李才島，韋 華

(海南正瑞醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司，海南 ?？?70311)

·藥物與臨床·

氣相色譜法測定甘氨酰胺鹽酸鹽中氯乙酸甲酯的含量

李才島，韋 華

(海南正瑞醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司，海南 ?？?70311)

目的建立測定甘氨酰胺鹽酸鹽中氯乙酸甲酯含量的氣相色譜法。方法采用氣相色譜法。色譜柱為DB-WAX毛細(xì)管柱(固定液：聚乙二醇；規(guī)格：30.0 m×0.25mm×0.25 μm)，柱溫為110℃，F(xiàn)ID檢測器溫度為250℃，進樣口溫度為200℃，分流比為10:1，頂空瓶平衡溫度為85℃，頂空瓶平衡時間為30min。結(jié)果氯乙酸甲酯檢測濃度的線性范圍為0.00800～0.12833mg/ml(r=0.9995)；平均回收率為100.0%(RSD=1.79%)。結(jié)論本方法操作簡便快捷，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于甘氨酰胺鹽酸鹽中氯乙酸甲酯的質(zhì)量控制。

甘氨酰胺鹽酸鹽；氯乙酸甲酯；氣相色譜法

甘氨酰胺鹽酸鹽是制備新型中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物奧拉西坦的重要原料，奧拉西坦具有激活、保護和促進受損神經(jīng)細(xì)胞功能恢復(fù)的特性，臨床用于治療輕中度血管性癡呆、老年性癡呆以及腦外傷等癥引起的記憶與智能障礙[1]。甘氨酰胺鹽酸鹽主要以氯乙酸甲酯為原料，與氨水進行胺化反應(yīng)制得[2]。氯乙酸甲酯別名為氯醋酸甲酯，是一種外觀透明易燃的液體，相對分子質(zhì)量108.53，熔點-33℃，密度1.236 g/m3(20/20℃)。氯乙酸甲酯是一類具有中等毒性的化學(xué)物質(zhì)，有很強的眼刺激性和中等的皮膚刺激性。急性毒性和亞慢性毒性實驗結(jié)果顯示氯乙酸甲酯對肝臟和腎臟均有毒性作用。2001年新澤西州健康服務(wù)部門指出氯乙酸甲酯的慢性毒性作用可能主要表現(xiàn)在致癌性和生殖毒性以及其他的長期慢性疾病如慢性支氣管炎等[3-4]。

目前文獻報道氯乙酸甲酯的測定方法均是以填充柱為色譜柱的氣相色譜法，而以毛細(xì)管柱為色譜柱的氣相色譜法未見文獻報道[5-6]。為了滿足實驗室檢測的需要，我們通過對不同極性的毛細(xì)管柱及分離條件進行優(yōu)選，建立了以聚乙二醇為固定液的毛細(xì)管柱為色譜柱，采用頂空進樣方式的氣相色譜法來測定甘氨酰胺鹽酸鹽中的氯乙酸甲酯，并對該方法進行了方法學(xué)驗證研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津GC-2014C型氣相色譜儀；氫火焰離子化檢測器；DK-3001A型頂空進樣器；LC-Solution色譜工作站；賽多利斯CPA225D型電子天平。

1.2 試藥 甘氨酰胺鹽酸鹽(濟南富創(chuàng)醫(yī)藥科技有限公司提供；批號：20110301)；氯乙酸甲酯(上海晶純試劑有限公司提供；批號：5489；含量：100.0%)；水為雙重蒸餾水。

2 色譜條件

色譜柱：DB-WAX毛細(xì)管柱(固定液：聚乙二醇；規(guī)格：30.0 m×0.25mm×0.25 μm)；柱溫：110℃；檢測器溫度：250℃；進樣口溫度：200℃；分流比：10:1；頂空瓶平衡溫度：85℃，頂空瓶平衡時間：30min。

3 試驗溶液的制備

對照品溶液的制備：取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液；精密量取5ml，置頂空瓶中，加蓋密封，作為對照品溶液。供試品溶液的制備：取甘氨酰胺鹽酸鹽1.0 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入5ml水溶解，加蓋密封，作為供試品溶液。

4 方法學(xué)研究

4.1 色譜柱的選擇 通過對不同極性的毛細(xì)管進行對比研究，從而選出最佳毛細(xì)管色譜柱。取對照品溶液，依照上述色譜條件進行測定。結(jié)果，DB-WAX毛細(xì)管柱具有保留時間較短，峰形對稱性好，拖尾因子小于1.5，理論板數(shù)高，色譜峰的響應(yīng)值適中等特點，故最終選擇用DB-WAX毛細(xì)管柱來測定氯乙酸甲酯，見表1。

表1 色譜柱的選擇試驗結(jié)果

4.2 空白溶劑干擾試驗 取空白溶劑(水)，依照上述色譜條件進行測定，記錄色譜圖。結(jié)果，在空白溶劑色譜圖中未有色譜峰出現(xiàn)，說明空白溶劑對測定無干擾。

4.3 系統(tǒng)適用性試驗 取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液；精密量取5ml，置頂空瓶中，加蓋密封，作為對照品溶液。依照上述色譜條件進行測定，連續(xù)測定5份。結(jié)果，取對照品溶液連續(xù)測定5次，所測得峰面積的RSD為0.95%，保留時間的RSD為0.03%，拖尾因子小于1.5，理論板數(shù)大于5000，說明該色譜條件符合系統(tǒng)適用性試驗要求。

4.4 線性與范圍試驗 取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.5mg的溶液，作為對照品貯備液；精密量取1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分別置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得相對濃度為20%、40%、60%、80%、100%、120%的線性溶液，依照上述色譜條件進行測定。結(jié)果以線性溶液的濃度C為橫坐標(biāo)(X)，峰面積A為縱坐標(biāo)(Y)，進行線性回歸，得回歸方程y=837619x-2649.4(r=0.9995)。結(jié)果，氯乙酸甲酯測定濃度在0.00800～0.12833mg/ml(定量限～120%)范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好，線性關(guān)系曲線圖見圖1。

4.5 定量限 取4.4項下20%線性溶液，采用稀釋法，逐級稀釋，依照上述色譜條件進行測定，當(dāng)記錄的色譜圖中主峰與基線噪音峰信號的強度比約為10:1時注入儀器的量，即為氯乙酸甲酯的定量限。結(jié)果，氯乙酸甲酯的定量限為8 μg。

圖1 氯乙酸甲酯的線性關(guān)系曲線圖

4.6 重復(fù)性試驗 取甘氨酰胺鹽酸鹽約1.0 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入水5ml溶解，搖勻，加蓋密封，作為供試品溶液，平行操作6份；另取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液，精密量取5ml，置頂空瓶，加蓋密封，作為對照品溶液。依照上述色譜條件進行測定，按外標(biāo)法以峰面積計算供試品中氯乙酸甲酯的含量。結(jié)果，重復(fù)測定本品6份，均未檢測到氯乙酸甲酯，說明該方法的測定重復(fù)性良好。

4.7 加樣回收率試驗 取氯乙酸甲酯50mg，精密稱定，置于100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液；精密量取4ml、5ml、6ml，分別置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得相對濃度為80%、100%、120%的回收率對照品溶液。取甘氨酰胺鹽酸鹽約1.0 g，精密稱定，置頂空瓶中，共九份，將其分成三組；往第一組樣品中加入80%回收率對照品溶液5ml，往第二組樣品中加入100%回收率對照品溶液5ml，往第三組樣品中加入120%回收率對照品溶液5ml，振搖使溶解后，加蓋密封，即得相對濃度為80%、100%、120%的回收率溶液；另取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的溶液，精密量取5ml，置頂空瓶，加蓋密封，作為對照品溶液，依照上述色譜條件進行測定，求出回收率。結(jié)果，氯乙酸甲酯的平均回收率為100.0%，RSD為1.79%，說明該方法的測定準(zhǔn)確度較高，見表2。

表2 回收率試驗結(jié)果

4.8 樣品測定 取本品約1.0 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入水5ml溶解，加蓋密封，作為供試品溶液；另取氯乙酸甲酯適量，精密稱定，加水定量稀釋制成每1ml中含0.1mg溶液，精密量取5ml，置頂空瓶中，加蓋密封，作為對照品溶液。照氣相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄VE)測定。以DB-WAX為色譜柱，柱溫為110℃；檢測器溫度為250℃；進樣口溫度為200℃；分流比為10:1；頂空瓶平衡溫度為85℃，平衡時間為30min。取供試品溶液和對照品溶液分別頂空進樣，記錄色譜圖；按外標(biāo)法以峰面積計算即得。結(jié)果，在該批次甘氨酰胺鹽酸鹽樣品中均未檢測到氯乙酸甲酯。

5 討 論

5.1 溶劑的選擇 毛細(xì)管頂空進樣法通常以水作為溶劑，根據(jù)甘氨酰胺鹽酸鹽的理化性質(zhì)可知本品在水中易溶，另外經(jīng)查閱相關(guān)文獻資料可知氯乙酸甲酯在水中的溶解度為：28 g/L(20℃)，可采用水作為本品測定的溶劑；另由空白溶劑干擾試驗結(jié)果可知水對本品的測定無干擾，因此采用水作為溶劑來配制試驗溶液。

5.2 色譜柱的選擇 氯乙酸甲酯為極性溶劑，根據(jù)相似相容的原理適宜采用極性或中極性的毛細(xì)管色譜柱進行測定，同時通過對不同極性的毛細(xì)管柱進行篩選，最終確定以聚乙二醇(或極性相近)為固定液的毛細(xì)管柱作為本品測定的色譜柱。

5.3 頂空條件的選擇 頂空平衡溫度一般應(yīng)低于溶解供試品所用溶劑的沸點10℃以下，能滿足檢測靈敏度即可；本品測定所用的溶劑為水，當(dāng)頂空平衡溫度設(shè)定為85℃時，所測得氯乙酸甲酯的峰面積符合測定要求，該方法的檢測靈敏度較高；頂空平衡時間一般為30～45min，以保證供試品溶液的氣-液兩相有足夠的時間達到平衡，同時頂空平衡時間通常不宜過長，如超過60min，可能引起頂空瓶的氣密性變差，導(dǎo)致定量準(zhǔn)確性的降低，當(dāng)頂空平衡時間設(shè)定為30min時，系統(tǒng)適用性及定量準(zhǔn)確性均符合要求。

綜上所述，本方法操作簡便、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、可用于甘氨酰胺鹽酸鹽中氯乙酸甲酯的質(zhì)量控制。

[1]鄭 輝,劉 娟,施巧月,等.奧拉西坦中間體的合成研究[J].化工中間體,2012,1:31-33.

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Content determination of methyl chloroacetate in glycinamide hydrochloride by gas chromatography.

LI Cai-dao,WEI Hua.Hainan Zhengrui Medical Technology Development Co.,Ltd.,Haikou570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo establish a gas chromatographic method for determining the content of methyl chloroacetate in glycinamide hydrochloride.MethodsGas chromatography(GC)was adopted with DB-WAX capillary column(Stationary liquid:polyethylene glycol;Specification:30.0 m×0.25mm×0.25 μm),column chromatography of110℃,FID detector temperature of250℃,injection port temperature of200℃,split ratio of10:1,equilibrium temperature of empty bottles of85℃,and equilibrium time of empty bottles of30minutes.ResultsThe linear range of methyl chloroacetate detected was0.00800～0.12833mg/ml(r=0.9995).The average recovery rate was100.0% (RSD=1.79%).ConclusionThis method is fast,easy to operate,accurate and reliable,which can be used in the quality control of methyl chloroacetate in glycinamide hydrochloride.

Glycinamide hydrochloride;Methyl chloroacetate;Gas chromatography(GC)

R971

C

1003—6350（2015）22—3394—03

2014-12-28)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.22.1230

李才島。E-mail：licaidao2005@163.com