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        桑白皮化學(xué)拆分組分對(duì)正常大鼠物質(zhì)代謝與能量代謝的影響

        2015-04-25 08:34:06克迎迎袁培培王小蘭馮衛(wèi)生鄭曉珂
        世界中醫(yī)藥 2015年12期
        關(guān)鍵詞:桑白皮丙酮酸藥性

        克迎迎 袁培培 王小蘭 馮衛(wèi)生 鄭曉珂

        (1 河南中醫(yī)學(xué)院,鄭州,450046;2 呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心,鄭州,450046)

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        桑白皮化學(xué)拆分組分對(duì)正常大鼠物質(zhì)代謝與能量代謝的影響

        克迎迎1,2袁培培1,2王小蘭1,2馮衛(wèi)生1,2鄭曉珂1,2

        (1 河南中醫(yī)學(xué)院,鄭州,450046;2 呼吸疾病診療與新藥研發(fā)河南省協(xié)同創(chuàng)新中心,鄭州,450046)

        目的:檢測(cè)正常大鼠體內(nèi)物質(zhì)代謝與能量代謝相關(guān)酶的含量,考察桑白皮拆分組分對(duì)其表達(dá)的影響,以期闡釋其寒熱屬性。方法:SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常組(Control)、寒性藥黃連組(HL)、黃芩組(HQ)、黃柏組(HB)、熱性藥附子組(FZ)、干姜組(GJ)、花椒組(HJ),桑白皮30%乙醇洗脫組分組(S-30)、桑白皮-脂肪油組分組(S-Z)。連續(xù)給藥9d,留取肝臟、心臟等臟器,檢測(cè)物質(zhì)代謝相關(guān)酶葡萄糖激酶(GCK)、果糖磷酸激酶(PFK-1)、磷酸甘油酸激酶(PGK)、丙酮酸激酶(PK)、丙酮酸脫氫酶(PDH)、乙酰輔酶A(acetyl-CoA)、檸檬酸合酶(CS)、異檸檬酸脫氫酶(ICD)、α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDHC)、延胡索酸酶(FUM)、糖原磷酸化酶(PYGL)、糖原合成酶激酶-3(GSK-3)、脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)及能量代謝相關(guān)酶細(xì)胞色素C還原酶(CCR)、細(xì)胞色素C氧化酶(COX)、ATP合酶(ATPs)、腺苷酸激酶(ADK)、Na+-K+ATP酶的表達(dá)和ATP、ADP、NAD+、NADH、NAD+/NADH含量,初步探討桑白皮拆分組分對(duì)物質(zhì)代謝與能量代謝的影響。結(jié)果:與正常組相比,HL、HQ組大鼠體重有顯著降低(P<0.05或P<0.01),其他組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);HL、HQ、HB組GCK、PFK-1、PGK、PK、ICD、CCR、COX、ATPs、ADK的表達(dá)顯著降低(P<0.05或P<0.01),acetyl-CoA、α-KGDHC、PYGL、ATGL的表達(dá)顯著升高(P<0.05或P<0.01),ATP含量雖有所降低但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),ADP、NAD+、NADH、NAD+/NADH含量均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);FZ、GJ、HJ組GCK、PGK、CCR、COX、ATPs、ADK、ICD的表達(dá)顯著升高(P<0.05或P<0.01),acetyl-CoA、α-KG DHC、PYGL的表達(dá)顯著降低(P<0.05或P<0.01),ATP含量雖有所升高但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),ADP、NAD+、NADH、NAD+/NADH含量均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);S-30、S-Z組GCK、PFK-1、PGK、PK、PDH、ICD、GSK-3、CCR、COX、ATPs、ADK的表達(dá)顯著降低(P<0.05或P<0.01),α-KGDHC的表達(dá)顯著升高(P<0.05),與寒涼性中藥HL、HQ、HB具有相同或相似的作用趨勢(shì)。結(jié)論:典型寒、熱中藥可以影響機(jī)體物質(zhì)能量代謝,且寒性藥能夠抑制物質(zhì)能量代謝,熱性藥能夠促進(jìn)物質(zhì)能量代謝,這與本課題首席科學(xué)家匡海學(xué)教授提出的新假說相契合;總體來看,S-30、S-Z組也能夠抑制物質(zhì)能量代謝,與寒性藥作用類似,可初步推斷其藥性可能為寒涼。

        典型寒熱中藥;寒熱藥性;桑白皮拆分組分;物質(zhì)代謝;能量代謝

        中藥藥性包括中藥四氣五味、歸經(jīng)、升降浮沉和毒性等,而中藥性味理論是中藥藥性理論的重要組成部分,中藥寒、熱藥性反映了藥物對(duì)人體陰陽盛衰、寒熱變化的作用傾向[1-3]。在中藥藥性研究思路的整體框架下,本項(xiàng)目首席科學(xué)家匡海學(xué)教授提出:藥性(氣)是藥物通過不同途徑,以主要影響機(jī)體的能量代謝、物質(zhì)代謝為特征的、與治療作用有關(guān)或無關(guān)的、但均可影響藥物療效發(fā)揮或與副作用發(fā)生有關(guān)的一類生物學(xué)效應(yīng)。促進(jìn)機(jī)體能量、物質(zhì)代謝的中藥具有熱(或溫)性,抑制機(jī)體能量、物質(zhì)代謝的中藥具有寒(或涼)性。

        黃連為毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch.、三角葉黃連CoptisdeltoideaC.Y.Cheng et Hsiao或云連Coptisteetawall.的干燥根莖,味苦性寒[4];黃芩為唇形科植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根,味苦性寒[4];黃柏為蕓香科植物黃皮樹PhellodendronchinenseSchneid.的干燥樹皮,味苦性寒[4]。附子為毛茛科植物烏頭AconitumcarmichaeliiDebx.的子根的加工品,味辛甘性大熱[4];干姜為姜科植物ZingiberoffcinaleRosc.的干燥根莖,味辛性熱[4];花椒為蕓香科植物青椒ZanthoxylumschinifoliunSieb.et Zucc.或花椒ZanthoxylumbungeanumMaxim.的干燥成熟果皮,味辛性溫[4]。本研究分別采用黃連、黃芩、黃柏三味典型寒涼性中藥以及附子、干姜、花椒三味典型溫?zé)嵝灾兴帉?duì)正常大鼠物質(zhì)代謝、能量代謝的影響進(jìn)行研究,以期佐證本項(xiàng)目的假說,同時(shí)為闡釋中藥寒熱藥性的作用特點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。

        桑白皮為??浦参锷orus Cortex L.的干燥根皮,性寒味甘[4],在前期研究中,我們將桑白皮拆分為成分互不交叉的桑白皮-30%乙醇洗脫組分、桑白皮-50%乙醇洗脫組分、桑白皮-80%乙醇洗脫組分、桑白皮醇沉組分、桑白皮-脂肪油組分[5],通過歷代本草研究及現(xiàn)代文獻(xiàn)檢索,并結(jié)合現(xiàn)代分析技術(shù)和數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法初步推斷桑白皮-30%乙醇洗脫組分、桑白皮-脂肪油組分可能是桑白皮藥性寒涼的物質(zhì)基礎(chǔ),且在前期我們采用物質(zhì)能量代謝紊亂的糖尿病模型對(duì)桑白皮-30%乙醇洗脫組分、桑白皮-脂肪油組分進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)桑白皮-30%乙醇洗脫組分、桑白皮-脂肪油組分能夠在改善糖尿病小鼠物質(zhì)能量代謝紊亂狀況,基于此,我們?cè)谘芯?種典型寒熱中藥對(duì)物質(zhì)能量代謝的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究各組分對(duì)物質(zhì)能量代謝的影響,以期初步闡釋各組分的寒熱屬性。

        1 實(shí)驗(yàn)材料

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性Wistar大鼠90只,體重180~220 g,SPF級(jí),由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供,許可證編號(hào):SCXK魯20170001。飼養(yǎng)于18~22 ℃清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi),自由飲食、飲水。

        1.2 藥物 黃連、黃芩、黃柏、附子、干姜、花椒均購自河南張仲景大藥房,桑白皮購自鄭州市中藥材市場(chǎng),由河南中醫(yī)學(xué)院陳隨清教授鑒定為正品。

        各藥水煎劑的制備:稱取定量的上述藥材,加入10倍量水,浸泡60 min,快速加熱至沸騰,煎煮60 min,傾出藥液,殘?jiān)偌尤?倍水,煎煮提取60 min。合并2次藥液,濾過、濃縮后制成不同濃度的中藥水提液,4 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

        桑白皮化學(xué)拆分組分的制備:桑白皮水煎液濃縮后,加2倍量的石油醚萃取,上清液濃縮后真空干燥6 h,得石油醚組分(該組分為脂肪油組分),提取率為3.10%,其余水提液上DiaionHP-20柱,依次用水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇洗脫,得到桑白皮30%、50%、80%乙醇組分提取率分別為5.8%、0.31%、0.25%,其中,水洗脫部分經(jīng)過醇沉得到醇沉組分,提取率分別為4.4%。

        1.3 試劑與儀器 GCK、PFK-1、PGK、PK、PDH、acetyl-CoA、CS、ICD、α-KGDHC、FUM、PYGL、GSK-3、ATGL、CCR、COX、ATPs、ADK、Na+-K+ATP酶檢測(cè)試劑盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司,批號(hào)20141203A),ATP、ADP、NAD+、NADH含量測(cè)定試劑盒(蘇州科銘生物技術(shù)有限公司,批號(hào):20150708),其他各種化學(xué)試劑均為市售分析純(天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司)。

        Multiskan MK3酶標(biāo)儀(Thermo,USA);Advantage A10超純水儀(Sartorius,Germany);5810R高速冷凍離心機(jī)(Eppendorf,Germany);SK-1快速混勻器(常州國宇儀器制造有限公司);移液器(Gilson,F(xiàn)rance);BT25S十萬分之一精密分析天平(Sartorius,Germany);Genesys 10分光光度計(jì)(Thermo Fisher,USA);90-3型雙向定時(shí)恒溫磁力攪拌器(上海楚定分析儀器有限公司);DZF-6050B真空干燥箱(北京恒泰豐科試驗(yàn)設(shè)備有限公司);BCD-206TAS低溫冰箱(海爾公司);常規(guī)手術(shù)器械。

        2 實(shí)驗(yàn)方法

        2.1 動(dòng)物的分組及給藥 動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Control)、黃連組(HL)、黃芩組(HQ)、黃柏組(HB)、附子組(FZ)、干姜組(GJ)、花椒組(HJ)、桑白皮-30%部位組(S-30)、桑白皮-脂肪油部位組(S-Z)。Control組給予蒸餾水,HL組給予7.0 g/kg黃連水煎液,HQ組給予6.0 g/kg黃芩水煎液,HB組給予8.4 g/kg黃柏水煎液,F(xiàn)Z組給予10.5 g/kg附子水煎液,GJ組給予8.4 g/kg干姜水煎液,HJ組給予4.0 g/kg花椒水煎液,S-30組給予0.49 g/kg桑白皮-30%部位組,S-Z組給予0.25 g/kg桑白皮-脂肪油部位組。連續(xù)給藥9d后摘眼球取血,頸椎脫臼法處死大鼠,取肝臟、心臟等迅速凍存于液氮中后,轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

        2.2 物質(zhì)代謝相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè) 連續(xù)給藥9d后,迅速取出肝臟組織,快速凍于液氮中,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。依照試劑盒說明書檢測(cè)GCK、PFK-1、PGK、PK、PDH、acetyl-CoA、CS、ICD、α-KGDHC、FUM、PYGL、GSK-3、ATGL的表達(dá)。

        2.3 能量代謝相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè) 依照試劑盒說明書檢測(cè)CCR、COX、ATPs、ADK、Na+-K+ATP酶的表達(dá)以及ATP、ADP、NAD+、NADH的含量。

        表1 各組大鼠體重的變化

        注:與正常組相比,*表示P<0.05;**表示P<0.01。

        表2 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)葡萄糖氧化成丙酮酸階段相關(guān)酶的影響

        注:與正常組相比,*表示P<0.05;**表示P<0.01。

        表3 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)丙酮酸氧化成Acetyl-CoA階段相關(guān)酶的影響

        注:與正常組相比,*表示P<0.05;**表示P<0.01。

        3 結(jié)果

        3.1 各組大鼠體重的變化 如表1所示,與正常對(duì)照組相比,HL、HQ組大鼠體重有顯著下降(P<0.05或P<0.01),而其余各組均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

        3.2 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)正常大鼠物質(zhì)代謝的影響

        3.2.1 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)葡萄糖氧化成丙酮酸階段相關(guān)酶表達(dá)情況的影響 如表2所示,與正常對(duì)照組相比,HL、HQ、HB組GCK、PFK-1、PGK、PK的表達(dá)均顯著下降(P<0.05或P<0.01),F(xiàn)Z、GJ、HJ組GCK、PFK-1、PGK、PK的表達(dá)均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。而S-30、S-Z組能夠在一定程度上降低GCK、PFK-1、PGK、PK等的表達(dá)(P<0.05或P<0.01),與寒涼性藥物作用類似。

        3.2.2 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)丙酮酸氧化成Acetyl-CoA階段相關(guān)酶表達(dá)情況的影響 如表3所示,與正常對(duì)照組相比,HL、HQ、HB、FZ、GJ、HJ組PDH的表達(dá)沒有顯著變化,但是HL、HQ組Acetyl-CoA的表達(dá)顯著升高(P<0.01),F(xiàn)Z、HJ組Acetyl-CoA的表達(dá)顯著降低(P<0.05)。

        3.2.3 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)三羧酸循環(huán)階段相關(guān)酶表達(dá)情況的影響 如表4所示,與正常對(duì)照組相比,HL、HQ、HB組能夠升高α-KGDHC的表達(dá)(P<0.05或P<0.01),降低ICD的表達(dá)(P<0.01),F(xiàn)Z、GJ、HJ組能夠降低α-KGDHC的表達(dá)(P<0.05),升高ICD的表達(dá)(P<0.05)。而S-30、S-Z組能夠升高Acetyl-CoA、α-KGDHC的表達(dá)(P<0.05或P<0.01),降低ICD的表達(dá)(P<0.01),與寒涼性藥物作用類似。

        表4 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)三羧酸循環(huán)階段相關(guān)酶的影響

        注:與正常組相比,*表示P<0.05;**表示P<0.01。

        表5 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)糖原合成與分解途徑相關(guān)酶的影響

        注:與正常組相比,*表示P<0.05;**表示P<0.01。

        表6 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)脂代謝進(jìn)程相關(guān)酶的影響

        注:與正常組相比,*表示P<0.05;**表示P<0.01。

        3.2.4 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)糖原合成與分解途徑相關(guān)酶表達(dá)情況的影響 如表5所示,與正常組相比,HL、HQ組均能夠升高PYGL的表達(dá)(P<0.05或P<0.01),對(duì)GSK-3沒有顯著影響(P>0.05),F(xiàn)Z、GJ、HJ組能夠降低PYGL的表達(dá)(P<0.05或P<0.01),對(duì)GSK-3沒有顯著影響(P>0.05)。而S-30、S-Z組能夠顯著降低GSK-3的表達(dá),對(duì)PYGL的表達(dá)沒有顯著影響。

        3.2.5 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)脂代謝途徑相關(guān)酶表達(dá)情況的影響 如表6所示,與正常組相比,HQ組均能夠升高ATGL的表達(dá)(P<0.01),F(xiàn)Z、GJ、HJ組對(duì)ATGL的表達(dá)沒有顯著影響(P>0.05)。而S-30、S-Z組對(duì)ATGL的表達(dá)沒有顯著影響(P>0.05)。

        3.3 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)能量代謝過程中相關(guān)酶含量的影響 如表7、8所示,與正常對(duì)照組相比,HL、HQ、HB組能夠降低CCR、COX、ATPs、ADK的表達(dá)(P<0.05或P<0.01);FZ、GJ、HJ組能夠升高CCR、COX、ADK的表達(dá)(P<0.05或P<0.01)。而S-30、S-Z組能夠降低CCR、COX、ATPs、ADK的表達(dá)(P<0.05或P<0.01),顯示出抑制能量代謝的作用特點(diǎn),與寒涼性藥物作用相似。

        表7 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)能量代謝過程中相關(guān)酶的影響

        注:與正常組相比,*表示P<0.05;**表示P<0.01。

        表8 典型寒、熱中藥及桑白皮拆分組分對(duì)能量代謝過程中相關(guān)物質(zhì)的影響

        注:與正常組相比,*表示P<0.05;**表示P<0.01。

        4 討論

        中藥四氣,又稱四性,是指藥物寒熱溫涼四種不同的藥性,明確藥物的四性有益于利用藥物的寒、熱之偏性來糾正人體寒熱之證[6]。故陶弘景在《本草經(jīng)集注》中就明確指出:“藥物甘苦之味可略,唯冷熱須明?!蹦撬幬锖疅釡貨龅乃幮缘降子绊憴C(jī)體那些進(jìn)程呢?馬清翠等認(rèn)為熱性藥附子對(duì)正常大鼠的能量代謝有一定的促進(jìn)作用[7];崔光志等也認(rèn)為熱性藥胡椒、蓽茇能促進(jìn)大鼠肝臟能量代謝。黃麗萍等認(rèn)為寒性中藥黃芩能抑制大鼠能量代謝[8];徐珊等也認(rèn)為寒性藥生黃柏能夠改善熱證大鼠的能量代謝[9]。所以在前期本草考證及實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上,本課題組首席科學(xué)家匡海學(xué)教授提出“藥性可以通過不同途徑影響機(jī)體的物質(zhì)及能量代謝,且熱(或溫)性中藥能夠促進(jìn)機(jī)體物質(zhì)及能量代謝,而寒(或涼)性中藥能夠抑制機(jī)體物質(zhì)及能量代謝”這一假說。故本實(shí)驗(yàn)采用典型寒性熱性中藥對(duì)物質(zhì)能量代謝的影響進(jìn)行研究,以期詮釋寒熱藥性對(duì)物質(zhì)能量代謝的影響,在論證本項(xiàng)目假說的基礎(chǔ)上,也為中藥寒涼藥性的判斷歸屬奠定基礎(chǔ)。

        正常情況下,體內(nèi)物質(zhì)能量代謝處于動(dòng)態(tài)平衡中,現(xiàn)代研究表明機(jī)體需要的能量大部分是由葡萄糖氧化分解過程提供的,其中有氧氧化過程是其主要的供能方式,所以葡萄糖有氧氧化過程的順利進(jìn)行是機(jī)體維持正常運(yùn)轉(zhuǎn)的基本條件[10-11]。而體內(nèi)能量的直接供應(yīng)者是ATP,ATP生成的方式主要包括底物水平磷酸化和氧化磷酸化,其中氧化磷酸化生成的ATP約占ATP總量的80%左右,是維持生命活動(dòng)所需能量的主要來源[12-13]。

        首先我們看一下物質(zhì)代謝中葡萄糖有氧氧化過程。葡萄糖有氧氧化過程可分為三個(gè)階段,首先在第一階段葡萄糖或糖原分解為丙酮酸過程中,從實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們可以看出HL、HQ、HB組顯著降低GCK、PFK-1、PGK、PK的表達(dá),F(xiàn)Z、GJ、HJ組顯著升高GCK、PFK-1、PGK、PK的表達(dá),可見典型寒涼性藥物能夠抑制葡萄糖分解為丙酮酸進(jìn)程,而典型溫?zé)嵝运幠軌虼龠M(jìn)葡萄糖分解為丙酮酸進(jìn)程。

        在第二階段丙酮酸氧化脫羧生成acetyl-CoA過程中,是由丙酮酸脫氫酶復(fù)合體催化完成的,該復(fù)合體由三種酶和五種輔助因子構(gòu)成,是有氧氧化途徑的關(guān)鍵酶之一,而PDH在其中發(fā)揮著重要作用。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看HL、HQ、HB、FZ、GJ、HJ組與正常對(duì)照組相比PDH均沒有顯著差異,但是Acetyl-CoA的表達(dá)在HL、HQ組顯著升高,既然PDH的表達(dá)沒有顯著變化,那Acetyl-CoA的表達(dá)為什么會(huì)增加呢?在體內(nèi)Acetyl-CoA不僅來源于糖代謝途徑,脂肪動(dòng)員生成的脂肪酸,經(jīng)β氧化可生成大量的Acetyl-CoA,從實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們可以看出HL、HQ組ATGL的表達(dá)升高,可見這兩組的脂肪動(dòng)員進(jìn)程是明顯促進(jìn)的,這就解釋了PDH沒有顯著升高,而Acetyl-CoA的表達(dá)顯著升高的原因,同時(shí)脂肪分解代謝的加速也與HL、HQ組大鼠體重的降低有直接關(guān)系。

        下面我們看一下第三階段三羧酸循環(huán),由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出HL、HQ、HB組能夠升高α-KGDHC的表達(dá),降低ICD的表達(dá),F(xiàn)Z、GJ、HJ組能夠降低α-KGDHC的表達(dá),升高ICD的表達(dá)。這兩個(gè)酶與NADH生成有關(guān),然而不論是在寒性藥組還是熱性藥組,對(duì)α-KGDHC和ICD這兩個(gè)酶的調(diào)節(jié)正負(fù)相抵,提示我們典型寒熱藥對(duì)三羧酸循環(huán)階段相關(guān)酶的表達(dá)并沒有明顯的影響。同時(shí)三羧酸循環(huán)是NAD+,NADH生成的主要來源,從實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們可以看出,NAD+,NADH及NAD+/NADH各組之間均沒有顯著差異,這也進(jìn)一步說明了典型寒熱藥及桑白皮拆分組分對(duì)于三羧酸循環(huán)階段并沒有顯著的影響。

        糖原是糖的儲(chǔ)存形式,機(jī)體通過糖原的合成與分解維持血糖水平。糖原分解過程中PYGL是催化糖原分解生成葡萄糖的關(guān)鍵限速酶,從實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們可以看出,HL、HQ組能夠促進(jìn)PYGL的表達(dá),加速糖原的分解,促進(jìn)葡萄糖的生成,用于維持體溫等;而FZ、GJ、HJ組表現(xiàn)出抑制PYGL表達(dá)的趨勢(shì),S-30、S-Z組對(duì)PYGL調(diào)節(jié)不明顯,未表現(xiàn)出明顯的促進(jìn)糖原分解作用;而在糖原合成過程中GSK-3能夠磷酸化糖原合酶(GS)使其失活,從而抑制糖原合成進(jìn)程,從實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)HL、HQ、HB、FZ、GJ、HJ組對(duì)其均沒有顯著影響,而S-30、S-Z組則表現(xiàn)出抑制GSK-3表達(dá)的趨勢(shì),結(jié)果提示S-30、S-Z組具有促進(jìn)糖原合成的作用,結(jié)合實(shí)驗(yàn)室前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果S-30、S-Z能夠調(diào)節(jié)糖尿病小鼠糖脂紊亂狀況,發(fā)揮降血糖作用,這也進(jìn)一步提示S-30、S-Z可能是通過促進(jìn)糖原的合成發(fā)揮降血糖的作用,該結(jié)果與前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。

        在氧化磷酸化過程中,呼吸鏈占據(jù)著至關(guān)重要的作用。目前已知體內(nèi)主要包括NADH氧化呼吸鏈和琥珀酸氧化呼吸鏈(或稱FADH2氧化呼吸鏈)。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看,HL、HQ、HB組均能夠抑制CCR、COX、ATPs等酶的表達(dá),而FZ、GJ、HJ組能夠促進(jìn)CCR、COX、ATPs等酶的表達(dá),說明寒性藥對(duì)于呼吸鏈表現(xiàn)出抑制作用,而熱性藥則表現(xiàn)出促進(jìn)作用。因此在對(duì)呼吸鏈及ATP生成過程,寒涼性藥物表現(xiàn)出明顯的抑制作用,而溫?zé)嵝运幬飫t表現(xiàn)出顯著的促進(jìn)作用。但最終的結(jié)果顯示各組之間ATP的含量并沒有顯著變化,原因可能是:首先NADH是生成ATP重要的原料,而主要生成NADH的階段是三羧酸循環(huán),因此這是ATP含量沒有變化的重要原因;其次由于機(jī)體對(duì)于給藥之后出現(xiàn)的應(yīng)答反應(yīng),如給予寒性藥后,機(jī)體的物質(zhì)代謝和能量代謝都處于被抑制的狀態(tài),從而反饋促進(jìn)糖原的分解以及脂肪的動(dòng)員來合成能量用于機(jī)體低水平的物質(zhì)代謝以及維持體溫,保持機(jī)體的正常功能;而給予熱性藥后,機(jī)體物質(zhì)與能量代謝均處于促進(jìn)的狀態(tài),但ATP的含量與正常組相比沒有顯著差異,其原因可能是機(jī)體旺盛的物質(zhì)代謝需要能量的參與,而物質(zhì)代謝所產(chǎn)生的能量一部分以熱能的形式散發(fā)了。

        故對(duì)于物質(zhì)代謝和能量代謝而言,寒涼性藥物傾向于抑制機(jī)體物質(zhì)代謝和能量代謝,這些抑制作用主要體現(xiàn)在對(duì)第一階段葡萄糖氧化成丙酮酸相關(guān)酶表達(dá)情況的影響以及對(duì)呼吸鏈上相關(guān)酶表達(dá)的下調(diào);溫?zé)嵝运幬飪A向于促進(jìn)機(jī)體物質(zhì)代謝,主要表現(xiàn)在對(duì)第一階段葡萄糖氧化成丙酮酸相關(guān)酶表達(dá)的上調(diào)及對(duì)呼吸鏈上相關(guān)酶表達(dá)的上調(diào)。這與本課題“促進(jìn)機(jī)體能量、物質(zhì)代謝的中藥具有熱(或溫)性,抑制機(jī)體能量、物質(zhì)代謝的中藥具有寒(或涼)性?!边@一假說相契合。S-30、S-Z均能夠降低GCK、PFK-1、PGK、PK等酶的表達(dá),同時(shí)也能降低CCR、COX、ATPs、ADK等酶的表達(dá),表現(xiàn)出與寒涼性藥物相似的作用趨勢(shì),故我們推測(cè)S-30、S-Z可能是桑白皮藥性寒涼的物質(zhì)基礎(chǔ)。

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        (2015-12-09收稿 責(zé)任編輯:洪志強(qiáng))

        The influence on substance and energy metabolism of the cold and warm property of fraction of Mori Cortex in normal rats

        Ke Yingying1,2,Yuan Peipei1,2,Wang Xiaolan1,2,F(xiàn)eng Weisheng1,2,Zheng Xiaoke1,2

        (1HenanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450046,China; 2CollaborativeInnovationCenterforRespiratoryDiseaseDiagnosisandTreatment﹠ChineseMedicineDevelopmentofHenanProvince,Zhengzhou450046,China)

        Objective:To explore the cold and warm property of fraction of Mori Cortex by detecting related enzyme activity in substance and energy metabolism in normal rats.Methods:SD rats were randomly divided into normal,cold medicine Coptis chinensis Franch group,Scutellaria baicalensis Georgi group,Phellodendron chinense Schneid.Group,and warm medicine Aconitum carmichaelii Debx group,Zingiber offcinale Rosc group,Zanthoxylum bungeanum Maxim.group,30% split fraction of Mori Cortex group,fatty oil fraction of Mori Cortex group.All groups were administered orally for 9 days and detected glucokinase(GCK),phosphofructokinase(PFK-1),phosphoglycerate kinase(PGK),pyruvate kinase(PK),pyruvate dehydrogenase(PDH),acetyl coenzyme A(acetyl-CoA),citrate synthase(CS),isocitrate dehydrogenase(ICD),α-ketoglutarate dehydrogenase(α-KGDHC),fumarase(FUM),glycogen phosphorylase(PYGL),glycogen synthase kinase(GSK-3),adipose triglyceride lipase(ATGL),which related to substance metabolism in liver and heart; as well as cytochrome C reductase(CCR),cytochrome C oxidase(COX),ATP synthase(ATPs),adenylate kinase(ADK),Na+-K+ATPase and the levels of ATP、ADP、NAD+、NADH、NAD+/NADH,which related to energy metabolism.In this way,we can explore the influence on substance and energy metabolism of the cold and warm property of fraction of Mori Cortex.Results:Comparing with the normal group,the weight of Coptis chinensis Franch group and Scutellaria baicalensis Georgi group were reduced(P<0.05 orP<0.01)and there were no difference in other groups(P>0.05).The level of GCK,PFK-1,PGK,PK,ICD,CCR,COX,ATPs,ADK were significantly decreased(P<0.05 orP<0.01),acetyl-CoA,α-KGDHC,PYGL,ATGL were significantly increased(P<0.05 orP<0.01),the level of ATP was decreased without significantly and the levels of ADP、NAD+、NADH、NAD+/NADH had no significant difference(P>0.05)in the groups of Coptis chinensis Franch,Scutellaria baicalensis Georgi and Phellodendron chinense Schneid.The activity of GCK,PGK,CCR,COX,ATPs,ADK,ICD were significantly increased(P<0.05 orP<0.01)and acetyl-CoA,α-KGDHC,PYGL,ATGL were significantly decreased(P<0.05 orP<0.01),the level of ATP was increased without significantly and the levels of ADP、NAD+、NADH、NAD+/NADH had no significant difference(P>0.05)in the groups of Aconitum carmichaelii Debx,Zingiber offcinale Rosc and Zanthoxylum bungeanum.The activity of GCK、PFK-1、PGK、PK、PDH、ICD、GSK-3、CCR、COX、ATPs、ADK were significantly increased(P<0.05 orP<0.01)and α-KGDHC was significantly decreased(P<0.05)in the groups of 30% split fraction,fatty oil fraction of Mori Cortex,which showed the similar trend with cold medicine.Conclusion:The cold and warm property of Chinese traditional medicines can influence substance and energy metabolism of our body,which means the cold medicines can inhibit substance and energy metabolism and the warm medicines do the opposite,which is fit in with the new hypothesis that proposed by chief scientist Kuang Haixue professor.Overall,the groups of 30% split fraction,fatty oil fraction of Mori Cortex could inhibit substance and energy metabolism,which were similar with the cold medicines.We inferred that the property of these fractions maybe belong to the cold property.

        Typical medicines of cold and warm;The cold and warm property of Chinese Herbal Medicine;Fraction of Mori Cortex;Substance metabolism;Energy metabolism

        國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)資助項(xiàng)目:宣瀉利水中藥的藥性研究(編號(hào):2013CB531802)

        克迎迎(1988.3—),女,籍貫河南商丘,在讀博士,研究方向:中藥活性成分及其作用機(jī)制研究

        鄭曉珂,女,博士,教授,博士生導(dǎo)師,主要研究領(lǐng)域?yàn)椋褐兴幓钚猿煞旨捌渥饔脵C(jī)制研究,E-mail:zhengxk.2006@163.com,Tel:(0371)65680011

        R293

        A

        10.3969/j.issn.1673-7202.2015.12.005

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