郭路生 李建路 李 姣

血清倍比稀釋法應(yīng)用于自身抗體合并同種抗體鑒定—附1例報(bào)告

郭路生1李建路2李 姣1

目的探討自身抗體合并同種抗體鑒定的簡(jiǎn)便方法。方法采集自身抗體合并同種抗體患者血清，使用生理鹽水將待檢血清倍比稀釋，分別與抗體鑒定譜細(xì)胞反應(yīng)，觀察譜細(xì)胞反應(yīng)格局變化，分析反應(yīng)結(jié)果。結(jié)果隨著待檢血清稀釋倍數(shù)的增加，各譜細(xì)胞凝集強(qiáng)度逐漸減弱至消失。待檢血清原液與譜細(xì)胞反應(yīng)，10個(gè)譜細(xì)胞均凝集，凝集強(qiáng)度無差異；隨著待檢血清稀釋倍數(shù)的增加，譜細(xì)胞凝集強(qiáng)度減弱程度出現(xiàn)差異，自身抗體致凝集消失，同種抗體致譜細(xì)胞凝集格局呈現(xiàn)，對(duì)照譜細(xì)胞格局表可進(jìn)行同種抗體鑒定。結(jié)論血清倍比稀釋法，較以往自身抗體吸收法更加簡(jiǎn)便、快速，但有可能造成低效價(jià)同種抗體漏檢，須謹(jǐn)慎使用。

倍比稀釋法；自身抗體；同種抗體；抗體鑒定

自身抗體合并同種抗體，常發(fā)生于多次輸血治療的患者，同時(shí)患有自身免疫性疾病，內(nèi)外科患者均可出現(xiàn)。由于患者血清中游離自身抗體的存在，導(dǎo)致不規(guī)則抗體篩查3個(gè)篩查細(xì)胞均呈陽性；且由于自身抗體的掩蓋，在進(jìn)行抗體鑒定時(shí)，抗體鑒定10個(gè)譜細(xì)胞均呈陽性，凝集強(qiáng)度往往無強(qiáng)弱之分，無法根據(jù)反應(yīng)格局判斷合并同種抗體的特異性。以往在實(shí)驗(yàn)室中，通常使用自身細(xì)胞吸收自身抗體后，再進(jìn)行同種抗體鑒定。但這種方法耗費(fèi)時(shí)間較長，對(duì)搶救急重患者不適用［1］。本研究旨在探討血清倍比稀釋法在自身抗體合并同種抗體中的應(yīng)用。

1 材料方法

1.1 研究對(duì)象

賀某，男性，40歲。2014年末在外院，因外傷致截肢，術(shù)中及術(shù)后多次輸注紅細(xì)胞制劑。近日，為行鋼板取出術(shù)，來我院住院治療。術(shù)前備血時(shí)，發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體篩查3個(gè)篩查細(xì)胞均陽性，凝集強(qiáng)度無強(qiáng)弱區(qū)分，與多袋ABO同型供血者配血，主次側(cè)均不相合。為了查清原因，決定進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定。

1.2 試劑與儀器

不規(guī)則抗體篩選細(xì)胞（3譜，長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)：20141001）；抗體鑒定譜細(xì)胞（10譜，上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20145705）；抗球蛋白檢測(cè)卡（長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)：20140201）；Rh分型抗體（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20140217）。以上所有試劑均在效期內(nèi)使用。FYQ型免疫微柱孵育器、TD-3A型血型血清學(xué)用離心機(jī)（長春博研醫(yī)學(xué)生物儀器公司）。

1.3 標(biāo)本處理

EDTA-K2抗凝管采集患者靜脈血，1 000 g離心5 min，取上清，待檢。

1.4 不規(guī)則抗體篩查

血清標(biāo)本，使用抗人球蛋白檢測(cè)卡進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，按廠家使用說明書進(jìn)行操作和判讀并記錄。

1.5 不規(guī)則抗體鑒定

將待檢血清，用生理鹽水稀釋2，4，6，8，16，32，64，128倍，使用微柱凝膠抗人球蛋白卡，分別和抗體鑒定譜細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)。觀察比較不同稀釋倍數(shù)下，待檢血清和10個(gè)譜細(xì)胞反應(yīng)的凝集強(qiáng)度變化情況。當(dāng)某一稀釋倍數(shù)下，部分譜細(xì)胞凝集強(qiáng)度減弱或凝集消失，將剩余仍存在凝集的譜細(xì)胞與譜細(xì)胞格局表進(jìn)行比對(duì)，鑒定抗體特異性。如抗體鑒定為Rh系統(tǒng)抗體，使用Rh分型抗體鑒定受血者Rh血型抗原，確定抗體相應(yīng)抗原陰性，以驗(yàn)證抗體鑒定結(jié)果，并需找相應(yīng)抗原陰性紅細(xì)胞進(jìn)行交叉配血。

2 結(jié)果

待檢血清原液與譜細(xì)胞反應(yīng)，10個(gè)譜細(xì)胞均凝集，凝集強(qiáng)度均達(dá)3+～4+，無差異；待檢血清稀釋4倍后，部分譜細(xì)胞凝集強(qiáng)度減弱明顯，另外一部分譜細(xì)胞凝集強(qiáng)度減弱不明顯，反應(yīng)格局初步呈現(xiàn)；當(dāng)待檢血清繼續(xù)稀釋至8倍時(shí)，凝集強(qiáng)度減弱的譜細(xì)胞凝集消失，呈陰性，余譜細(xì)胞凝集強(qiáng)度由原來的3+S降至2+w，根據(jù)譜細(xì)胞反應(yīng)格局表，鑒定為抗cE，見表1。

3 討論

自身抗體合并同種抗體，常常造成交叉配血和抗體鑒定困難，長期以來一直困擾著輸血實(shí)驗(yàn)室工作人員。實(shí)驗(yàn)室中，技術(shù)人員常常將自身紅細(xì)胞進(jìn)行輕度熱放散或氯喹放散或乙醚放散后，使用自身吸收方法去除自身抗體對(duì)同種抗體鑒定的干擾［2-4］。此種方法需要一定量的自身壓積紅細(xì)胞，增加自身免疫溶血性貧血的患者貧血負(fù)擔(dān)；更主要是的，吸收放散耗費(fèi)時(shí)間較長，結(jié)果常不理想，不適用于緊急用血［1］。按照臺(tái)灣大學(xué)醫(yī)院張志升教授的建議，針對(duì)自身抗體合并同種抗體的患者，采用血清倍比稀釋法去除自身抗體的干擾，能夠很容易的鑒定出同種抗體的特異性。此種方法根據(jù)抗體的免疫學(xué)特性設(shè)計(jì)。自身抗體大多是高親和力，但低效價(jià)，稀釋前與抗原紅細(xì)胞結(jié)合能力較強(qiáng)，稀釋后，結(jié)合紅細(xì)胞能力大幅降低；反之同種抗體多低親和力高效價(jià)，未稀釋時(shí)，結(jié)合紅細(xì)胞能力表現(xiàn)不佳，但稀釋數(shù)倍后，仍有較強(qiáng)的結(jié)合紅細(xì)胞的能力［5-6］。此種方法，簡(jiǎn)便，快速，經(jīng)濟(jì)，適用于自免溶貧合并同種抗體患者緊急輸血時(shí)。但血清倍比稀釋法，也能將低效價(jià)的同種抗體稀釋掉，造成漏檢。因此，如果條件允許，建議兩種方法同時(shí)進(jìn)行，互相驗(yàn)證，保證血型抗體鑒定準(zhǔn)確。值得注意的是，患者血清中如果有游離的自身抗體，此時(shí)不管在試管中用什么方法去除自身抗體，配上血都是假象，因?yàn)榛颊唧w內(nèi)的自身抗體并沒有去除，輸進(jìn)體內(nèi)的紅細(xì)胞一樣會(huì)凝集。因此，如何去除患者體內(nèi)自身抗體的影響值得進(jìn)一步研究。

表1 抗體鑒定反應(yīng)格局表

［1］ 蘭炯采，劉景漢，馬紅麗. 輸血前試驗(yàn)中值得研討的若干問題［J］.中國輸血雜志，2013，26（1）: 1-2.

［2］ 余林，陳文珠，鳳婧，等. 1例自身抗體合并抗-Fv～b的鑒定及輸血治療［J］. 中國輸血雜志，2014，27（1）: 82-83.

［3］ 駱宏，張潤青，羅廣平，等. 混合抗體型自身免疫性溶血性貧血的血型定型和抗體鑒定［J］. 中山大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)科學(xué)版），2013，34（3）: 434-437.

［4］ 李健，董玉芳，呂文彬，等. 自身抗體合并抗-Mur、抗-C及其他同種抗體緊急情況下的配血處理［J］. 中外醫(yī)學(xué)研究，2012，10（27）: 7-9.

［5］ 劉敬閃，田亞娟，趙倩，等. 自身抗體引起疑難配血的處理對(duì)策［J］. 臨床血液學(xué)雜志，2013（5）: 669-670.

［6］ 向東，劉曦，王健蓮，等. 紅細(xì)胞溫自身抗體的血清學(xué)特點(diǎn)分析及配血對(duì)策［J］. 中國輸血雜志，2008，21（12）: 924-926.

Serum Levels of Double Dilution Method in the Identification of Autoantibodies Associated With the Same Kind of Antibody-A Report of One Case

GUO Lusheng1LI Jianlu2LI Jiao11 The Affiliated Hospital of Jilin Medical University，Jilin 132013，China，2 The Forty-fourth Unit of 93062 Armed in People's Liberation Army Forces China，Jilin 132000，China

ObjectiveA simple method to investigate the autoantibodies combined with isotype antibodys identification.MethodsThe serum of patients with autoantibodies combined with isotype antibodys，to dilute the serum with normal saline，to observe the changes of serum and lineage cells responses，and to analyze the results of the reaction.ResultsThere was no significant difference of the responses of primary test serum with all the 10 lineage cells. Along with the increase of the dilution ratio of the serum，the intensity of the lineage cells decreased，and the degree of the decrease was different，aggregation of the antibody caused by the autoantibodys disappeared，and the agglutination pattern caused by the isotype antibodys is more clear. Identification of the isotype antibodys can be achieved by the pattern of lineage cells.ConclusionSerum times dilution method，compared with the previous autoantibodies absorption method is more quick and simple， but may cause low titer of alloantibodies undetected. Must be cautious.

Times dilution method，Autoantibodys，Isotype antibodys，Antibody identification

R446

A

1674-9316（2015）31-0140-02

10.3969/j.issn.1674-9316.2015.31.104

1 132013 吉林，吉林醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院

2 132000 吉林，中國人民解放軍93062部隊(duì)44分隊(duì)