董麗萍，伍趕球

（1.長沙醫(yī)學(xué)院人體解剖與組織胚胎學(xué)教研室，湖南 長沙410219；2.中南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室，湖南 長沙410013）

·論 著·

巢蛋白在人胚胎腎中的表達(dá)與分布

董麗萍1，2，伍趕球2

（1.長沙醫(yī)學(xué)院人體解剖與組織胚胎學(xué)教研室，湖南 長沙410219；2.中南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院組織學(xué)與胚胎學(xué)教研室，湖南 長沙410013）

目的通過研究不同時(shí)期人胚胎腎中巢蛋白的表達(dá)，探討巢蛋白在腎發(fā)育過程中的作用。方法取12例3～8個(gè)月人胚胎腎組織，常規(guī)石蠟切片，采用免疫組織化學(xué)法檢測巢蛋白在胚胎腎中的表達(dá)及分布。結(jié)果3～8個(gè)月人胚胎腎組織均有巢蛋白的表達(dá)。巢蛋白陽性細(xì)胞主要分布于腎小球、腎小囊壁層和腎間質(zhì)內(nèi)的微血管及毛細(xì)血管壁上，且其表達(dá)量隨胎齡的增加而減少，而在近端小管、遠(yuǎn)端小管的上皮中未發(fā)現(xiàn)陽性細(xì)胞。結(jié)論正常人胚腎中有巢蛋白的表達(dá)，隨著胎齡的增加，巢蛋白表達(dá)量下降，提示巢蛋白可能參與胚胎腎的發(fā)育。

胚胎；腎；巢蛋白；免疫組織化學(xué)

中間絲蛋白—巢蛋白(Nestin)最早由Hockfield和Mckay發(fā)現(xiàn)特異性地表達(dá)于神經(jīng)干細(xì)胞，隨后的研究發(fā)現(xiàn)巢蛋白不只局限于神經(jīng)干細(xì)胞，在血管內(nèi)皮祖細(xì)胞，胚胎時(shí)期的胰腺、肺[1]等多種組織中均有表達(dá)。最近，有研究發(fā)現(xiàn)在胚胎發(fā)育過程中巢蛋白過表達(dá)通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖促進(jìn)心和腦的發(fā)育[2]，這些結(jié)果顯示巢蛋白與胚胎發(fā)育密切相關(guān)。但是，巢蛋白在胚胎時(shí)期腎臟的表達(dá)情況鮮有報(bào)道，本研究用免疫組織化學(xué)方法觀察巢蛋白在人胎兒腎組織發(fā)育過程中的表達(dá)及其表達(dá)變化，分析巢蛋白在胎兒腎臟發(fā)育過程中的可能作用。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑 經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)，收集自愿終止妊娠經(jīng)藥物引產(chǎn)的3～8個(gè)月胎齡的人胚胎12例。胎齡判斷根據(jù)臨床資料，并通過測定胚胎的頂臀長、手長、足長和體重四組數(shù)據(jù)，參照《醫(yī)用組織學(xué)與胚胎學(xué)》胚胎齡的推算進(jìn)一步確認(rèn)胎齡。然后根據(jù)胎齡，將其分為發(fā)育早期(11～15周)、發(fā)育中期(18～23周)和發(fā)育晚期(26～32周)，每個(gè)時(shí)期各4例。鼠抗人巢蛋白單克隆抗體購自Sigma公司，DAB顯色劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。防脫載玻片購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 石蠟切片和免疫組織化學(xué)染色 取上述標(biāo)本的腎組織，于10%的甲醛溶液中固定24 h，行常規(guī)石蠟包埋，切成5 μm厚度的石蠟切片，防脫載玻片貼片，每個(gè)標(biāo)本取6片，用于免疫組織化學(xué)染色。免疫組化染色采用PV法，用磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗、二抗作陰性對照。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 用CCD為每張切片連續(xù)拍攝5個(gè)高倍視野，用圖像分析軟件(Image-Pro Plus，IPP)分析免疫組化圖片，測量每張照片的累積光密度和面積，計(jì)算出平均光密度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 胚胎發(fā)育第11～32周，胚胎腎組織中腎小球的體積由大變小，數(shù)量由少變多，巢蛋白的表達(dá)由強(qiáng)到弱(圖1)。胚胎第11～15周，巢蛋白在腎小球呈強(qiáng)陽性表達(dá)，此外，在腎小囊壁層的單層扁平上皮和微血管管壁上也有表達(dá)，在近端小管管壁上皮和遠(yuǎn)端小管管壁上皮沒有巢蛋白的陽性表達(dá)(圖2A、2B)。胚胎第18～23周，巢蛋白在腎小球和微血管管壁呈弱陽性表達(dá)(圖2C、2D)，胚胎第24～32周，巢蛋白在腎小球和微血管管壁的表達(dá)非常微弱(圖2E、2F)。

2.2 胚胎腎巢蛋白陽性表達(dá)平均光密度值比較 經(jīng)隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果顯示，胚胎腎組織中巢蛋白的表達(dá)量呈隨胎齡增加而下降的趨勢，發(fā)育早、中、晚期三組兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

圖1 巢蛋白在不同時(shí)期人胚胎腎組織的表達(dá)(PV法×40)

圖2 巢蛋白在不同時(shí)期人胚胎腎組織的表達(dá)(PV法×400)

注：a與發(fā)育中期組比較，P＜0.05；b與發(fā)育早期組比較，P＜0.05。

3 討 論

巢蛋白是第Ⅵ類中間絲蛋白，最初發(fā)現(xiàn)巢蛋白特異性表達(dá)于神經(jīng)干細(xì)胞。近年來，巢蛋白在胚胎發(fā)育和腫瘤發(fā)生過程中的表達(dá)及作用備受關(guān)注。大量的研究發(fā)現(xiàn)，巢蛋白在胚胎發(fā)育過程中的多種組織(如神經(jīng)組織、肺組織[1]、胰腺組織、舌肌[3]中表達(dá)，說明巢蛋白與胚胎發(fā)育密切相關(guān)。最新研究又發(fā)現(xiàn)，在胚胎發(fā)育過程中巢蛋白通過激活PI3K/Akt信號通路使細(xì)胞增殖而在心和腦的發(fā)育中起作用[2]，進(jìn)一步說明巢蛋白在胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮重要的作用。

本研究中，筆者利用免疫組織化學(xué)法檢測巢蛋白在胚胎時(shí)期腎組織中的表達(dá)，觀察到巢蛋白在胎腎組織的腎小球、腎小囊均有表達(dá)且有時(shí)空性，這些結(jié)果證實(shí)巢蛋白與腎臟的發(fā)育相關(guān)，為進(jìn)一步研究巢蛋白在胚胎發(fā)育過程中的作用及機(jī)制奠定了良好的基礎(chǔ)。此外，筆者還發(fā)現(xiàn)，巢蛋白在胚胎腎的表達(dá)也分布于腎組織內(nèi)的微血管壁上，其表達(dá)同樣隨著胎齡的增加而降低，提示巢蛋白與血管發(fā)生有關(guān)。先前有研究發(fā)現(xiàn)，巢蛋白在大腦組織內(nèi)的血管內(nèi)皮上表達(dá)，而且，不局限于新生的毛細(xì)血管，在直徑較大的小動脈和小靜脈內(nèi)皮細(xì)胞也有巢蛋白的表達(dá)[4]。巢蛋白除了在正常組織血管有表達(dá)之外，在腫瘤組織新生的血管內(nèi)皮細(xì)胞巢蛋白也出現(xiàn)高表達(dá)，提示巢蛋白的表達(dá)與腫瘤血管發(fā)生有關(guān)[5-6]。

[1]董麗萍,鄒 鷹,黃 河,等.巢蛋白在人胚胎肺中的表達(dá)[J].國際病理科學(xué)與臨床雜志,2011,31(6):483-485.

[2]Liu J,Ji X,Li Z,et al.Nestin overexpression promotes the embryonic development of heart and brain through the regulation of cell proliferation[J].Brain Research,2015,1610:1-11.

[3]劉學(xué)紅,張 泳.MAP-2和巢蛋白在人胚胎舌肌組織發(fā)育過程中的表達(dá)[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,33(1):135-137.

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Expression and distribution of nestin in human embryonic kidney.

DONG Li-ping1,2,WU Gan-qiu2.1.Department of Anatomy and Histoembryology,Changsha Medical University,Changsha410219,Hunan,CHINA;2.Department of Histology and Embryology,Xiangya School of Medicine,Central South University,Changsha410013,Hunan,CHINA

ObjectiveTo study the role of nestin in kidney development through the expression of nestin in human embryonic kidney of different development stage.MethodsEmbryonic kidney tissues of3～8 months were obtained and fixed in routine paraffin sections.Immunohistochemical assay was used to detect the expression and distribution of nestin in embryonic kidney.ResultsNestin was expressed in human embryonic kidneys of3～8 months. Nestin positive cells were mainly distributed in glomerulus,renal capsule,and renal interstitial capillaries,while no positive signals could be observed in renal tubules.Expression was decreased with the aging of embryonic kidney.ConclusionNestin was expressed in human embryonic kidney,and the expression was decreased with the developing of human embryonic kidney,which indicated that nestin might play a role in kidney development.

Embryo;Kidney;Nestin;Immunohistochemistry

R333.6

A

1003—6350（2015）20—2965—03

2015-04-23)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.20.1080

湖南省教育廳一般項(xiàng)目（編號：13C1113）；長沙醫(yī)學(xué)院院級課題（編號：KY201463）

伍趕球。E-mail：wuganqiu@163.com