潘強(qiáng)龍 周成林 楊先知 謝國良 崔大偉

[摘要] 目的 探討ABI 7500與TL 988熒光定量PCR儀之間的性能差異。 方法 參照EP9-A2文件中的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，兩臺儀器分別對5種不同濃度的甲型流感病毒陽性質(zhì)控品進(jìn)行檢測，每個(gè)濃度測量20次，比對兩種儀器的精密度、靈敏度，并評價(jià)兩臺儀器結(jié)果一致性。 結(jié)果 精密度：TL 988的變異系數(shù)（CV）從0.68%到1.52%，ABI 7500的CV從1.93%到2.69%。兩臺儀器在檢測高濃度的甲型流感病毒DNA時(shí)（107、106、105 copies/mL）差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），檢測低濃度的病毒DNA時(shí)（104、103 copies/mL）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。靈敏度：兩種儀器檢測濃度103 copies/mL時(shí)，TL 988陽性檢出率為100%，ABI 7500檢出率為0。兩種儀器檢測數(shù)據(jù)相關(guān)性良好（r=0.998）。結(jié)論 熒光定量TL 988 PCR儀器的性能（精密度和靈敏度）比ABI 7500好。

[關(guān)鍵詞] 熒光定量PCR儀；比對；精密度；靈敏度；一致性

[中圖分類號] R446.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2015）02-0155-02

根據(jù)ISO 15189要求，實(shí)驗(yàn)室需要定期對使用的儀器進(jìn)行性能評估，當(dāng)實(shí)驗(yàn)室使用兩套及以上檢測系統(tǒng)檢測同一項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)比對數(shù)據(jù)表明其檢測結(jié)果一致性?，F(xiàn)筆者按EP9-A2文件要求[1-5]，對美國ABI 7500和國產(chǎn)TL 988的主要性能指標(biāo)進(jìn)行評估，以了解結(jié)果差異性與一致性，從而尋找國產(chǎn)儀器可替代國外產(chǎn)品的可能性。

1材料與方法

1.1材料

（1）主要儀器：ABI 7500和TL 988熒光定量PCR儀、生物安全柜、低溫高速離心機(jī)、超凈工作臺等。

（2）試劑：上海之江生物科技有限公司提供的甲型流感病毒熒光定量PCR檢測試劑盒。檢測標(biāo)本：陽性定量質(zhì)控品（含甲型流感病毒DNA的濃度為107 copies/mL），用free H2O準(zhǔn)確10倍比稀釋成106、105、104、103 copies/mL，充分混勻，分裝250 μL到1.5 mL的eppendorf管中備用。

1.2 方法

1.2.1 精密度測定 按NCCLS標(biāo)準(zhǔn)，分別在ABI 7500和TL 988熒光定量PCR儀上同時(shí)檢測107、106、105、104 copies/mL四種濃度的陽性質(zhì)控品。各濃度均測定20次，計(jì)算其均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。

1.2.2 靈敏度測定 分別取107、106、105、104、103 copies/mL五個(gè)濃度標(biāo)本在兩臺PCR儀上進(jìn)行檢測，根據(jù)陽性檢測率分析其靈敏度。

1.2.3相關(guān)性檢測 通過重復(fù)性試驗(yàn)中的數(shù)據(jù)，分別取107、106、105、104 copies/mL濃度的檢測結(jié)果的平均值，分析兩臺儀器的數(shù)據(jù)相關(guān)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)分析處理。檢查是否有離群值，對數(shù)據(jù)進(jìn)行初步檢查，兩變量間線性關(guān)系分析采用直線相關(guān)及回歸分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩臺儀器精密度結(jié)果比較

TL 988 和ABI 7500兩臺熒光PCR儀器的精密度結(jié)果比較，見表1。可以看出TL 988測得各濃度數(shù)據(jù)的變異系數(shù)（CV）從0.68%到1.52%，ABI 7500測得各濃度數(shù)據(jù)的變異系數(shù)（CV）是從1.93%到2.69%，變異系數(shù)（CV）均在要求范圍內(nèi)（<10%），數(shù)據(jù)表明ABI 7500的精密度略低于TL 988（P>0.05）。此外，關(guān)于相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品檢測結(jié)果的Ct值和標(biāo)準(zhǔn)差分析，顯示兩臺PCR儀的批內(nèi)重復(fù)性均良好。

表1 兩臺儀器精密度結(jié)果比較

2.2兩臺儀器靈敏度結(jié)果比較

甲型流感病毒DNA的濃度在107、106、105、104 copies/mL時(shí)，兩臺儀器的陽性檢出率均為100%，當(dāng)濃度為103 copies/mL時(shí)，TL 988檢出率依然為100%，但ABI 7500的檢出率為0。靈敏度方面，TL988要比ABI 7500能檢測到更低濃度，即靈敏度相對較高（P<0.05）。

2.3 相關(guān)性比較

兩臺儀器對各標(biāo)本的甲型流感病毒DNA的含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明，兩臺儀器測定值的回歸直線方程為：y=1.2364x-5.2097（r=0.998），具有良好的直線相關(guān)和回歸關(guān)系。

3 討論

在2013年全球高科技產(chǎn)業(yè)值中，精密儀器醫(yī)療設(shè)備約為3萬億美金，占13%。而精密醫(yī)療設(shè)備基本上被國外所壟斷。醫(yī)療設(shè)備是現(xiàn)代醫(yī)療業(yè)發(fā)展的必備手段，所以需要加快精密儀器的國有化進(jìn)程，降低成本，推動民族品牌企業(yè)不斷發(fā)展，降低老百姓就醫(yī)費(fèi)用成本。

熒光定量PCR技術(shù)是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)監(jiān)控反應(yīng)過程。與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比，實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)具有特異性高等優(yōu)點(diǎn)[6-8]，在檢測甲型流感病毒上具有很好的準(zhǔn)確性。

另外實(shí)驗(yàn)室中不應(yīng)使用同一種檢測系統(tǒng)進(jìn)行臨床檢驗(yàn)，以避免儀器出現(xiàn)系統(tǒng)性的檢測錯(cuò)誤[9-12]。對樣本進(jìn)行檢測時(shí)，一般只做一次檢驗(yàn)便要發(fā)出報(bào)告，這便要求儀器檢測系統(tǒng)具有良好的可重復(fù)性，因此對儀器的精密度具有很高的要求[12-14]。實(shí)驗(yàn)室中，當(dāng)樣本在低拷貝狀態(tài)下也要求有很高的檢出率。

兩臺儀器在試驗(yàn)前，室內(nèi)質(zhì)控品的檢測結(jié)果均可靠，具有較好的重復(fù)性，此次試驗(yàn)中，兩臺儀器未出現(xiàn)故障，穩(wěn)定性良好，操作方便，檢測快速。對 ABI 7500熒光定量PCR儀在重復(fù)性、線性、靈敏度上與TL 988進(jìn)行比較，結(jié)果顯示兩臺 PCR儀的批內(nèi)批間重復(fù)性好， CV均在要求范圍內(nèi)，線性良好。ABI 7500在精密度和靈敏度上明顯略遜于TL 988，可能與本次試驗(yàn)中所用試劑與國產(chǎn)TL 988更配套，致使TL 988在本次試驗(yàn)中表現(xiàn)優(yōu)異。兩臺儀器測定值比較，r=0.998，表明兩臺儀器具有良好的直線相關(guān)和回歸關(guān)系。說明ABI 7500與TL988測定甲型流感病毒的結(jié)果具有可比性，而國產(chǎn)TL 988 PCR儀能較好地服務(wù)于臨床。

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（收稿日期：2014-07-17）