謝 璐 宋玲玲 江春雨,2*

(1塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院， 新疆 阿拉爾843300)(2 新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 新疆 阿拉爾843300)

?

驢乳和牛乳對(duì)免疫抑制小鼠免疫功能調(diào)節(jié)的比較研究

謝 璐1宋玲玲1江春雨1,2*

(1塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院， 新疆 阿拉爾843300)(2 新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 新疆 阿拉爾843300)

本文比較了驢乳和牛乳對(duì)氫化可的松所致的免疫抑制小鼠免疫功能調(diào)節(jié)的影響。結(jié)果表明，驢乳和牛乳均能改變免疫抑制小鼠脾臟和胸腺指數(shù)、白細(xì)胞數(shù)，TNOS(總一氧化氮合酶)和iNOS(誘導(dǎo)型一氧化氮合酶)的活性。驢乳和牛乳對(duì)機(jī)體的正常組織細(xì)胞能起到保護(hù)作用，并增強(qiáng)小鼠的免疫力，而且在同等劑量下，驢乳的增強(qiáng)效果優(yōu)于牛乳。

驢乳； 牛乳； 免疫抑制； 功能調(diào)節(jié)

驢乳的化學(xué)成分與人乳比較接近，具有低膽固醇和低脂肪的特點(diǎn)。驢乳不僅營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，對(duì)人體的心、肝、脾、肺等多種器官還有保健作用。除強(qiáng)身健體之外，還有一定的藥用價(jià)值，對(duì)肺結(jié)核、氣喘、胃炎等起到一定的輔助療效作用，受到食品界及乳品界的廣泛關(guān)注[1]。牛乳也是人們?nèi)粘Ｉ钪邢矚g食用的不可缺少的營(yíng)養(yǎng)品，有較好的保健和醫(yī)療價(jià)值。牛奶為完全蛋白質(zhì)食品，對(duì)腦髓和神經(jīng)的形成及發(fā)育有重要作用。有臨床研究證實(shí)牛奶可輔助治療消化性潰瘍，還能增強(qiáng)人體的抗癌和抗病能力[2，3]。目前驢乳和牛乳對(duì)免疫抑制小鼠免疫功能的比較研究未見報(bào)道。本研究將驢乳和牛乳分別作用于免疫抑制小鼠，比較二者對(duì)免疫抑制小鼠免疫器官重量、白細(xì)胞數(shù)及血清中TNOS和iNOS的活性的影響，以期為進(jìn)一步研究藥食兩用的乳品提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康昆明種小鼠，雌雄各半，體重20～22 g，許可證號(hào)SCXK( 新) 2003-0001，由塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)站提供。普通飼料喂養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度20～22 ℃。

1.1.2 藥品與儀器

驢乳購(gòu)于喀什岳普湖縣“疆岳驢”良種繁育基地，牛乳為市售的新鮮牛乳，NOS測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)，氫化可的松(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司),723型可見分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司)，低速臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理

新鮮的驢乳和牛乳分別煮沸10 min，自然冷卻后備用。將小鼠隨機(jī)分成4組, 每組10 只, 其中免疫抑制模型對(duì)照組、驢乳組及牛乳組在試驗(yàn)第 1、3、5、7 d 皮下注射0.35%的氫化可的松溶液(0. 20 ml/10g)，造成免疫抑制，驢乳組每天灌服驢乳 (0. 20 ml/10g),牛乳組每天灌服牛乳(0. 20 ml/10g),模型對(duì)照組灌服等量的生理鹽水，正常對(duì)照組皮下注射、灌服的均為等體積的生理鹽水,試驗(yàn)時(shí)間為10天。

1.2.2 測(cè)定指標(biāo)及方法

第10天給藥1小時(shí)后, 先稱取所有小鼠的重量，再于小鼠尾靜脈采血20 μL，按照常規(guī)的方法計(jì)算白細(xì)胞的總數(shù)。用消毒剪快速剪去小鼠頭頸部，倒立小鼠讓血液滴入離心管中，靜置待自然凝固，2000 r/min離心10 min后分離出血清，迅速采用化學(xué)比色法測(cè)定鼠血清總一氧化氮合酶(TNOS)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的活力[4]，測(cè)定步驟均按照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作[5]。迅速用消毒剪刀剪開處死后的小鼠腹部皮膚，暴露出腹膜，并用酒精棉擦拭腹膜進(jìn)行消毒。迅速取出小鼠的胸腺和脾臟，分別稱重，用以計(jì)算臟/體比(臟器質(zhì)量mg/體質(zhì)量g)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

表1 驢乳和牛乳對(duì)免疫抑制小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)的影響

注: 與模型對(duì)照組比較，**P<0. 01，差異極顯著;*P<0. 05，差異顯著；驢乳與牛乳組比較, ΔP<0. 05，差異顯著。

由表1可知，免疫抑制小鼠的白細(xì)胞數(shù)減少。與免疫抑制模型組比較，驢乳組和牛乳組的白細(xì)胞數(shù)升高，差異極顯著(p<0. 01)?？梢婓H乳和牛乳對(duì)氫化可的松所致的外周血白細(xì)胞減少, 都有非常明顯的保護(hù)作用。驢乳組與牛乳組比較，差異顯著(P<0. 05)。

2.2 驢乳和牛乳對(duì)免疫抑制小鼠臟/體比的影響

表2 驢乳和牛乳對(duì)免疫抑制小鼠免疫器官重量的影響

注: 與模型對(duì)照組比較，**P<0. 01，差異極顯著;*P<0. 05，差異顯著；驢乳與牛乳組比較, ΔP<0. 05，差異顯著。

由表2可知，與對(duì)照組相比，免疫抑制模型組小鼠的脾/體比和胸腺/體比顯著降低，與模型組相比，驢乳和牛乳均可提高免疫抑制小鼠胸腺/體比，差異顯著，驢乳組與牛乳組比較，差異顯著(P<0. 05)。驢乳和牛乳均提高免疫抑制小鼠脾/體比，且差異極顯著。說(shuō)明驢乳和牛乳對(duì)小鼠免疫器官的發(fā)育有一定的影響。

2.3 驢乳和牛乳對(duì)免疫抑制小鼠血清TNOS和iNOS活性的影響

表3 驢乳和牛乳對(duì)免疫抑制小鼠血清TNOS和iNOS活性的影響

注: 與模型對(duì)照組比較，**P<0. 01，差異極顯著;*P<0. 05，差異顯著；驢乳與牛乳組比較, ΔP<0. 01，差異極顯著。

由表3可知，與模型對(duì)照組相比，驢乳組和牛乳組的免疫抑制小鼠血清中TNOS和iNOS活性均明顯降低。其中，iNOS活性顯著低于模型對(duì)照組(P<0. 05)，TNOS活性極顯著低于模型對(duì)照組(P<0. 01)。驢乳組與牛乳組間有極顯著性差異(P<0. 01)。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用氫化可的松復(fù)制小鼠免疫抑制模型，與正常對(duì)照組相比較，模型組的小鼠白細(xì)胞數(shù)減少，胸腺和脾臟指數(shù)顯著降低，反映其免疫功能受到了損傷，表明免疫抑制模型復(fù)制成功。近來(lái)研究表明，在同等條件下氫化可的松可復(fù)制出比環(huán)磷酰胺更穩(wěn)定、更典型、更理想的免疫抑制小鼠模型[6]。白細(xì)胞是血液參與機(jī)體免疫功能的主要成分, 參與機(jī)體重要的免疫功能。在循環(huán)血液中白細(xì)胞的數(shù)量始終處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，白細(xì)胞數(shù)量的變化會(huì)影響機(jī)體的免疫能力；胸腺與脾臟是機(jī)體主要的免疫器官，胸腺是T淋巴細(xì)胞分化成熟的中樞免疫器官, 脾臟則是體內(nèi)最重要的外周免疫器官,它們與體液免疫和細(xì)胞免疫均有密切的關(guān)系，胸腺和脾臟指數(shù)的變化也是評(píng)定免疫機(jī)能的重要指標(biāo)之一。有研究表明，動(dòng)物體內(nèi)外的一些活性物質(zhì)均能通過(guò)NO來(lái)調(diào)節(jié)動(dòng)物免疫防御。NO是一種神經(jīng)遞質(zhì)，但是大劑量會(huì)損傷正常的細(xì)胞[7]。而NO的作用依賴于NOS的活性，所以測(cè)定NOS的活性是研究NO病理作用的重要環(huán)節(jié)。NOS包括神經(jīng)型NOS(nNOS)、內(nèi)皮型NOS(eNOS)以及在損傷后誘導(dǎo)表達(dá)的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)三種類型[8，9]。受內(nèi)毒素及細(xì)胞因子刺激時(shí)，iNOS激活持續(xù)產(chǎn)生大量的NO，發(fā)揮細(xì)胞毒性作用[5]。綜上所述，本研究采用外周血白細(xì)胞數(shù)、胸腺和脾臟指數(shù)、血清TNOS和iNOS活性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，比較驢乳和牛乳對(duì)免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)功能，結(jié)果顯示驢乳和牛乳均能使免疫抑制小鼠的白細(xì)胞數(shù)升高，胸腺和脾臟指數(shù)增大，血清中TNOS和iNOS的活性降低，從而對(duì)機(jī)體的正常組織細(xì)胞起到保護(hù)作用，并進(jìn)一步增強(qiáng)小鼠的免疫力，而且驢乳的增強(qiáng)效果優(yōu)于牛乳。本研究為進(jìn)一步開發(fā)驢乳的藥用價(jià)值和深入研究其作用機(jī)制提供了依據(jù)。

[1] 陸東林,張明.新疆疆岳驢乳研究進(jìn)展[J].中國(guó)乳品工業(yè),2013,41(02):32-36.

[2] 藺天慶,馬柯,曹新,等.淺談鮮牛奶營(yíng)養(yǎng)功效[J].科技致富向?qū)?2014(26):167.

[3] 裴曉言,顧名夏,黃鶴,等.牛乳中的免疫球蛋白與健康的研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2007,7(03):418-421.

[4] 沙愛龍,楊雪萍,王偉,等.硬枝堿蓬多糖對(duì)免疫抑制小鼠血清中NO含量及NOS活性的影響[J].四川動(dòng)物,2013,32(01):90-92.

[5] 張文杰.燈盞花素聯(lián)合三七總皂苷對(duì)急性腦梗死大鼠模型TNOS、iNOS的影響[D].中國(guó)中醫(yī)急癥,2011,20(04)：603-604.

[6] 呂穎堅(jiān),黃俊明,蔡玟，等.環(huán)磷酰胺和氫化可的松建立免疫抑制模型方法比較[J].衛(wèi)生研究，2012，41(06):952-955.

[7] 方允中，鄭榮梁．自由基生物學(xué)的理論與應(yīng)用[M]．北京:科學(xué)出版社，2002:24．

[8] Cengel A，Sahinarslan A．Nitric oxide and cardiovascular system[J]．Anadolu Kardiyol Derg，2006,6(4):364-368．

[9] Levy R M，Prince J M，Billiar T R．Nitric oxide:a clinical primer[J]．Crit Care Med，2005,33(12):492-495．

A Comparative Study on Effects of the Donkey Milk and Milk to Immunosuppressive Mice Immune Function Regulation

Xie Lu1Song Lingling1Jiang Chunyu1,2*

(1 College of Animal Science，Tarim University，Alar,Xingjing 843300)

(2 Key Laboratory of Animal Husbandry Science and Technology, Xinjiang Production and Construction Corps, Alar, Xinjiang 843300)

This article compared the donkey milk and milk on the immune function regulation of immunosuppressive mice caused by hydrocortisone. The results showed that donkey milk and milk could alter spleen and thymus index and Peripheral blood leukocytes of immunosuppressive mice, TNOS (total nitric oxide synthase) and iNOS(inducible nitric oxide synthase ) activity, Donkey milk and milk had protective effect to the cells of the body's normal tissue, and strengthening the immune system of mice, and in the same dose, enhancement effect of donkey milk was better than milk.

Donkey milk；milk；immunosuppression; function regulation

2014-10-25

塔里木大學(xué)校長(zhǎng)基金項(xiàng)目(TDZKSS201407)；大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(DKY2013004)。

謝璐(1993-)，女，本科生，研究方向?yàn)閯?dòng)物醫(yī)學(xué)。 E-mail: taoyaerxl@163.com

E-mail:jcydky@126.com

1009-0568(2015)02-0112-04

S852

A

10.3969/j.issn.1009-0568.2015.02.021