葛 方，鄭 琢，蕭 偉，王振中，黃文哲，楊中林*

(1.中國藥科大學 天然藥物活性物質與功能國家重點實驗室，江蘇 南京 210009；2.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001)

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遠志及其炮制品解酒作用研究

葛 方1，鄭 琢1，蕭 偉2，王振中2，黃文哲2，楊中林1*

(1.中國藥科大學 天然藥物活性物質與功能國家重點實驗室，江蘇 南京 210009；2.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001)

目的：研究遠志及其炮制品(甘草炙和蜜炙)對急性酒精中毒小鼠的防醉解酒作用。方法：ICR小鼠給藥30min后，灌胃給予52°白酒誘導建立小鼠急性酒精中毒模型，并對小鼠共濟失調發(fā)生潛伏期、攀附時間及醉酒率進行觀察，并檢測肝組織乙醇脫氫酶(ADH)的活性。結果：遠志及其炮制品水提液可顯著改善急性酒精中毒小鼠的醉酒情況，其中甘草炙遠志高劑量組可顯著延長共濟失調發(fā)生潛伏期，延長小鼠攀附時間，降低醉酒率，并提高肝組織乙醇脫氫酶(ADH)活性。結論：甘草炙遠志高劑量組具有顯著的解酒效果。

遠志；炮制品；急性酒精中毒；解酒；乙醇脫氫酶

急性酒精中毒是指短時間內飲入過量的酒，出現(xiàn)先興奮后抑制的狀態(tài)，中毒后主要出現(xiàn)中樞神經系統(tǒng)抑制，進而造成對呼吸和循環(huán)系統(tǒng)的影響。急性酒精中毒輕者可引起身體不適，影響正常工作；重者可造成臟器功能損害，甚至危及生命[1]。我國酒文化源遠流長，醉酒已成為一種普遍現(xiàn)象，急性酒精中毒的發(fā)病率亦隨之增加，并已成為顯著的公共衛(wèi)生問題。中醫(yī)藥治療醉酒方法優(yōu)勢獨到，研究中藥材的解酒功效具有顯著應用價值。

遠志為遠志科植物遠志(PolygalatenuifoliaWilld.)或卵葉遠志(PolygalasibiricaL.)的干燥根[2]，具有益智、抗衰老和腦保護等廣泛藥理作用，并具有解酒、利膽利尿、消腫、保護肝臟的作用[3-5]。但目前尚無遠志不同炮制品解酒作用比較的相關研究。經考證，遠志炮制方法較多，本文主要對生遠志、甘草炙遠志、蜜炙遠志三種藥材的解酒作用進行初步探究。

1 實驗部分

1.1 儀器

BS124S型萬分之一電子天平(賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)，80-2型低速離心機(江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠)，TU-1900雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)，Tissue-Tearor型手持高速組織勻漿機(北京市世安科興科技開發(fā)有限公司)，Epoch型酶標儀(美國BioTek)，KD-160型鼠稱(TANITA公司)，HH-6型恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)；96孔細胞培養(yǎng)板(Costar公司)，10μL、50μL、200μL和1 000μL的移液器(大龍醫(yī)療設備(上海)有限公司)，垂直金屬(孔徑0.6cm×0.6cm，長寬50cm×50cm)。

常用器具：手術器械、離心管、離心管架、燒杯、移液槍頭、注射器、小鼠灌胃針等。

1.2 試劑

遠志(南京同仁堂藥店，批號：141204)，甘草(南京同仁堂藥店，批號：141207)；海王金樽(深圳市海王健康科技發(fā)展有限公司)，52℃紅星二鍋頭(北京紅星股份有限公司)；ADH試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20150113)，考馬斯亮藍試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20150109)。

1.3 動物

ICR小鼠(上海杰思捷實驗動物有限公司)，雄性，體重23～30g。小鼠飼養(yǎng)于(22±2)℃恒溫環(huán)境，給予12/12h間隔的明暗周期。飼養(yǎng)期間，給予充足食物和水。

1.4 實驗樣品液制備

1.4.1 遠志不同炮制品制備 根據2010版《中國藥典》相關記載進行炮制。

1.4.2 遠志不同炮制品水提液的制備 (1)生遠志高劑量組水提液的制備：稱取生遠志粗粉8.109 0g，加水浸泡2h，以水作為溶劑，加27倍量(分別為10倍量、9倍量、8倍量)，煎煮3次(分別為2h、1.5h、1h)，抽濾，合并濾液，常壓濃縮至30mL；加1%的CMC-Na溶液定容至60mL，即得濃度為0.135 15g生藥/mL的藥液，給藥劑量為2.703 0g生藥/kg。

(2)生遠志低劑量組水提液的制備：稱取生遠志粗粉4.054 5g，制備方法同上，即得濃度為0.0675 75g生藥/mL的藥液，給藥劑量為1.351 5g生藥/kg。

按上述方法制備甘草炙遠志高劑量組水提液、甘草炙遠志低劑量組水提液、蜜炙遠志高劑量組水提液、蜜炙遠志低劑量組水提液。

1.5 陽性藥的配制

取2片海王金樽(2.0g)，研成細粉，精密稱取1.35g，加0.5%的CMC-Na溶液20mL，超聲混勻，得濃度為0.067 5g/mL的藥液，給藥劑量為1.35g/kg。

1.6 實驗方法

1.6.1 動物分組 ICR小鼠，雄性，體重23～30g，適應性飼養(yǎng)1周后，按體重隨機分為空白組、模型組、陽性組、生遠志高劑量組、生遠志低劑量組、甘草炙遠志高劑量組、甘草炙遠志低劑量組、蜜炙遠志高劑量組、蜜炙遠志低劑量組各11只。

1.6.2 小鼠急性酒精中毒模型建立 各組小鼠實驗前禁食(不禁水)12h。空白組及模型組小鼠按0.2mL/10g的標準給予0.5%的CMC-Na溶液，同時各給藥組按0.2mL/10g的標準給予相應藥液；給藥30min后，空白組按0.14mL/10g的標準給予生理鹽水，其他各組小鼠均按0.14mL/10g的標準灌胃給予52°紅星二鍋頭[6]。

1.7 實驗各組藥液解酒防醉作用考察

1.7.1 實驗各組藥液對急性酒精中毒小鼠運動協(xié)調性的影響——攀附實驗 給酒后，將小鼠立即放在垂直懸掛金屬網(孔徑0.6cm×0.6cm，長寬50cm×50cm)的正中間(距上下左右邊緣各25cm)，金屬網距桌面20cm。

(1)記錄小鼠在金屬網上的攀附時間t1，即從小鼠放金屬網上開始計時直至小鼠從金屬網上掉落所持續(xù)的攀附時間，單位為秒(s)，記為共濟失調發(fā)生潛伏期。若小鼠持續(xù)攀附時間超過15min，均按15min記錄[7]。

(2)于給酒后0.5h、給酒后1.5h和給酒后3h分別重復上述操作。記錄小鼠在金屬網上的攀附時間，對于攀附時間超過10min的小鼠，其攀附時間均記為10min(即600s)。

1.7.2 實驗各組藥液對急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響——醉酒率 結合實驗操作可行性，以小鼠1min內能否進行3次翻正反射為醉酒標準[7]，記錄給酒后0.5h、給酒后1.5h和給酒后3h的醉酒率。

1.7.3 實驗各組藥液對急性酒精中毒小鼠肝中乙醇脫氫酶(ADH)的影響 于給酒灌胃6h后，將各組小鼠脫頸椎處死，取肝臟。肝臟取出后，在肝臟相同部位精密稱取0.2g肝組織，按重量(g)∶體積(mL)=1∶9加9倍體積的生理鹽水，制成10%的勻漿液，按試劑盒說明書測定乙醇脫氫酶(ADH)的活性。

1.8 統(tǒng)計方法

3.5 3 0 歲以上的男性開始關注心臟問題,且隨年齡增加,選擇心臟檢查的項目增多,此現(xiàn)象符合醫(yī)學建議。

2 實驗結果

2.1 各組藥液對急性酒精中毒小鼠共濟失調發(fā)生潛伏期的影響

實驗結果表明，小鼠灌胃給予52°白酒建立急性酒精中毒模型，與空白組比較，模型組差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)，說明造模成功；與模型組比較，陽性組(海王金樽組)、甘草炙遠志高劑量組和蜜炙遠志高劑量組差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，生遠志高劑量組差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。說明生遠志高劑量組、甘草炙遠志高劑量組和蜜炙遠志高劑量組均有較好的解酒效果，有效延長急性酒精中毒小鼠的共濟失調發(fā)生潛伏期，延緩小鼠進入醉酒昏睡期。結果見表1。

2.2 各組藥液對急性酒精中毒小鼠攀附時間的影響

小鼠灌胃給予52°白酒建立急性酒精中毒模型，與空白組比較，模型組差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)，說明造模成功。給酒后0.5h，與模型組比較，甘草炙遠志高劑量組攀附時間增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；蜜炙遠志高劑量組小鼠攀附時間有一定增加，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。給酒后1.5h，與模型組比較，各組差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。給酒后3h，與模型組比較，甘草炙遠志高劑量組攀附時間顯著增加(P<0.01)；生遠志高劑量組、生遠志低劑量組攀附時間有一定增加，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果見表2。

表1 各組藥液對急性酒精中毒小鼠共濟失調

發(fā)生潛伏期的影響

組別共濟失調發(fā)生潛伏期(s)空白組900.000±0.000模型組294.83±26.531▲▲陽性組409.80±35.194*生遠志高劑量組533.45±66.587**生遠志低劑量組368.00±37.010甘草炙遠志高劑量組425.90±37.505*甘草炙遠志低劑量組244.60±10.358蜜炙遠志高劑量組450.90±72.844*蜜炙遠志低劑量組271.82±24.976

注：與空白組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 各組藥液對急性酒精中毒小鼠翻正反射的影響——醉酒率

與空白組比較，模型組醉酒率較高，說明造模成功。與模型組比較，生遠志高劑量組和甘草炙遠志高劑量組醉酒率較低，且給酒1.5h后，生遠志高劑量組差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。實驗結果以各項醉酒只數(shù)和醉酒率表示，結果見表3。

2.4 各組藥液對急性酒精中毒小鼠肝中乙醇脫氫酶(ADH)的影響

表2 各組藥液對急性酒精中毒小鼠攀附時間的影響 ±s，n=11)

注：與空白組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

表3 各組藥液對急性酒精中毒小鼠醉酒率的影響 ±s，n=11)

注：與空白組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，*P<0.05。

表4 各組藥液對急性酒精中毒小鼠肝中ADH活力的影響 ±s，n=11)

注：與空白組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.5 實驗結果綜合分析

2.5.1 各藥效指標試驗結果 通過分析各藥效指標試驗結果，按頻次統(tǒng)計匯總。綜合行為學指標及生化指標(肝組織ADH活力)各組方出現(xiàn)頻次顯示，甘草炙遠志高劑量組具有顯著的解酒效果。見表5。

2.5.2 各組方藥液對急性酒精中毒小鼠解酒效果的權重分析 對6個組方藥液急性酒精中毒小鼠共濟失調發(fā)生潛伏期(A)、給酒0.5h后攀附時間(B)、給酒1.5h后攀附時間(C)、給酒3h后攀附時間(D)和肝組織中ADH活力(E)的結果進行權重分析，其解酒防醉效果趨勢一致，均為數(shù)值越大解酒防醉效果越好。權重方法為：[A×0.3+(B+C+D)×0.1+E×0.4]，其中權重結果數(shù)據越大，解酒效果越好。結果表明，生遠志高劑量組和甘草炙遠志高劑量組解酒效果顯著。結果見表6。

根據表5、表6數(shù)據綜合分析得出，甘草炙遠志高劑量組具有顯著的解酒效果。

表5 各組藥液對急性酒精中毒小鼠各藥效指標總結 ±s，n=11)

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

表6 各組藥液對急性酒精中毒小鼠解酒效果權重分析 ±s，n=11)

3 討論

乙醇為強親神經性毒物，對中樞神經系統(tǒng)的影響顯著[12]。急性酒精中毒過程中可出現(xiàn)運動功能異常，如步態(tài)蹣跚、共濟失調等癥狀。當乙醇攝入體內后，經胃腸吸收入血，在肝臟進行代謝，通過血液進入全身循環(huán)，在肝臟中乙醇主要被乙醇脫氫酶(ADH)系氧化，少部分由微粒體的乙醇氧化系統(tǒng)(MEOS)酶系和過氧化物體系的過氧化氫酶系統(tǒng)代謝消化。本研究中，主要采用小鼠急性酒精中毒模型，觀察小鼠共濟失調發(fā)生潛伏期、不同時間點攀附時間和醉酒率，以此考察遠志及其炮制品的抗神經毒作用；檢測模型小鼠肝組織中ADH活性，以此來考察遠志及其炮制品促進乙醇代謝的作用。實驗采用52°白酒成功誘導小鼠急性酒精中毒模型，與空白組比較，模型組差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

本實驗研究發(fā)現(xiàn)，遠志及其炮制品均具有延長共濟失調發(fā)生潛伏期、延長攀附時間、降低醉酒率和提高ADH活性的解酒效果，尤其是甘草炙遠志，其高劑量組解酒防醉效果顯著(P<0.05)。根據文獻報道，遠志具有抑制吸收乙醇[4]、清除自由基抗氧化[9-10]、消除水腫和利尿[5]等作用。實驗發(fā)現(xiàn)，遠志及其炮制品可有效提高小鼠肝組織ADH活性，促進乙醇代謝，進一步抑制乙醇的吸收，降低乙醇的神經毒作用，從而顯著延長小鼠共濟失調發(fā)生潛伏期，延長給酒后不同時間點小鼠在垂直金屬網的攀附時間，降低醉酒率。經炮制后遠志(尤其是甘草炙遠志)解酒防醉效果加強，可能是由于化學成分發(fā)生變化，但確切有效物質群有待研究，有關遠志解酒作用的研究報道較少。本實驗對遠志及其炮制品的解酒防醉作用進行初步探索，為遠志防治急性酒精中毒提供參考依據。

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[3] 韓麗麗,李真,管仁偉,等.中藥遠志的研究進展[J].中國野生植物資源,2010(6):1-4.

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[5] 劉超,馬海英.傳統(tǒng)中藥遠志研究概述[J].河北農業(yè)科學,2014(5):75-81.

[6] 周利,葛方,楊中林.高良姜水提和醇提樣品液解酒效果比較研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2014,10(13):4-6.

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[12] 汪根盛.乙醇的神經行為毒性及其作用機制[J].職業(yè)衛(wèi)生與應急救援,1997(3):36-38.

(責任編輯：李嵐春)

Study on the Anti-alcoholism Effect ofPolygalatenuifoliaWilld.and its Processed Products

Ge Fang1,Zheng Zhuo1,Xiao Wei2,Wang Zhenzhong2,Huang Wenzhe2,Yang Zhonglin1*

(1.State Key Laboratory of Natural Products and Functions,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009, China;2.Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co.,LTD,Lianyungang 222001,China)

Objective:To study the anti-alcoholism effect ofPolygalatenuifoliaWilld.and its processed products which were processed by glycyrrhizae and refined honey.Methods:Water extractions were administrated to ICR mice,30 minutes later,acute alcoholism model was established by alcohol gavage (52%U/U).Then we observed the ataxia incubation period,cling time and the rate of alcoholism;And the serum Alcohol dehydrogenase (ADH) activity was detected.Results:The water extraction ofPolygalatenuifoliaWilld. and its processed products could improve the hangover significantly.Especially the high dose of Polygala tenuifolia processed by glycyrrhizae could apparently extend the ataxia incubation period and the cling time,reduce the rate of alcoholism and enhance ADH activity.Conclusion:The high dose ofPolygalatenuifoliaprocessed by glycyrrhizae had a significant effect of anti-alcoholism.

PolygalatenuifoliaWilld.;Processed Product;Acute Alcoholism;Anti-alcoholism;Alcohol Dehydrogenase

2015-04-03

葛方(1989-)，女，中國藥科大學碩士研究生，研究方向為中藥制劑學。E-mail：GFcpu1989@163.com

楊中林(1950-)，女，滿族，中國藥科大學教授，研究方向為中藥炮制與中藥制劑。E-mail：yzl1950@126.com

R283.1

A

1673-2197(2015)16-0012-04

10.11954/ytctyy.201516006