何義明，陸建榮，趙建華（南通市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇226300）

汽油漂浮集菌法在抗酸桿菌檢驗(yàn)中的應(yīng)用

何義明，陸建榮，趙建華
（南通市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇226300）

目的：提高抗酸桿菌痰涂片的檢出率，有助于對(duì)肺結(jié)核早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。方法：對(duì)43例肺結(jié)核患者的痰液同時(shí)采用直接涂片法和汽油漂浮集菌法檢測結(jié)核分枝桿菌。結(jié)果：直接涂片法陽性9例（20.9%），汽油漂浮集菌法檢測抗酸桿菌陽性29例（67.4%），兩者陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論：汽油漂浮集菌法檢測抗酸桿菌陽性率大大提高，方便、經(jīng)濟(jì)、快捷、敏感性高，值得推廣。

抗酸桿菌；漂浮集菌法；汽油；聚合酶鏈反應(yīng)

結(jié)核分枝桿菌可通過呼吸道、消化道或破損皮膚侵入易感機(jī)體，引起多種組織器官的結(jié)核病，其中以通過呼吸道引起的肺結(jié)核最多。

目前臨床上診斷肺結(jié)核及其療效觀察，仍把痰涂片找抗酸桿菌作為重要手段，也是預(yù)防工作的重點(diǎn)。這種方法對(duì)結(jié)核病早發(fā)現(xiàn)、早治療也起到至關(guān)重要的作用[1]，但直接痰涂片找結(jié)核分枝桿菌的陽性率低于30%[2]。結(jié)核菌特點(diǎn)是細(xì)胞壁脂質(zhì)含量高，占干重的60%，比重小。我科2011年5月—2014年8月對(duì)確診肺結(jié)核患者43例，根據(jù)相似相溶原理，采用汽油漂浮集菌法檢測結(jié)核分枝桿菌取得一定的效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　臨床資料

1.1一般資料確診肺結(jié)核患者43例，男38例（88.4%），女5例（11.6%），年齡26～88歲，平均54.9歲。所有入選病例均符合“肺結(jié)核診斷和治療標(biāo)準(zhǔn)”[3]。1.2方法（1）95%乙醇浸泡過夜、晾干的新玻片，0.4%KOH，90號(hào)汽油，50mL廣口玻璃瓶及配套橡皮塞，抗酸染液（BaSO公司），OLYMPUS顯微鏡。（2）取患者晨起后深咳痰10～20mL于廣口瓶中，按《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》推薦要求直接涂片1張。剩下的標(biāo)本，濃痰按1∶1比例加0.4%KOH，稀痰按約2∶1比例加0.4%KOH，加塞于高壓鍋內(nèi)消毒滅菌15分鐘。（3）待稍冷卻后，加入3～5滴90號(hào)汽油，墊一次性清潔塑料薄膜加塞，于振蕩器上振蕩10分鐘后加無菌鹽水注滿廣口瓶，使液體不溢出為宜。（4）將玻片覆蓋在廣口瓶口，使玻片接觸到瓶內(nèi)液面，瓶內(nèi)液面過低的可以在玻片邊滴加幾滴無菌鹽水。靜置30min?？焖俜D(zhuǎn)玻片，使漂浮物吸附在玻片。將玻片置于200℃烤箱中，15～20分鐘，玻片干燥。將兩組玻片按要求行抗酸染色、鏡檢。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.4結(jié)果判定按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》標(biāo)準(zhǔn)，油鏡下觀察2種方法的涂片，300油鏡視野內(nèi)見不到結(jié)核分枝桿菌時(shí)為陰性；300油鏡視野內(nèi)見到1～3條結(jié)核分枝桿菌時(shí)報(bào)具體條數(shù)；3～9條/100視野為+；1～9條/10視野為++，1～9條/視野為+++，≥10條/視野為++++[4]。結(jié)果：直接涂片法陽性9例（20.9%），汽油漂浮集菌法檢測抗酸桿菌陽性29例（67.4%），兩種方法陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

2　討論

目前肺結(jié)核治療已經(jīng)非常成熟，患者經(jīng)過科學(xué)合理的化療，多數(shù)可以治愈?，F(xiàn)有條件下獲得早期、及時(shí)、準(zhǔn)確地診斷，成為治療肺結(jié)核的關(guān)鍵。痰培養(yǎng)陽性一直被認(rèn)同為診斷肺結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn)。由于結(jié)核分枝桿菌生長緩慢，分裂一代需18～20小時(shí)。在改良羅氏培養(yǎng)基上，從接種到長出肉眼可見菌落需4～8周，從而增加患者住院時(shí)間，加大患者的費(fèi)用，增加了與之接觸的人群感染的風(fēng)險(xiǎn)，延誤患者的治療。

目前對(duì)結(jié)核病的診斷主要以接觸史、癥狀體征、結(jié)核菌素皮試、影像學(xué)、痰涂片抗酸染色、基因擴(kuò)增（PCR）等作為臨床確診或排除的標(biāo)準(zhǔn)，PCR法有成本高及假陽性率高的缺點(diǎn)[5]。傳統(tǒng)的直接涂片法具有快速簡便的優(yōu)點(diǎn)，但陽性率較低，致使大多數(shù)需要緊急治療的活動(dòng)性肺結(jié)核被稱之為結(jié)核菌陰性肺結(jié)核，不得不依靠其它診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診治。本組資料表明，汽油漂浮集菌陽性率比傳統(tǒng)的直接涂片法高，提示汽油漂浮集菌法較直接涂片法更易找到抗酸桿菌，與馮士勇的報(bào)道相仿[6]。

《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》中所介紹的直接涂片法，是把約0.1mL痰液均勻攤涂，使之變成10mm×20mm的薄膜。汽油漂浮集菌法把10～20mL的痰液中所含結(jié)核分枝桿菌，通過消化、汽油漂浮，富集在一張玻片上，因而敏感度顯著提高，能有效的減少漏診，幫助臨床及時(shí)確診，使患者得到及時(shí)治療，這對(duì)結(jié)核病的防治十分重要。且汽油漂浮集菌具有所需設(shè)備簡單、費(fèi)用低、報(bào)告時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)該檢測方法收集標(biāo)本的條件、標(biāo)本量、油鏡每個(gè)視野的實(shí)際面積均容易被“標(biāo)準(zhǔn)化”，所以是一種具有推廣價(jià)值的檢測方法。

[1]Phillips MS，Gaym an JE，Todd MW.ASHP guidelines on medication-use evaluation.American Journal of Health-System Pharmacists［J］.Am J Health Syst Pharm，1996，53（16）：1953-1955.

[2]趙雁林，姜廣路.中國結(jié)核病防治規(guī)劃——痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊［M］.北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2009：5-6.

[3]中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì).肺結(jié)核診斷和治療指南［J］.中華結(jié)核和呼吸雜志，2001，24（2）：70-72.

[4]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006.

[5]毛文捷，鄒盛華，張麗水，等.實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（18）：2273-2274.

[6]馮士勇.1274例結(jié)核患者痰涂片與培養(yǎng)結(jié)果分析［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（A02）：271-272.

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