王麗娜，欒曉文

(1.云南省中醫(yī)中藥研究院，云南 昆明 650223；2.成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院，云南 昆明 650032)

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紅根消腫止痛有效部位篩選研究*

王麗娜1，欒曉文2△

(1.云南省中醫(yī)中藥研究院，云南 昆明 650223；2.成都軍區(qū)昆明總醫(yī)院，云南 昆明 650032)

目的 本課題擬對紅根進(jìn)行消腫止痛有效部位的篩選研究，確定其有效部位。方法 本課題著重進(jìn)行不同濃度乙醇及水對紅根的提取，將提取液進(jìn)行定性分析，總固體測定，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等篩選出紅根消腫止痛有效部位。結(jié)果 紅根的30%醇提液～90%醇提液具有較好的止痛效果，30%、50%的乙醇溶液有一定的降低小鼠耳腫脹作用。結(jié)論 紅根30%醇提液取液的有效成分最多，消腫止痛作用明顯。

紅根;有效部位;消腫止痛

紅根是天南星科天南星屬植物紅根南星(AnsaemacalcareumH.Li.)系云南苗族民間醫(yī)生普遍用于治療腮腺炎、乳腺炎、疔瘡、癰疽、無名腫毒、毒蛇咬傷等地方傳統(tǒng)習(xí)用藥材，已列入云南省藥材標(biāo)準(zhǔn)。目前文獻(xiàn)資料僅有對紅根進(jìn)行過生藥鑒定及紅根藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究報(bào)道，而對紅根作用有效部位的篩選研究未見報(bào)道。本課題擬對紅根進(jìn)行消腫止痛有效部位的篩選研究，確定其有效部位。

1 用滲漉法提取紅根

1.1 由于紅根中含有黏液質(zhì)，將紅根粉碎成過2號篩的粗粉難以用水和低濃度乙醇滲漉提取。因此，將紅根敲碎，過10號篩，備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 稱取5份紅根根莖粗粉，各100.0 g，分別用純化水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇100.0 mL潤濕(放置1h)。然后裝筒，加溶劑(分別添加300.0 mL溶劑)，排氣，浸漬(24 h)，滲漉，收集滲漉液備用。

1.3 滲漉液收集情況 見表1。

表1 不同劑量提取物比較

2 紅根化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)

2.1 水滲漉液預(yù)試驗(yàn) 鑒別項(xiàng)目為氨基酸、多肽、蛋白、糖、多糖類、皂苷、鞣質(zhì)、有機(jī)酸、生物堿類，參照藥典檢測標(biāo)準(zhǔn)，分別加入鑒別試液，結(jié)論為紅根水滲漉液含有糖、多糖類、有機(jī)酸、可能含有皂苷及生物堿類。

2.2 乙醇滲漉液預(yù)試驗(yàn)

2.2.1 90%乙醇滲漏液 鑒別項(xiàng)目為黃酮類、蒽醌類、酚類、香豆素、內(nèi)酯類、強(qiáng)心苷類、植物甾醇、三萜類、生物堿、揮發(fā)油及油脂，分別加入鑒別試液，結(jié)論為紅根90%乙醇漉液含有黃酮類、酚類、大量生物堿、可能含有三萜。

2.2.2 70%乙醇滲漉液 鑒別項(xiàng)目為黃酮類、蒽醌類、酚類、香豆素、內(nèi)酯類、強(qiáng)心苷類、植物甾醇、三萜類、生物堿、揮發(fā)油及油脂，分別加入鑒別試液，結(jié)論為紅根70%乙醇漉液含有黃酮類、生物堿、可能含有三萜及植物甾醇。

2.2.3 50%乙醇滲漉液 鑒別項(xiàng)目為黃酮類、蒽醌類、酚類、香豆素、內(nèi)酯類、強(qiáng)心苷類、植物甾醇、三萜類、生物堿、揮發(fā)油及油脂，分別加入鑒別試液，結(jié)論為紅根70%乙醇漉液含有黃酮類、生物堿、可能含有三萜及植物甾醇。

2.2.4 30%乙醇滲漉液 鑒別項(xiàng)目為黃酮類、蒽醌類、酚類、香豆素、內(nèi)酯類、強(qiáng)心苷類、植物甾醇、三萜類、生物堿、揮發(fā)油及油脂，分別加入鑒別試液，結(jié)論為紅根70%乙醇漉液含有黃酮類、生物堿、可能含有三萜及植物甾醇。

3 5種不同溶劑的紅根提取液總固體測定

分別量取以上5種提取液25.0 mL，置已衡重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干，于105℃的烘箱中烘烤5 h，取出，置干燥器中。冷卻30 min后，稱重。見表2。

表2 不同溶劑的紅根取液總固體測定

4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

4.1 實(shí)驗(yàn)藥材與動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)藥材：紅根根莖(云南省文山州西疇縣把獨(dú)鄉(xiāng))。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：近交系雄性小鼠，體重18-22 g。KM小鼠，SPF級，許可證號：SOXK(滇)2011-0004，每組10只。

4.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境 云南中醫(yī)中藥研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)屏障系統(tǒng)，系統(tǒng)內(nèi)溫度20-26℃，濕度40-60%。

4.3 鼠飼料、墊料及飲用水 鼠飼料由蘇州雙獅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料科技有限公司提供，飼料生產(chǎn)許可證號：鼠墊料為玉米芯墊料，由蘇州雙獅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料科技有限公司蘇州竹靈貿(mào)易有限公司提供。飲用水自制。

4.4 試劑 無水乙醇 AR級(天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司)，二甲苯 AR級(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司)，云南白藥酊(云南白藥集團(tuán))，純化水。

4.5 實(shí)驗(yàn)儀器與器材 電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)，SQP電子天平、BP310S分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)，XZC-A型壓痛儀(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備供應(yīng)維修站)，手術(shù)剪、直徑9 mm的打孔器，優(yōu)普系列超純水制造系統(tǒng)UHP-IV-20T(成都超純水科技有限公司)等。

4.6 有效部位的提取 采用溶劑提取法。根據(jù)溶劑與溶質(zhì)相似相溶原理，所選擇的溶劑穿透入藥材粉末的細(xì)胞膜，溶解溶質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)外溶質(zhì)濃度差，將溶質(zhì)滲出細(xì)胞膜，達(dá)到提取有效成分的目的。

分別稱取100 g紅根藥材粉于5個(gè)燒杯中，各加入提取溶劑100 mL潤濕1 h，然后分別裝入5個(gè)滲漉筒中，在各加入提取溶劑300 mL，排出滲漉筒內(nèi)的空氣，浸潤24 h[4]。浸潤后，開始滲漉24 h，得到紅根選用不同濃度(30、50、70、90%)的乙醇及水的不同提取物。

4.7 實(shí)驗(yàn)方案4.7.1 小鼠壓痛實(shí)驗(yàn) 取20-25 g小鼠，雌雄各半，設(shè)置空白對照組、陽性對照組和水提液組、30%醇提組、50%醇提組、70%醇提組、90%醇提組。每組10只小鼠，測定其基礎(chǔ)痛閾值并記錄。尾巴外敷給藥5天，30 min后，測定給藥后的痛閾值，前后兩次痛閾值差對比空白對照組和陽性對照組的痛閾值差，從而確定不同濃度的乙醇及水的不同提取物的止痛效果。

XZC-A型壓痛儀工作原理：給小鼠尾巴施加連續(xù)遞增的壓力，使其產(chǎn)生疼痛。當(dāng)壓力達(dá)到小鼠的痛閾時(shí)，被裝在固定器的小鼠會發(fā)出叫聲，聽到叫聲時(shí)可判斷達(dá)到痛閾，停止施壓，并將此時(shí)壓力值(痛閾)記錄下來。取給藥前間隔5 min測3次所得數(shù)值的均數(shù)為基礎(chǔ)痛閾值[5]。

4.7.2 小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn) 小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白對照組、陽性對照組和水提液組、30%醇提組、50%醇提組、70%醇提組、90%醇提組。每組10只，每天耳廓外用給藥1次，連續(xù)給藥5天，末次給藥后30 min后各鼠以0.02 mL二甲苯涂搽右耳兩面，2 h后脫頸處死，(處死前稱重)沿耳廓基線剪下兩耳，以8 mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片稱重，計(jì)算腫脹度(兩耳重量差)及腫脹抑制率[6]。

腫脹度=右耳片重量-左耳片重量

實(shí)驗(yàn)原理：二甲苯是一化學(xué)刺激劑，對皮膚黏膜有刺激作用，可致急性炎癥，涂布小鼠耳廓有明顯的致炎作用，可使小鼠耳廓腫脹，若藥物可以抑制這種致炎劑引起的耳重增加即可了解藥物的抗炎消腫作用[5]。

4.7.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見表3-4。

表3 小鼠壓痛實(shí)驗(yàn)

注：與空白組比較，*P<0.05；與空白組比較，**P<0.01

表4 抗二甲苯引起小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)

注：與空白組比較,*P<0.05；與空白組比較,**P<0.01。

由實(shí)驗(yàn)組對比空白組和陽性組，陽性組涂擦云南白藥酊，實(shí)驗(yàn)組分別為紅根的水和30%、50%、70%、90%醇提液。由以上二表的統(tǒng)計(jì)結(jié)果初步分析表明，止痛作用強(qiáng)弱依次是：陽性組、30%醇提組、50%醇提組、70%醇提組、90%醇提組、水提液組。消腫作用強(qiáng)弱依次是陽性組、30%醇提組、50%醇提組。止痛消腫作用明顯的是陽性組、30%醇提組、50%醇提組。

5 總結(jié)與討論

通過紅根的消腫止痛作用有效部位的研究實(shí)驗(yàn)，得出紅根的30%醇提液-90%醇提液具有較好的止痛效果，30%、50%的乙醇溶液有一定的降低小鼠耳腫脹作用，初步確定紅根提液的消腫止痛有效部位。通過實(shí)驗(yàn)分析表明30%的乙醇溶液提取的有效成分最多，消腫止痛作用明顯。本課題的完成為提高紅根止痛消腫的療效，降低毒副作用，進(jìn)一步研究開發(fā)新制劑提供依據(jù)。

[1]國家中醫(yī)藥管理局編委會.中華本草[M].上海：上海科技出版社，1997.

[2]全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996.

[3]云南中草藥整理組.云南中草藥[M].昆明：云南人民出版社，2011.

[4]匡學(xué)海.中藥化學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2011.

[5]張大方，金若英.藥理與中藥藥理實(shí)驗(yàn)(2版)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006.

[6]曹斌，劉元，宋志釗，等，消腫止痛酊的藥效學(xué)研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)，2009.

云南省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目：紅根消腫止痛作用有效部位篩選研究(NO：2011FZ235)< class="content">作者簡介：王麗娜(1980.9-)，女，云南，藥師，研究方向：主要從事中藥研究。

王麗娜(1980.9-)，女，云南，藥師，研究方向：主要從事中藥研究。

△通信作者：欒曉文(1961-)，女，研究方向：中醫(yī)中藥臨床研究。E-mail：1295048072@qq.com.

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