付金玲，曹玉忠，梁 軍

(東莞市婦幼保健院皮膚科1、檢驗科2，廣東 東莞 523000)

TP-IgM-WB法診斷早期先天梅毒的價值

付金玲1，曹玉忠1，梁 軍2

(東莞市婦幼保健院皮膚科1、檢驗科2，廣東 東莞 523000)

目的 評價梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(TP-IgM-WB)在診斷早期先天梅毒中的作用。方法對92例梅毒孕婦及其所產(chǎn)93例(1例雙胞胎)新生兒血標(biāo)本行梅毒螺旋體明膠凝聚實驗(TPPA)、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR）檢測和TP-IgM-WB檢測，探討TP-IgM-WB在先天梅毒早期診斷中的價值。結(jié)果在梅毒孕婦所生的93例新生兒中，常規(guī)綜合方法早期診斷先天梅毒26例，TP-IgM-WB法診斷先天梅毒32例，6例TP-IgM-WB血清試驗陽性但常規(guī)綜合方法疑似病例經(jīng)18個月隨訪后最終確診為先天梅毒，兩種方法診斷率比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.031)。結(jié)論TP-IgM-WB用于診斷早期先天梅毒優(yōu)于常規(guī)綜合診斷法，值得臨床推廣。

先天梅毒；梅毒螺旋體蛋白印跡試驗；早期診斷

先天梅毒(Congenital syphilis)是指梅毒螺旋體(Treponema pallidum，TP)由母體經(jīng)過胎盤進(jìn)入胎兒血循環(huán)使胎兒感染而發(fā)生的梅毒，可引起胎兒流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或新生兒全身性感染。先天性梅毒大多癥狀不明顯，多為隱匿感染，更因母體內(nèi)抗體因素的影響與干擾，其臨床診斷缺乏準(zhǔn)確性，難度較大，常延誤治療時機。近年來，其發(fā)病率持續(xù)增高，逐年攀升，嚴(yán)重影響嬰幼兒身心健康，必須引起高度重視。早期診斷、及時治療，對改善新生兒先天性梅毒的預(yù)后具有極其重要的意義。目前國內(nèi)檢測先天梅毒方法很多，除常規(guī)診斷方法梅毒螺旋體明膠凝聚實驗(TPPA)、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(RPR)外，梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(Treponema pallidum IgM Western blot，TP-IgM-WB)已有報道[1-2]，并顯示出較高的特異性和敏感性。本文對92例梅毒孕婦及其所產(chǎn)93例(1例雙胞胎)新生兒血標(biāo)本分別行TPPA、RPR檢測和TP-IgM-WB檢測，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 在知情同意的前提下，連續(xù)性收集2010年6月至2013年12月東莞市婦幼保健院產(chǎn)科門診確診的110例梅毒孕婦，其中15例梅毒孕婦因胎兒宮內(nèi)停止發(fā)育、流產(chǎn)、胎兒畸形等而終止妊娠，3例失訪，完成隨訪的共有92例梅毒孕婦及其所產(chǎn)93例新生兒(1例雙胞胎)。

1.2 梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照美國疾病預(yù)防與控制中心(CDC)診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。符合下列之一者即可診斷：如母親患有梅毒，患兒有早期先天梅毒的臨床表現(xiàn)或者血清快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(RPR)滴度高于母親4倍以上；或者符合可疑診斷標(biāo)準(zhǔn)者，雖然患兒血清學(xué)陽性，RPR滴度高于母親，但增高小于2倍或以下，孕母確診為梅毒且妊娠期間未接受過正規(guī)治療或未治療或口服紅霉素治療的孕母所生嬰兒梅毒血清學(xué)陽性并伴有梅毒臨床表現(xiàn)者。

1.3 標(biāo)本采集 抽取梅毒孕婦產(chǎn)前靜脈血及梅毒孕婦所生新生兒(1～30 d內(nèi))靜脈血，并分離血清送檢，血清標(biāo)本置于-20℃冰箱低溫保存。

1.4 試劑與檢驗方法 TPPA試劑由日本富士瑞必歐株式會社生產(chǎn)。RPR試劑由上海榮盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。TP抗體蛋白印跡試劑盒由德國歐蒙醫(yī)學(xué)實驗室診斷試劑有限公司生產(chǎn)。以上試劑均在有效期內(nèi)使用并嚴(yán)格按試劑說明書操作。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)匯總與統(tǒng)計分析。兩組間診斷先天梅毒陽性例數(shù)經(jīng)配對四格表資料的χ2檢驗(McNemar)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 常規(guī)方法檢測結(jié)果 在梅毒孕婦所產(chǎn)93例新生兒中，用TPPA、RPR檢測確診的早期先天梅毒為26例，其中7例有先天梅毒典型臨床表現(xiàn)，全身皮膚出現(xiàn)皺褶，四肢軀干鱗屑性斑丘疹、水皰，掌跖輕度脫皮，口周皸裂等皮膚癥狀；2例出現(xiàn)肝脾腫大及骨膜炎。18例新生兒RPR滴度≥母親RPR滴度的4倍。

2.2 TP-IgM-WB檢測結(jié)果 在梅毒孕婦所產(chǎn)93例新生兒中，用TP-IgM-WB診斷陽性例數(shù)為32例。6例TP-IgM-WB血清試驗陽性但常規(guī)綜合方法疑似患者經(jīng)18個月隨訪后最終確診為先天梅毒。TP-IgM-WB顯色條帶分析顯示，19例IgM抗體47 kD和17 kD條帶均為陽性，13例47 kD和15 kD條帶為陽性。32例TP-IgM-WB陽性患兒RPR試驗滴度＞1:8者占81.25%(26/32)，見表1。

表1 32例TP-IgM-WB陽性血清RPR滴度

2.3 TP-IgM-WB與常規(guī)綜合診斷比較 常規(guī)綜合方法早期診斷先天梅毒26例，TP-IgM-WB法診斷先天梅毒32例，兩組間診斷先天梅毒陽性例數(shù)經(jīng)配對四格表資料的χ2檢驗(McNemar)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.031，P＜0.05)，TP-IgM-WB對先天梅毒的早期診斷優(yōu)于常規(guī)綜合診斷方法。

3 討論

先天梅毒的診斷目前主要還是依靠患兒的病史、臨床表現(xiàn)及實驗室檢查來綜合判斷。對于有早期胎傳梅毒的臨床表現(xiàn)或血清RPR滴度高于母親4倍以上的患兒診斷不難，但在臨床上很多梅毒患兒出生時并無早期胎傳梅毒的臨床表現(xiàn)，且梅毒血清學(xué)檢查RPR滴度與產(chǎn)婦分娩時相同或更低，確定診斷比較困難，容易導(dǎo)致漏診。與此同時，常規(guī)梅毒血清抗體檢測方法如TPPA、RPR均檢測IgG抗體，此類抗體能通過胎盤，進(jìn)入胎兒體內(nèi)，因此在新生兒檢測到RPR及TPPA陽性還不能確認(rèn)是否患有先天梅毒。對這些可疑病例，在生后0、2、4和6個月監(jiān)測血清學(xué)變化，6個月時如呈陰性，且無先天梅毒的臨床表現(xiàn)，可除外梅毒感染；6個月后若RPR未轉(zhuǎn)陰，始終維持在低滴度水平，應(yīng)每3個月檢測TPPA至產(chǎn)后18個月，若TPPA轉(zhuǎn)陰，可排除感染。這一漫長的隨訪過程容易導(dǎo)致先天梅毒患兒錯失最佳的治療時間，部分失訪患兒也錯失了正規(guī)的梅毒治療。所以對無癥狀新生兒先天梅毒的早期診斷方法的研究尤為重要。

梅毒螺旋體像其他微生物一樣，進(jìn)入機體后首先刺激淋巴細(xì)胞產(chǎn)生IgM抗體，然后是IgG和IgA抗體。IgM相對分子質(zhì)量為900 000，一般不能通過胎盤等生理屏障組織，只有胎兒在宮內(nèi)受到梅毒感染，在新生兒血清中才會出現(xiàn)特異性TP-IgM抗體，且TP-IgM抗體治愈后可逐漸消退。治療后血清TP-IgM抗體仍為陽性，則提示體內(nèi)可能殘存梅毒螺旋體；治療后血清TP-IgM抗體陰性的患者，隨訪時TP-IgM抗體轉(zhuǎn)為陽性，表明患者再次感染梅毒[4]。梅毒孕婦的IgG抗體可穿透胎盤滋養(yǎng)層，進(jìn)入到胎兒的血液循環(huán)中去。因此，對常規(guī)梅毒血清學(xué)檢測法TPPA及RPR檢測出的抗體很難判定是否來自胎兒本身。故患兒特異性TP-IgM抗體陽性是診斷先天梅毒的有力證據(jù)[5-6]。

蛋白印跡是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種先進(jìn)的檢測技術(shù)，根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合來檢測復(fù)雜樣品中某種蛋白的免疫生化技術(shù)。試驗中，血清抗體與固相分離的天然或重組抗原結(jié)合后，通過與酶標(biāo)記的IgG/IgM二抗結(jié)合以及酶標(biāo)二抗與底物的顯色反應(yīng)而顯示抗原特異性條帶，特異性條帶的數(shù)目和深淺作為判斷檢測結(jié)果，檢測梅毒特異性多肽抗原不需特殊的儀器設(shè)備，觀察結(jié)果不帶有主觀性。其他的IgM檢測法需先分離血清IgG抗體，以防止IgG與IgM抗體競爭特異性抗原結(jié)合位點，導(dǎo)致IgM抗體的假陽性，WB法則不受IgG抗體存在的影響，對其他非梅毒螺旋體標(biāo)本沒有生物假陽性[7-8]。因此使用蛋白印跡試驗檢測TP-IgM抗體，具有較高的敏感度和特異度。

本研究中筆者分別對92例梅毒孕婦及其所產(chǎn)93例(1例雙胞胎)新生兒血標(biāo)本行TPPA、RPR檢測和TP-IgM-WB檢測，結(jié)果顯示，常規(guī)綜合方法早期診斷先天梅毒26例，TP-IgM-WB早期診斷先天梅毒32例，6例TP-IgM-WB血清試驗陽性但常規(guī)綜合方法疑似病例經(jīng)18個月隨訪后最終確診為先天梅毒。結(jié)果表明,TP-IgM-WB法用于先天梅毒診斷有較高的敏感性和特異性；與常規(guī)TPPA及RPR檢測方法相比，TP-IgM-WB方法假陽性率和誤診率更低，準(zhǔn)確率更高。提示在早期診斷先天梅毒中，TP-IgM-WB法具有高于常規(guī)診斷方法的價值，值得臨床上大力推廣應(yīng)用。新生兒先天梅毒TP-IgM-WB顯色條帶分析顯示，19例IgM抗體47 kD和17 kD條帶均為陽性，13例47kD和15 kD條帶為陽性。證明天然螺旋體抗原中47 kD和17 kD抗原量和免疫原性可能最強，提示在TP-IgM-WB診斷試劑的開發(fā)中，可選擇47 kD和17 kD抗原用于臨床診斷。

[1]賴慶方,農(nóng)紹漢,林育權(quán).特異性IgM抗體檢測在新生兒先天性梅毒診斷中的臨床意義[J].吉林醫(yī)學(xué),2014,35(18):3918-3919.

[2]魯東平,付 敏,魯菊香,等.新生兒期先天梅毒75例及其生母血清學(xué)檢測結(jié)果分析[J].中國皮膚性病學(xué)雜志,2013,27(6): 591-592.

[3]Workowski KA,Berman S,Centers for Disease Control and Prevention(CDC).Sexually transmitted diseases treatment guidelines[J]. MMWR Recomm Rep,2010,59(RR-12):1-110.

[4]McMillan A,Young H.Qualitative and quantitative aspects of the serological diagnosis of early syphilis[J].Int J STD AIDS.2008,19 (9):620-624．

[5]Herremans T,Kortbeek L,Notermans DW.A review of diagnostic tests for congenital syphilis in newborns[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2010,29(5):495-501．

[6]Jebbari H,Simms I,Conti S,et al.Variations in the epidemiology of primary,secondary and early latent syphilis,England and Wales: 1999 to 2008[J].Sex Transm Infect,2011,87(3):191-198.

[7]郭 玲,趙梅桂,李 海,等.免疫印跡技術(shù)在診斷新生兒先天梅毒中的意義[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2010,37(13):2438-2439．

[8]曹 誼,金一鳴,董 麗,等.免疫印跡法檢測梅毒抗體及評價[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011,21(24):5329-5330.

Diagnostic value of TP-IgM-WB for early congenital syphilis.

FU Jin-ling1,CAO Yu-zhong1,LIANG Jun2. Department of Dermatology1,Department of Clinical Laboratory2,Maternal and Child Health Hospital of Dongguan City,Dongguan 523000,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo evaluate the role of TP-IgM-WB for the diagnosis of early congenital syphilis.MethodsTraditional comprehensive approach(TPPA and RPR)and TP-IgM-WB were used to test the sera of 93 neonates born by 92 pregnant women with syphilis.The value of TP-IgM-WB in the diagnosis of early congenital syphilis was investigated.ResultsIn the 93 neonates,26 were diagnosed as early congenital syphilis by traditional comprehensive approach(TPPA and RPR),and 32 were diagnosed as early congenital syphilis by TP-IgM-WB.The 6 suspected cases by traditional comprehensive approach with positive serological response to TP-IgM-WB were confirmed as early congenital syphilis finally after 18 months of follow-up.There was a significant difference between the two methods(χ2=0.031).ConclusionThe TP-IgM-WB as a diagnostic method for early congenital syphilis is superior to traditional comprehensive approach,which deserves clinical expansion.

Congenital syphilis;TP-IgM-WB;Early diagnosis

R759.1

A

1003—6350（2015）05—0682—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.05.0244

2014-08-03)

東莞市科技局資助項目（編號：201310515000105）

付金玲。E-mail：fujl589@163.com