宿世震，劉 杰

(山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東 煙臺 264199)

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α-硫辛酸對早期糖尿病腎病患者保護作用機制研究

宿世震，劉 杰

(山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，山東 煙臺 264199)

目的：探討α-硫辛酸對早期糖尿病腎病(DN)患者的保護作用及其機制。方法：選取40例早期DN患者為治療組，在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用α-硫辛酸(600mg/d)，取同期查體健康者40例為對照組，治療前及治療6個月后檢測患者空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、血肌酐(Scr)、尿微量蛋白(mAlb)、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)、超敏-C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)等指標，進行對比分析。結(jié)果：與對照組比較，治療前DN患者的FBG、HbA1c、mAlb、MDA、TNF-α、IL-6、hs-CRP升高，SOD水平下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；采用α-硫辛酸治療6個月后，DN患者的FGB、HbA1c、Scr較治療前無明顯變化，但mAlb、MDA、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平下降，SOD水平升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論： α-硫辛酸對早期DN患者具有保護作用，推測其機制與抑制氧化應(yīng)激及降低炎癥水平有關(guān)。

糖尿病腎?。沪?硫辛酸；氧化應(yīng)激；炎癥因子

糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy，DN)是糖尿病患者常見的慢性微血管并發(fā)癥之一，是我國終末期腎病的主要病因。研究發(fā)現(xiàn)，DN與氧化應(yīng)激關(guān)系密切[1]，α-硫辛酸是一種強抗氧化劑，具有清除氧自由基或活性氧的作用[2]，對糖尿病并發(fā)癥具有較好的治療作用，尤其對于糖尿病神經(jīng)病變效果突出[3]，但對DN的治療研究不多，本研究通過觀察早期DN患者在α-硫辛酸治療前后的尿微量白蛋白(urinary microalbumin，mAlb)、氧化應(yīng)激水平及炎癥因子的變化，探討α-硫辛酸對早期DN患者的腎臟保護作用及可能的機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我校附屬醫(yī)院2013年8月—2014年10月收治的2型糖尿病患者40例，均符合WHO 1999年診斷標準且尿白蛋白排泄率為30～300mg/24h(即符合DN診斷的Ⅲ期)，年齡34～69歲，平均年齡(55.32±9.26)歲，其中男性28例，女性12例。排除標準：①近期發(fā)生過糖尿病急性并發(fā)癥及嚴重的慢性并發(fā)癥的患者；②非糖尿病引發(fā)的其他腎臟疾??；③近期使用過腎毒性藥物的患者；④近期使用過他汀類、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、血管緊張素受體拮抗劑藥物的患者；⑤無嚴重心、肝、肺疾?。虎奕焉锲?、哺乳期的患者以及其他不能合作的患者。選取同期體檢中心40例查體健康者(排除高血壓、糖尿病及其他與腎臟有關(guān)的疾病)作為對照組，年齡35～64歲，平均年齡(54.21±8.59)歲，其中男性25例，女性15例。 試驗結(jié)束時，治療組共計37例(2例退出，1例失訪)。兩組試驗者治療前SBP、DBP、BMI、SCr等資料比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 治療前兩組試驗者基本情況比較 (±s)

1.2 藥物與試劑

α-硫辛酸片，山東齊都藥業(yè)有限公司，批號20130206；尿mAlb試劑盒，北京昊誠志遠生物科技有限公司，批號20141025；超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、白細胞介素-6(Interleukins，IL-6)、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor，TNF-α)、超敏C反應(yīng)蛋白(hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP) 試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號20141221、20141221、20141220、20141209、20141209。

1.3 儀器

7600-020生化分析儀，日本日立公司；tu-1810紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司；TG1850-WS離心機，上海盧湘儀器有限公司；Multiskan MK3酶標儀，芬蘭Thermo fisher公司。

1.4 方法

入選的40例DN患者，在原治療(控制飲食、合理運動、口服降糖藥或注射胰島素)的基礎(chǔ)上加用α-硫辛酸片(300mg/片)，每日餐前半小時口服2片，連續(xù)治療6個月。在治療期間維持血糖相對穩(wěn)定，F(xiàn)BG處于5.0～8.0mmol/L之間，2h血糖<10mmol/L。檢測并記錄治療前后各組試驗者的收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、血肌酐(SCr)，測量身高、體重及計算體重指數(shù)(BMI)。

1.5 標本采集與指標檢測

兩組試驗者在給藥前均空腹12h，次晨抽取肘靜脈血液10mL，離心分離血清測定FBG、HbA1c、Scr、SOD、MDA、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平。收集晨尿(中段尿)5mL，測定尿微量蛋白和尿肌酐。試驗結(jié)束時復(fù)測上述指標(對照組不再測定)。FBG應(yīng)用葡萄糖氧化酶法測定，HbA1c應(yīng)用色譜法測定，肌酐應(yīng)用酶法測定，血清SOD應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法測定，血清MDA應(yīng)用硫代巴比妥酸法測定，TNF-α、IL-6、hs-CRP應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法測定。為了減少尿液濃縮及稀釋的影響，尿微量白蛋白采用mAlb/Cr(mg/g·Cr-1)的方法計算。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

治療前，與對照組比較，治療組患者的FBG、HbA1c、mAlb、MDA、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平升高明顯，而SOD水平下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。治療后，與對照組比較，治療組患者FBG、HbA1c、SCr無明顯變化，血清SOD水平較治療前升高，mAlb、MDA、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平較治療前下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，見表2。

3 討論

DN是終末期腎功能衰竭的主要原因，mAlb是早期發(fā)現(xiàn)及診斷DN的敏感指標，mAlb的升高提示患者出現(xiàn)腎小球及腎小管損傷。目前認為，DN患者存在明顯的氧化應(yīng)激反應(yīng)，由于糖脂代謝紊亂，自由基產(chǎn)生增多，通過激活蛋白激酶C、各種細胞因子和轉(zhuǎn)錄因子，使腎小球濾過增加、基底膜增厚、系膜擴張、間質(zhì)纖維化等促進DN的發(fā)生、發(fā)展，尿蛋白排出增加[4-5]。本研究結(jié)果顯示，DN患者體內(nèi)SOD水平降低、MDA含量升高，證實了DN患者體內(nèi)氧化應(yīng)激水平增高，治療后，血清SOD水平升高、MDA含量下降，說明α-硫辛酸可以改善DN體內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)，提高其抗氧化的能力。

近年來許多動物實驗和臨床研究均表明，DN往往存在著炎癥介質(zhì)的表達增高[1,6]。TNF-α是炎癥介質(zhì)連鎖反應(yīng)中最早的啟動因子，可以激活體內(nèi)細胞因子級聯(lián)反應(yīng)，誘導(dǎo)炎癥介質(zhì)生成。CRP是由肝臟合成的急性期時相反應(yīng)蛋白，在正常人血液中含量甚微，采用高靈敏度方法檢測稱為hs-CRP，CRP與尿mAlb排泄相關(guān)，其高低可反映炎癥水平。IL-6是由活化的單核細胞、血管內(nèi)皮細胞等合成，可刺激腎小球系膜細胞增殖、導(dǎo)致腎小球硬化繼而促進DN的發(fā)生、發(fā)展。氧化應(yīng)激反應(yīng)的增加可以促進炎性細胞因子的產(chǎn)生，同樣炎性細胞因子的增加可以刺激自由基的產(chǎn)生，加重氧化應(yīng)激，如此形成惡性循環(huán)[7-8]。本研究顯示，DN患者體內(nèi)的炎癥因子水平增高，驗證了DN發(fā)病時的體內(nèi)炎癥狀態(tài)，治療后，炎癥指標表達水平均有所下降，提示α-硫辛酸可以改善DN患者體內(nèi)的炎癥狀態(tài)。

表2 治療前后各指標比較 (±s)

注：與對照組治療前比較，*P<0.01；與本組治療前比較，△P<0.01。

α-硫辛酸屬于維生素類物質(zhì)，存在于線粒體內(nèi)，是線粒體脫氫酶的天然輔助因子，含有雙硫五元環(huán)結(jié)構(gòu)，兼具脂溶性與水溶性的特性，可以在全身通行無阻，到達任何一個細胞部位，具有顯著的親電子性和與自由基反應(yīng)的能力，不僅可以直接清除氧自由基和活性氧，還可以螯合金屬離子，從而減輕鐵、銅等金屬離子催化產(chǎn)生強毒性自由基導(dǎo)致的組織損傷[2]。此外，α-硫辛酸還可再生其他抗氧化劑，因此其具有強抗氧化性，被稱為“抗氧化劑中的抗氧化劑”。Yi X等[9]應(yīng)用C57BL/6J小鼠復(fù)制DN模型，補充α-硫辛酸后DN小鼠腎臟的氧化應(yīng)激水平降低，腎組織結(jié)構(gòu)損傷得到一定程度的恢復(fù)。陶功華等[10]研究發(fā)現(xiàn)，α-硫辛酸干預(yù)治療2型糖尿病大鼠12周后，胰島素的分泌增加，促進修復(fù)氧化應(yīng)激損傷的胰腺β細胞。本實驗證實了硫辛酸可以減少尿蛋白的排出，其保護腎臟的作用可能與抑制機體的氧化應(yīng)激反應(yīng)及降低炎癥水平有關(guān)。

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(責任編輯：魏 曉)

Protection Mechanism Study of Alpha-lipoic Acid for Patients with Early Diabetic Nephropathy

Su Shizhen，Liu Jie

(Shandong College of Traditional Chinese Medicine，Yantai 264199，China)

Objective:To discuss the protective effect and mechanismof alpha-lipoic acid in patients with early diabetic nephropathy (DN).Methods:Selected 40 patients with early DN as treatment group,on the basis of routine therapy + alpha-lipoic acid (600 mg/d),Select the same period on examination of 35 cases of healthy subjects as control group.Before and after 6 months treatment detection in patients with fasting blood glucose(FBG)，glycated hemoglobin (HbA1c),serum creatinine (Scr),microalbuminuria protein (mAlb),serum superoxide dismutase (SOD),malondialdehyde (MDA),tumor necrosis factor (TNF alpha),interleukin 6 (IL-6),hypersensitive c-reactive protein (hs-CRP) index were analyzed.Results:Compared with control group,treatment of DN patients before FBG,HbA1c,mAlb,MDA,TNF alpha,IL-6,hs-higher CRP present,SOD levels drop，the difference has statistical significance(P<0.01).Compared with before treatment，after six months of alpha-lipoic acid treatment,patients with DN FGB,HbA1c，Scr has no obvious change，mAlb,MDA，TNF alpha,IL-6,hs-CRP levels drop,SOD levels,statistically significant differences (P<0.01).Conclusion:Alpha-lipoic acid plays a protective role in patients with early DN,speculated that the mechanism associated with inhibiting oxidative stress and reduce inflammation levels.

Alpha-lipoic Acid；Diabetic Nephropathy；Oxidative Stress；Inflammatory Cytokines

2015-06-25

宿世震(1979-)，男，山東中醫(yī)藥高等專科學(xué)校講師，研究方向為藥理學(xué)。

R256.5

A

1673-2197(2015)21-0108-03

10.11954/ytctyy.201521051