賈云云，羅士香

(淮安市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇 淮安 223300)

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HPLC法同時(shí)測(cè)定清肺解毒片中小檗堿、黃芩苷含量

賈云云，羅士香

(淮安市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇 淮安 223300)

目的：采用HPLC法同時(shí)測(cè)定清肺解毒片中的小檗堿和黃芩苷含量。方法：采用HPLC法，色譜柱為HederaODS-2柱(4.6mm×200mm，5μm)，流動(dòng)相為A(0.1%磷酸)∶B(乙腈)=50∶50，柱溫為30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。結(jié)果：小檗堿和黃芩苷分別在0.0251～0.251μg和0.0365～0.365μg范圍內(nèi)與峰面積積分呈良好的線性關(guān)系，r分別為0.999和0.998；小檗堿平均加樣回收率為97.4%，RSD為1.95%(n=6)，黃芩苷為99.6%，RSD為0.94%(n=6)。結(jié)論：該方法結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于清肺解毒片的質(zhì)量控制。

清肺解毒片；高效液相色譜法；小檗堿；黃芩苷

清肺解毒片由臨床經(jīng)驗(yàn)方清肺解毒湯經(jīng)劑型改良而來(lái)，全方由黃芩、黃連、桑白皮、白芷、甘草等八味中藥組成，具有清肺平喘、瀉火解毒的功效，臨床主治麻疹后期、熱毒入肺。黃芩苷為黃芩的主要有效成分，小檗堿為黃連的主要有效成分。本研究參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-3]，采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定方中小檗堿、黃芩苷的含量，方法簡(jiǎn)單可靠，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于清肺解毒片的質(zhì)量控制。

1 儀器與試劑

Waters2695高效液相色譜儀，Waters-2996紫外檢測(cè)器，Empower色譜工作站；色譜柱為HederaODS-2柱(4.6mm×200mm，5μm)；AG135型電子天平(瑞士梅特勒)；FA1104N電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；AS20500A超聲清洗器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。

清肺解毒片為實(shí)驗(yàn)室自制(批號(hào)：20130715、20130926、20140105)；鹽酸小檗堿(批號(hào)：0713-9906，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；黃芩苷(批號(hào)：110715-200413，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；甲醇、乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HederaODS-2柱(4.6mm×200mm，5μm)，流動(dòng)相：A(0.1%磷酸)∶B(乙腈)=50∶50，柱溫：30℃；流速：1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm。進(jìn)樣量：20μL。

2.2 混合對(duì)照品溶液制備

精密稱取小檗堿對(duì)照品2.51mg、黃芩苷對(duì)照品3.65mg，分別置于10mL容量瓶中，加50%乙醇溶解，并稀釋至刻度。精密吸取上述兩種對(duì)照品溶液各1mL至10mL容量瓶中，加50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL中含有小檗堿25.1μg、黃芩苷36.5μg)。

2.3 供試品溶液制備

取清肺解毒片，研細(xì)，取細(xì)粉1g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25mL，稱定重量，超聲30min，放冷，再次稱重，用50%乙醇補(bǔ)足重量，取上清液過(guò)0.22μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性溶液制備

按照制備工藝分別制備不含黃連、黃芩的陰性樣品，按照“2.3”項(xiàng)下處理陰性樣品，即得。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

精密吸取上述混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性溶液各10μL，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。供試品溶液色譜圖中，呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的峰，并且達(dá)到基線分離；陰性溶液在對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)吸收峰，表明其他幾味藥對(duì)小檗堿、黃芩苷的測(cè)定無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品、供試品和陰性樣品HPLC

2.6 線性關(guān)系考察

分別精密吸取上述混合對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10μL 進(jìn)樣，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以各對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，相應(yīng)的對(duì)照品峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行回歸處理得回歸方程Y小檗堿=29 561X+23 781(r=0.999)，Y黃芩苷=29 813X+13 902(r=0.998)。結(jié)果表明小檗堿在0.025 1～0.251μg、黃芩苷在0.036 5～0.365μg與峰面積積分呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述混合對(duì)照品溶液適量，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為10μL。小檗堿、黃芩苷峰面積RSD值分別為0.91%、1.93%，表明儀器和方法的精密度良好，符合測(cè)定要求。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取上述供試品溶液分別于配制后0、2、4、6、8、12h進(jìn)樣，測(cè)定小檗堿、黃芩苷的峰面積，進(jìn)樣量為10μL，小檗堿、黃芩苷峰面積RSD值分別為2.01%、1.32%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定，符合測(cè)定要求。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次清肺解毒片(批號(hào)：20130715)，按照供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，共6份，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)樣量為10μL，制劑中小檗堿、黃芩苷含量RSD值分別為1.98%、2.87%，表明小檗堿、黃芩苷在該測(cè)定條件下重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

取同一批樣品(批號(hào)：20130715)1g ，共6份，精密稱定(小檗堿含量為59.1μg · g-1，黃芩苷含量為203.9μg · g-1)，精密加入一定量小檗堿對(duì)照品溶液(25.1μg · mL-1)、黃芩苷對(duì)照品溶液(36.5μg · mL-1)，按照“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備，測(cè)定并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，小檗堿的平均加樣回收率為97.4%，RSD為1.95%，黃芩苷的平均加樣回收率為99.6%，RSD為0.94%，均符合測(cè)定要求，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 清肺解毒片中小檗堿和黃芩苷加樣回收率試驗(yàn) (n=6)

2.11 樣品測(cè)定

取3批清肺解毒片樣品，按照供試品溶液制備方法制得供試品溶液，并按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定小檗堿和黃芩苷含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品中小檗堿和黃芩苷含量測(cè)定 (μg·g-1)

3 討論

小檗堿在263、345、421nm處均有較強(qiáng)吸收，黃芩苷在276、315nm處有較強(qiáng)吸收，在280nm檢測(cè)波長(zhǎng)處有較好的色譜峰形且有效避免了其他組分的干擾，使結(jié)果更加準(zhǔn)確。

文獻(xiàn)報(bào)道中，小檗堿和黃芩苷的同步含量測(cè)定流動(dòng)相多選用緩沖鹽或離子對(duì)體系[4-6]，離子對(duì)試劑對(duì)色譜柱的填料具有不可逆的改性作用，緩沖鹽體系容易堵塞色譜柱并對(duì)儀器泵系統(tǒng)具有較大的磨損作用，因此均不宜采用。本實(shí)驗(yàn)采用的流動(dòng)相為乙腈、磷酸水溶液，系統(tǒng)分離清肺解毒片中的小檗堿和黃芩苷，方法簡(jiǎn)單易操作，避免了離子對(duì)試劑和緩沖鹽對(duì)色譜柱產(chǎn)生的不良作用，且分離效果良好。

本實(shí)驗(yàn)建立的高效液相含量測(cè)定方法可在同一色譜條件下同時(shí)測(cè)定清肺解毒片中小檗堿和黃芩苷兩種指標(biāo)性成分的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于清肺解毒片的質(zhì)量控制，同時(shí)可為中藥復(fù)方制劑定性定量方法的確定提供一定參考。

[1] 戚秋鵬,王中彥,劉天富.HPLC法測(cè)定萬(wàn)氏牛黃清心微丸中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,20(5):352-354.

[2] 李妍,宋舒暖,李留法,等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定清新靈微丸中鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(11):2773-2774.

[3] 王西彬,陳暢,何希榮.RP-HPLC法測(cè)定三黃片中黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(13):128-130.

[4] 田書霞,蔣曄.RP-HPLC同時(shí)測(cè)定三黃片中4種有效成分的含量[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,2006,41(3):220.

[5] 馮有龍,余伯陽(yáng),董小平.HPLC法高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定三黃片中的蒽醌類、黃酮類及生物堿類化合物[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2006,41(3):285.

[6] 張艷菊,王曉玲.不同廠家三黃片中黃芩苷、鹽酸小檗堿的溶出度[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,29(6):62.

(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Determination of Berberine and Baicalin in Qingfeijiedu Tablets by HPLC

Jia Yunyun，Luo Shixiang

(Huaian Institute for Food and Drug Control，Huaian 223300，China)

Objective:To establish a method for determining berberine and baicalin in Qingfeijiedu tablets by HPLC.Methods:A hederaODS-2 column(4.6mm×200mm,5μm) in an oven at 30℃ was used, with a mobile phase consisting of 0.1mol·L-1phosphate(A)-acetonitrile(50∶50). Detective wavelength was 280nm.Results:The berberine and baicalin had good linear relationship in the ranges of 0.025 1～0.251μg(r=0.999) and 0.036 5～0.365μg(r=0.998). The average recoveries were 97.4% and 99.6%, with RSD 1.95%(n=6) and 0.94%(n=6), respectively.Conclusion:The method was accurate and reproducible, and can be used for the quality control of Qingfeijiedu tablets.

Qingfeijiedu Tablets; HPLC;Berberine;Baicalin

2015-01-07

賈云云(1988-)，女，江蘇省淮安市食品藥品檢驗(yàn)所藥師，研究方向?yàn)樗幤凡涣挤磻?yīng)監(jiān)測(cè)。

R284.1

A

1673-2197(2015)12-0019-03

10.11954/ytctyy.201512008