甘 娜， 尹 飛， 彭 鏡， 吳麗文， 何 芳， 陳 晨

(1廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)教研室， 廣西 南寧 530021； 2中南大學(xué)湘雅醫(yī)院兒科，湖南 長沙 410008)

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IL-1β通過PI3K/Akt/mTOR途徑促進(jìn)神經(jīng)元活化*

甘 娜1, 2， 尹 飛2△， 彭 鏡2， 吳麗文2， 何 芳2， 陳 晨2

(1廣西衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)教研室， 廣西 南寧 530021；2中南大學(xué)湘雅醫(yī)院兒科，湖南 長沙 410008)

目的： 觀察白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)刺激對神經(jīng)元活化的影響。方法: 利用IL-1β刺激體外培養(yǎng)的原代神經(jīng)元，運用慢病毒轉(zhuǎn)染shRNA使PI3K的p85亞基(PI3K-p85)沉默、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)抑制劑雷帕霉素預(yù)處理阻斷mTOR、酪氨酸激酶家族抑制劑PP2抑制p85向IL-1受體I型(IL-1RI)募集等方式預(yù)處理神經(jīng)元，檢測PI3K-p85、與IL-1RI結(jié)合的PI3K-p85、p-Akt、p-p70S6K以及微管相關(guān)蛋白2(MAP2)在神經(jīng)元內(nèi)的變化及相互作用；利用FM4-64染色觀察各組神經(jīng)元突觸胞吞情況。結(jié)果: 利用IL-1β刺激體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元可增加細(xì)胞內(nèi)PI3K-p85、p-Akt、p-p70S6K、MAP2以及與IL-1RI結(jié)合的PI3K-p85的水平(P<0.05)，并且神經(jīng)元突觸的胞吞作用明顯加劇(P<0.05)；抑制PI3K-p85可以下調(diào)IL-1β所致的p-Akt、p-p70S6k和MAP2水平增加(P<0.05)，神經(jīng)元突觸的胞吞作用減弱(P<0.05)；抑制mTOR也能下調(diào)IL-1β所致的PI3K-p85、p-Akt、p-p70S6K和MAP2水平增加(P<0.05)，神經(jīng)元突觸的胞吞作用減弱(P<0.05)；抑制p85亞基與IL-1RI的結(jié)合也可以下調(diào)IL-1β所致的p-Akt、p-p70S6K和MAP2水平增加(P<0.05)。結(jié)論: 促炎因子IL-1β通過IL-1RI與PI3K-p85結(jié)合使PI3K-p85活化，進(jìn)而磷酸化Akt和mTOR下游物質(zhì)p70S6K，促進(jìn)神經(jīng)元突觸增生及活化，這可能是內(nèi)側(cè)顳葉癲癇向慢性化進(jìn)展的機(jī)制之一。

白細(xì)胞介素-1β； 哺乳動物雷帕霉素靶蛋白； 內(nèi)側(cè)顳葉癲癇； 神經(jīng)元活化

內(nèi)側(cè)顳葉癲癇(medial temporal lobe epilepsy，MTLE)發(fā)生及發(fā)展以漸進(jìn)和持續(xù)增加驚厥發(fā)作概率為特點[1]，其典型病理改變之一是神經(jīng)元活化至軸突發(fā)芽，顯微鏡下可觀察到海馬區(qū)苔蘚樣出芽，我們已經(jīng)在MTLE模型鼠慢性期海馬內(nèi)觀察到了明顯的苔蘚纖維增生[2]，而神經(jīng)元如何活化具體原因不明。

哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)是一個新型的絲/蘇氨酸蛋白激酶，該途徑在調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成和其它與生長有關(guān)的細(xì)胞過程有著廣泛的作用[3]。研究發(fā)現(xiàn)，mTOR與癲癇發(fā)病的關(guān)系密切。

促炎因子IL-1β被認(rèn)為與癲癇發(fā)生有密切相關(guān)性[4-5]。通過對局灶性皮質(zhì)發(fā)育不良患者以及癲癇持續(xù)狀態(tài)鼠模型的研究發(fā)現(xiàn)，兩者的大腦內(nèi)均觀察到IL-1β和mTOR的活化[6-7]；在顳葉癲癇動物模型以及藥物抵抗海馬硬化患者也可觀察到顯著的mTOR活化[8]；我們之前的研究中也證實MTLE病程中伴有IL-1β的表達(dá)變化[2]，但目前并沒有關(guān)于IL-1β與mTOR在MTLE發(fā)生過程中相關(guān)性的報道。本研究我們將嘗試揭示IL-1β及mTOR信號途徑在MTLE進(jìn)展中的作用。

材 料 和 方 法

1 神經(jīng)元的培養(yǎng)、分組及干預(yù)

無菌條件下取出生后48 h內(nèi)的新生SD鼠海馬，經(jīng)剪碎、胰酶消化、吹打制成單細(xì)胞懸液后，置于含10% FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基中，于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，4～6 h后棄培養(yǎng)基，換成Neurobasal+B27+Glutmax無血清混合培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。以后每周2～3次半量換液。

將原代神經(jīng)元接種于12孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)至第3天，按照吉凱生物公司慢病毒試劑盒說明書提供的操作流程進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染，感染復(fù)數(shù)100，進(jìn)行轉(zhuǎn)染，于倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率，并進(jìn)行下一步干預(yù)及檢測。

神經(jīng)元分組I為: ① 對照組(control組)：正常培養(yǎng)的神經(jīng)元，不進(jìn)行任何特殊干預(yù)；② IL-1β刺激組(IL-1β組)： 神經(jīng)元經(jīng)20 μg/L IL-1β刺激2 h；③ 慢病毒轉(zhuǎn)染+ IL-1β組[IL-1β+PI3K(-)組]：神經(jīng)元先經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染，細(xì)胞內(nèi)PI3K的p85亞基(PI3K-p85)表達(dá)及功能被干擾抑制后，再予20 μg/L IL-1β刺激2 h；④ IL-1β+雷帕霉素(rapamycin，RaPa)組(IL-1β+Rapa組)：90 μg/L rapamycin預(yù)處理24 h，最后予20 μg/L IL-1β刺激2 h ；⑤ 慢病毒轉(zhuǎn)染+rapamycin預(yù)處理+IL-1β組[IL-1β+PI3K(-)+Rapa組]：神經(jīng)元先經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染，再予90 μg/L rapamycin預(yù)處理24 h，最后予20 μg/L IL-1β刺激2 h。

分組II為：① 對照組(control組)：正常培養(yǎng)的神經(jīng)元，不進(jìn)行任何特殊干預(yù)；② IL-1β刺激組(IL-1β組)：神經(jīng)元經(jīng)20 μg/L IL-1β刺激2 h；③ 酪氨酸激酶家族抑制劑PP2預(yù)處理+IL-1β組(PP2+IL-1β)：神經(jīng)元經(jīng)10 mmol/L PP2干預(yù)2 h后，再予20 μg/L IL-1β刺激2 h。

2 主要實驗方法

2.1 Western blotting檢測神經(jīng)元內(nèi)PI3K-p85、p-Akt、磷酸化核糖體蛋白S6激酶(phosphorylation ribosomal protein S6 kinase, p-p70S6K)、微管相關(guān)蛋白 2(microtubule-associated protein)水平的變化 取分組I各組細(xì)胞總蛋白，以20 μg上樣量于聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，轉(zhuǎn)膜，封閉后分別與I抗PI3K-p85(1∶1 000，Abcam)、p-Akt(1∶1 000，Cell Signaling)、p-p70S6K(1∶250，Abcam)、MAP2(1∶1 000，Cell Signaling)混合，4 ℃孵育過夜，與適當(dāng)稀釋濃度的HRP標(biāo)記的相應(yīng)II抗(Jackson)室溫孵育1 h后ECL試劑發(fā)光、顯影和定影。以β-actin(1∶10 000，Sigma)為內(nèi)參照。VDS圖像分析系統(tǒng)對結(jié)果進(jìn)行分析，以各對照組表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)，其它組與之相比較。

2.2 免疫共沉淀(co-immunoprecipitation，Co-IP)檢測神經(jīng)元內(nèi)與白細(xì)胞介素-1受體Ⅰ(interleukin-1 receptor，IL-1RI)結(jié)合的PI3K-p85表達(dá)的變化 取分組Ⅱ各組細(xì)胞總蛋白，每個待測標(biāo)本取800 μg總量的蛋白提取液，以蛋白體積與IL-1RI抗體體積比50∶1向蛋白標(biāo)本中加入IL-1RI抗體(1∶50，Abcam)，及瓊脂糖珠，4 ℃ 搖床平搖過夜；孵育完畢，瓊脂糖珠經(jīng)洗滌后備用；將沉淀的瓊脂糖珠加入上樣緩沖液后，11 000 r/min 高速離心1 min，沸水浴5 min使蛋白變性，隨后馬上于冰上靜置。此后按Western blotting的流程將標(biāo)本上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、孵育抗體和顯影。

2.3 FM4-64染色觀察神經(jīng)元突觸胞吞情況 干預(yù)完畢的細(xì)胞，加入灌洗液及FM4-64(6.7 μmol/L)靜置5 min后，棄染液，予灌洗液持續(xù)灌洗10 min后，對細(xì)胞進(jìn)行觀察。在圖像記錄期間保持細(xì)胞接收1 mL/min灌洗液的持續(xù)灌注。在相同放大倍數(shù)的顯微鏡視野下，盡量選擇包含同樣數(shù)量細(xì)胞胞體的圖像觀察。被FM4-64標(biāo)記的直徑在0.1～0.6 μm之間并且熒光強(qiáng)度高于平均背景水平3個標(biāo)準(zhǔn)誤的亮點被記錄，選擇10個區(qū)域進(jìn)行計數(shù)分析。所用軟件為Image-Pro Plus 5.1，放大倍數(shù)為400倍。

3 統(tǒng)計學(xué)處理

所有實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。全部資料用Excel 7.0和SPSS 13.0軟件處理。

結(jié) 果

1 shRNA干擾PI3K-p85以及rapamycin對IL-1β所致神經(jīng)元內(nèi)PI3K-p85、p-Akt和p-p70S6K水平的影響

IL-1β能明顯增加神經(jīng)元內(nèi)PI3K-p85、p-Akt、p-p70S6K和MAP2的水平，與對照組比較，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；運用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)將shRNA干擾PI3K-p85后，IL-1β所致PI3K-p85、p-Akt、p-p70S6K和MAP2的蛋白水平表達(dá)增加均受抑制，與IL-1β組比較有顯著差異(P<0.05)；rapamycin能抑制IL-1β所致PI3K-p85、p-Akt、p-p70S6K和MAP2表達(dá)增加，與IL-1β組比較有顯著差異(P<0.05)；慢病毒轉(zhuǎn)染抑制PI3K-p85和rapamycin同時作用，能增強(qiáng)對IL-1β的抑制作用(P<0.05)，見圖1。

Figure 1.The protein levels of PI3K-p85, p-Akt， p-p70S6K and MAP2 in the neurons. *P<0.05 vs control group; △P<0.05 vs IL-1β group; □P<0.05 vs IL-1β+PI3K(-)+Rapa group.

2 shRNA干擾PI3K-p85以及rapamycin對IL-1β所致神經(jīng)元形態(tài)的影響

對照組神經(jīng)元發(fā)育成熟，突起交叉成網(wǎng)明顯，胞體豐滿光滑；IL-1β刺激可以使神經(jīng)元胞體聚集，突觸增粗變長、分支增多，突觸之間的接觸增多；而慢病毒轉(zhuǎn)染至PI3K-p85抑制以及rapamycin預(yù)處理細(xì)胞可以抑制IL-1β所致的神經(jīng)元突觸生長，并且以兩者共同作用的抑制效果最明顯，見圖2。

Figure 2.The morphological change of the nuerons after intervention observed under light microscope (×250). A: control group; B: IL-1β group; C: IL-1β+PI3K(-) group; D: IL-1β+Rapa group; E: IL-1β+PI3K(-)+Rapa group.

3 shRNA干擾PI3K-p85以及rapamycin對IL-1β所致神經(jīng)元胞吞的影響

經(jīng)FM4-64染色后，未經(jīng)處理的對照組可觀察到神經(jīng)元突觸部位有少量的胞吞小泡形成；IL-1β干預(yù)神經(jīng)元后，在神經(jīng)元的突觸部位胞吞小泡數(shù)量明顯增加；而PI3K-p85抑制以及rapamycin預(yù)處理都能減少IL-1β所致的神經(jīng)元的突觸部位胞吞小泡數(shù)量明顯增加，且以兩者共同作用的抑制效果最明顯，見圖3。

Figure 3.The endocytosis of the neurons (×400).

4 PP2抑制后IL-1β對神經(jīng)元p-Akt、p-P70S6K及MAP2的影響

利用PP2阻斷IL-1RI與PI3K-p85的結(jié)合后，IL-1β所致的神經(jīng)元內(nèi)p-Akt、p-p70S6K及MAP2的蛋白水平增加情況受抑制，與IL-1β組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，見圖4。

討 論

MTLE屬于癥狀性癲癇的范疇，其特點是在初次損傷和慢性自發(fā)發(fā)作之間有一個無驚厥發(fā)作的無癥狀期。我們此前的研究已證實，炎癥反應(yīng)促進(jìn)MTLE的發(fā)生發(fā)展，并且IL-1β起著關(guān)鍵作用[2]。

mTOR是一種存在于哺乳動物細(xì)胞中非典型的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶， p70S6k和蛋白質(zhì)翻譯起始因子eIF4E結(jié)合蛋白l(eIF4E binding protein 1，4EBP1)是其最直接的下游底物[9]。通過磷酸酸化p70S6k與4EBP1，mTOR調(diào)控細(xì)胞的存活、生長、增殖、分化、黏附、移行、自我更新和細(xì)胞周期等，被認(rèn)為是調(diào)節(jié)細(xì)胞存活、生長、增殖和分化的中心樞紐[10]。最新研究表明，mTOR信號通路與癲癇發(fā)生密切相關(guān)，從遺傳性癲癇到各種原因引起的獲得性癲癇，mTOR信號通路均被證實存在過度激活[11-12]。Rapamycin是mTOR特異性的抑制劑[13]。有研究報道，rapamycin還能減少癇性發(fā)作的次數(shù)，并且能阻止或逆轉(zhuǎn)導(dǎo)致癲癇發(fā)生的病理改變，達(dá)到“抗癲癇發(fā)生”的作用。本部分研究中，我們利用IL-1β刺激體外培養(yǎng)的原代神經(jīng)元發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)元內(nèi)p70S6k的磷酸化水平明顯增高，MAP2表達(dá)增加，神經(jīng)元突觸胞吞作用增強(qiáng)，提示IL-1β能激活mTOR，進(jìn)而活化神經(jīng)元。

PI3K/Akt是公認(rèn)的細(xì)胞內(nèi)經(jīng)典的重要信號途徑，參與分化、增殖、凋亡以及NF-κB的激活、糖原合成、糖酵解、葡萄糖轉(zhuǎn)運等多種細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[14]。對PI3K/Akt/mTOR途徑的整體認(rèn)識始于上世紀(jì)九十年代，當(dāng)PI3K及Akt被活化，mTOR隨之被激活，通過調(diào)節(jié)其下游的p70S6k和4EBP1管理基因編碼及蛋白合成。目前在多種腫瘤如小細(xì)胞肺癌[15]、胃癌[16]、T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病[17]、宮頸及子宮內(nèi)膜癌等的發(fā)生過程中，都觀察到該途徑相關(guān)蛋白編碼基因突變及異?；罨＝?，關(guān)于PI3K/Akt/mTOR途徑活化與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的相關(guān)性受到關(guān)注，Lee等[18]報道PI3K/Akt/mTOR途徑活化與半側(cè)巨腦綜合癥發(fā)病有關(guān)。創(chuàng)傷后癲癇模型中mTOR活化依賴于PI3K/Akt信號途徑[19]。在本部分實驗中，我們觀察到，利用IL-1β刺激體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元，發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元內(nèi)PI3K-p85、p-Akt、p70S6k和MAP2的蛋白水平增加，神經(jīng)元胞吞作用明顯增強(qiáng)，說明IL-1β激活mTOR、活化神經(jīng)元的同時，伴隨有PI3K及Akt的活化。而同時抑制PI3K-p85和mTOR，或者單獨抑制PI3K-p85，可阻斷IL-1β所致的前述變化；單獨抑制mTOR不能抑制IL-1β所致的PI3K-p85活化，由此可推斷，IL-1β通過PI3K/Akt/mTOR途徑促進(jìn)了海馬神經(jīng)元的活化。

進(jìn)一步對IL-1β與PI3K-p85之間的信號傳導(dǎo)方式的研究發(fā)現(xiàn)，利用酪氨酸激酶家族抑制劑PP2阻斷PI3K的p85亞基與IL-1R1的結(jié)合，神經(jīng)元內(nèi)Akt、p70S6K和MAP2的水平不因IL-1β刺激而增加，神經(jīng)元胞吞作用也減弱。Davis等[20]也報道，IL-1β刺激下丘腦神經(jīng)元時能活化Akt，且這種活化依賴于PI3K的亞基p85向膜上IL-1R1的募集。這說明IL-1β通過IL-1RI作用于PI3K的p85亞基，進(jìn)而激活PI3K/Akt/mTOR途徑，通過mTOR下游的p70S6k磷酸化，最終活化神經(jīng)元。這一結(jié)果對闡明炎癥與癲癇發(fā)生的相關(guān)性有重要意義。

[1] Raymont V, Salazar AM, Lipsky R, et al. Correlates of posttraumatic epilepsy 35 years following combat brain injury[J]. Neurology, 2010, 75(3):224-229.

[2] Gan N, Yang L, Omran A, et al. Myoloid-related protein 8, an endogenous ligand of Toll-like receptor 4, is involved in epileptogenesis of mesial temporal lobe epilepsy via activation of the nuclear factor-κB pathway in astrocytes[J].Mol Neurobiol, 2014, 49(1):337-351.

[3] Caron E, Ghosh S, Matsuoka Y, et al. A comprehensive map of the mTOR signaling network[J]. Mol Syst Biol, 2010, 6:453.

[4] Holtman L, van Vliet EA, Aronica E, et al. Blood plasma inflammation markers during epileptogenesis in post-status epilepticus rat model for temporal lobe epilepsy[J]. Epilepsia, 2013, 54(4):589-595.

[5] Behmanesh F, Ashrafzadeh F, Varasteh A, et al. Evaluation of interleukin 1beta in febrile convulsion[J]. Iran J Allergy Asthma Immunol, 2012, 11(4):336-339.

[6] Wang SJ, Bo QY, Zhao XH, et al. Resveratrol pre-treatment reduces early inflammatory responses induced by status epilepticus via mTOR signaling[J]. Brain Res, 2013, 1492:122-129.

[7] Iyer A, Zurolo E, Spliet WG, et al. Evaluation of the innate and adaptive immunity in type I and type II focal cortical dysplasias[J]. Epilepsia, 2010, 51(9):1763-1773.

[8] Sha LZ, Xing XL, Zhang D, et al. Mapping the spatio-temporal pattern of the mammalian target of rapamycin (mTOR) activation in temporal lobe epilepsy[J]. PLoS One, 2012, 7(6):e39152.

[9] Crino PB. mTOR: A pathogenic signaling pathway in developmental brain malformations[J]. Trends Mol Med, 2011, 17(12):734-742.

[10]Manning BD, Cantley LC. AKT/PKB signaling: navigating downstream[J]. Cell, 2007,129(7):1261-1274.

[11]Raffo E, Coppola A, Ono T, et al. A pulse rapamycin therapy for infantile spasms and associated cognitive decline[J]. Neurobiol Dis, 2011, 43(2): 322-329.

[12]Zeng LH, Rensing NR, Wong M. Developing antiepileptogenic drugs for acquired epilepsy: targeting the mammalian target of rapamycin (mTOR) pathway[J]. Mol Cell Pharmacol, 2009, 1(3):124-129.

[13]Sarbassov DD, Ali SM, Sengupta S, et al. Prolonged rapamycin treatment inhibits mTORC2 assembly and Akt/PKB[J]. Mol Cell, 2006, 22(2):159-168.

[14]王和峰，翟純剛，龐文會，等. PI3K/Akt/mTOR 信號通路在巨噬細(xì)胞自噬及動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定中的作用[J]. 中國病理生理雜志, 2013, 29(3): 390-397.

[15]Yamamoto H, Shigematsu H, Nomura M, et al. PIK3CA mutations and copy number gains in human lung cancers[J]. Cancer Res, 2008, 68(17):6913-6921.

[16]費洪榮, 趙 瑩, 王桂玲，等. PI3K/mTOR雙重抑制劑PF-04691502 誘導(dǎo)人胃癌SGC-7901 細(xì)胞凋亡[J]. 中國病理生理雜志, 2013, 29(11):1962-1965.

[17]Bressanin D, Evangelisti C, Ricci F, et al. Harnessing the PI3K/Akt/mTOR pathway in T-cell acute lymphoblastic leukemia: eliminating activity by targeting at different levels[J]. Oncotarget, 2012, 3(8):811-823.

[18]Lee JH, Huynh M, Silhavy JL, et al. De novo somatic mutations in components of the PI3K-AKT3-mTOR pathway cause hemimegalencephaly[J]. Nat Genet, 2012, 44(8):941-945.

[19]Berdichevsky Y, Dryer AM, Saponjian Y, et al. PI3K-Akt signaling activates mTOR-mediated epileptogenesis in organotypic hippocampal culture model of post-traumatic epilepsy[J]. J Neurosci, 2013, 33(21):9056-9067.

[20]Davis CN, Mann E, Behrens MM, et al. MyD88-depen-dent and -independent signaling by IL-1 in neurons probed by bifunctional Toll/IL-1 receptor domain/BB-loop mime-tics[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2006, 103(8): 2953-2958.

IL-1β stimulated neuron activationviaPI3K/Akt/mTOR pathway

GAN Na1, 2, YIN Fei2, PENG Jing2, WU Li-wen2, HE Fang2, CHEN Chen2

(1DepartmentofClinicalMedicine,GuangxiMedicalCollege,Nanning530021,China;2DepartmentofPediatrics,Xiang-yaHospital,CentralSouthUniversity,Changsha410008,China.E-mail:yf2323@hotmail.com)

AIM: To study the effect of interleukin-1β (IL-1β) on neuron activation during the process of medial temporal lobe epilepsy (MTLE).METHODS: IL-1β, rapamycin [an inhibitor of mammalian target of rapamycin (mTOR)]and lentiviral transfection to knockdownPI3K-p85 were used to pre-treat the neurons. The protein levels of PI3K-p85, p-Akt, p-p70S6K and MAP2 were detected and the relationship among the tested cytokines was analyzed. The neuron endocytosis was observed in each group. RESULTS: IL-1β increased the protein levels of PI3K-p85, p-Akt and p-p70S6K, up-regulated the expression of PI3K-p85 binding with IL-1RI in the neurons, and increased the neuron endocytosis compared with control group (P<0.05) . These processes were inhibited by rapamycin and silence of PI3K-p85 (P<0.05). Inhibition of the PI3K-p85 binding to IL-1RI decreased the protein levels of p-Akt, p-p70S6K and MAP2 which were increased by IL-1β stimulation (P<0.05). CONCLUSION: IL-1β activates PI3K-p85 by binding with IL-1RI to promote the activation and proliferation of neuron synapses via PI3K/Akt/mTOR signaling pathway, which might be one of the mechanisms in MTLE chronic progress.

Interleukin-1β； Mammalian target of rapamycin； Medial temporal lobe epilepsy; Neuron activation

1000- 4718(2015)03- 0397- 06

2014- 09- 05

2014- 11- 24

國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81171226；No.81100846)；湖南省博士后科研資助專項計劃(No. 2014RS4007)

△通訊作者 Tel: 0731-84327208; E-mail： yf2323@hotmail.com

R741.02

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.03.003