法簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果快捷。最終制定的關(guān)黃柏炒炭工藝在驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中結(jié)果良好，說明本工藝穩(wěn)定可行，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典[S] .一部. 北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 賈天柱.中藥炮制學(xué)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2008.

[3] 張煊,崔征,周海燕,等. 高效液相色譜法測(cè)定關(guān)黃柏不同采收期及黃檗不同部位的小檗堿、巴馬汀含量[J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,20(3):194-197.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Study on Processing Technology of Phellodendron Amurense Rupr Carbonisatus by Orthogonal Experiment Design

Liu Huiming1,Liu Pengpeng2

(1.The second peoples hospital of chaoyang city, Chaoyang 122000,China; 2. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600,China)

Objective:To optimize the processing technology of phellodendron amurense rupr carbonisatus. Methods:The content of palmatine chloride and berberine hydrochloride was regarded as evaluated index, the heating temperature and heating time as examine factors, associate with appearance to optimize the best processing technology of the phellodendron amurense rupr carbonisatus by orthogonal experiment design. Results:The best processing technology of the phellodendron amurense rupr carbonisatus is frying for 4minutes at 240℃per 100g. Conclusion:The optimized processing technology is stable and feasible.

Phellodendron；Processing；Carbonizing by Stir-frying；Orthogonal Experiment Design

2014-09-25

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81274083)

劉會(huì)民(1968-)，男，遼寧省朝陽市第二人民醫(yī)院副主任中藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿?/p>

R283

A

1673-2197(2015)03-0019-03

10.11954/ytctyy.201503008