代尚，寧淑芳，黃俊淇，駱成飄，謝雨萱，韋常宏，利基林，張力圖

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，南寧530021)

肝細(xì)胞肝癌組織中CD90表達(dá)變化及意義

代尚，寧淑芳，黃俊淇，駱成飄，謝雨萱，韋常宏，利基林，張力圖

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，南寧530021)

目的 觀察肝細(xì)胞肝癌(HCC)組織中腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物CD90的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法 采用免疫組化法檢測60例HCC組織(HCC組)、60例癌旁組織(癌旁組)及60例正常肝臟組織(對照組)中的CD90，分析其表達(dá)與HCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 CD90陽性表達(dá)率HCC組為76.7%(46/60)、癌旁組為48.3%(29/60)、對照組為0，3組組間兩兩比較，P均<0.01。CD90表達(dá)與HCC患者的性別、民族、有無門靜脈瘤栓、包膜是否完整、TMN分期、病理分級有關(guān)(P均≤0.05)，與HCC患者的年齡、腫瘤大小、甲胎蛋白高低、乙肝病毒是否陽性無關(guān)(P均>0.05)。結(jié)論 CD90在HCC組織及癌旁組織中高表達(dá)，HCC組織中表達(dá)更高；癌組織中CD90表達(dá)有助于HCC患者預(yù)后的判斷，可為患者進(jìn)行個體化診斷治療提供參考。

肝腫瘤；肝細(xì)胞肝癌；干細(xì)胞標(biāo)記物；CD90；預(yù)后

原發(fā)性肝癌病死率位居癌癥中的第3位[1]，其中肝細(xì)胞肝癌(HCC)占原發(fā)性肝癌的85%～95%[2～3]。研究發(fā)現(xiàn)，HCC中40%由始祖細(xì)胞及干細(xì)胞分化而來，并且在HCC進(jìn)展中起到關(guān)鍵作用[3,4]。在眾多干細(xì)胞標(biāo)記物中，CD90是HCC非常重要的抗原標(biāo)記物。CD90是一種錨定于糖基磷脂酰肌醇的糖蛋白，其可在T細(xì)胞、胸腺細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞中表達(dá)[5,6]。CD90分子作為一個重要的調(diào)節(jié)器，在細(xì)胞內(nèi)以及細(xì)胞間的交互、凋亡、黏附以及轉(zhuǎn)移等方面起到相當(dāng)大的作用[7]。2014年6～10月，我們觀察了HCC組織中CD90的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床治療 收集2012年1月～2013年1月廣西腫瘤醫(yī)院肝膽外科病區(qū)住院并行肝癌切除術(shù)的HCC患者60例，男51例，女9例；年齡28～78歲，平均51.8歲；均為首診肝癌患者，術(shù)前未行任何相關(guān)治療；術(shù)中收集患者HCC(HCC組)及癌旁組織(癌旁組)各60份。同時取60例肝外傷患者的正常肝臟組織作為對照組。

1.2 方法

1.2.1 CD90檢測方法 將各組織石蠟標(biāo)本切片，恒溫烘箱烤片；依次脫蠟，梯度乙醇脫水，高壓抗原修復(fù)；滴加3%過氧化氫，滴加一抗 4 ℃過夜；滴加二抗，DAB顯色；上鏡觀察到染色滿意為止，自來水沖洗終止染色。蘇木素染色3 min，自來水沖洗；1%鹽酸乙醇適度分化，溫水返藍(lán)；晾干組織切片，封片。CD90陽性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)呈黃色或者深黃色。每張切片400倍下隨機(jī)選擇5個視野，每個視野選擇100個細(xì)胞激，計算陽性細(xì)胞百分率。根據(jù)參考文獻(xiàn)來對實驗結(jié)果進(jìn)行判斷[8]，根據(jù)每張切片的著色輕重程度分為沒有著色、輕度著色、中度著色以及重度著色，分別計為0、1、2、3分；根據(jù)著色的范圍大小來分為無著色、著色面積≤33%、著色面積33%～66%以及著色面積>67%，分別計為0、1、2、3分。兩者得分相加≥3分判定CD90陽性表達(dá)。

1.2.2 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以率表示，比較用χ2檢驗。P≤0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組織中CD90陽性表達(dá)率比較 CD90陽性表達(dá)率HCC組為76.7%(46/60)、癌旁組為48.3%(29/60)、對照組為0，3組組間兩兩比較，P均<0.01。

2.2 CD90表達(dá)與HCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見表1。

3 討論

干細(xì)胞是一類沒有特定功能的未成熟細(xì)胞，能夠分化成多種類型，并且能夠保持自我更新的能力。它們在胚胎形成時期最為活躍，也因此形成了不同的人體組織。成人干細(xì)胞存在于人體已經(jīng)分化的組織中，現(xiàn)在我們已經(jīng)可以辨別出起源于干細(xì)胞所有的細(xì)胞類型。成人干細(xì)胞絕大多數(shù)存在于骨髓中，但最新研究認(rèn)為干細(xì)胞也可存在于實質(zhì)器官的腫瘤組織中。很多年前，研究人員就已經(jīng)提出了腫瘤干細(xì)胞存在的假設(shè)[9,10]。腫瘤干細(xì)胞可能起源于突變的正常干細(xì)胞，或者來源于分化出來的已獲得某些干細(xì)胞特性的腫瘤細(xì)胞。我們知道絕大多數(shù)HCC起源于慢性肝疾病或肝硬化，小細(xì)胞異常增生、增生結(jié)節(jié)的出現(xiàn)和早期HCC被認(rèn)為是HCC的發(fā)病進(jìn)程，然而HCC潛在的進(jìn)展分化等分子機(jī)制仍不夠明確[11,12]。小細(xì)胞異常增生具有染色體的缺失與獲得現(xiàn)象，這種現(xiàn)象可存在于肝癌細(xì)胞或其臨近癌旁部位，但不存在于周圍正常的肝實質(zhì)細(xì)胞中[13]。本研究結(jié)果顯示，CD90陽性表達(dá)率HCC組為76.7%、癌旁組為48.3%、對照組為0，3組組間兩兩比較具有統(tǒng)計學(xué)意義。在HCC早期除了外顯子基因的改變，端?？s短在細(xì)胞克隆擴(kuò)增中也起到了相當(dāng)重要的作用。盡管我們已經(jīng)了解到正常的肝臟干細(xì)胞在肝臟形成和修復(fù)中起主要作用，但我們現(xiàn)在認(rèn)為HCC的損傷來源于肝實質(zhì)細(xì)胞和肝祖細(xì)胞的異常分化[14]。肝干/祖細(xì)胞具有多項潛在分化與自我修復(fù)的能力，人類肝臟的干細(xì)胞存在于新生兒和胎兒的肝臟導(dǎo)管區(qū)。不管是成人還是兒童，干細(xì)胞在肝臟中都能保持相對穩(wěn)定的數(shù)量和比例[15]。CD90的陽性結(jié)果已經(jīng)證實其在肝臟的干細(xì)胞中是有意義的，CD90陽性干細(xì)胞在癌變中起到了最基本的作用。在患者的病態(tài)肝臟中，CD90表達(dá)在肝臟干細(xì)胞、肝成纖維細(xì)胞、肌成纖維細(xì)胞和腫瘤基質(zhì)(CAFs)以及一小部分腫瘤干細(xì)胞中。這些新出現(xiàn)的報道可以說明肝癌組織中是存在肝癌干細(xì)胞的，印證了正常肝祖細(xì)胞提高自我修復(fù)等級出現(xiàn)可作為肝癌發(fā)生前的重大事件。有報道證實，起源于肝祖細(xì)胞的肝癌與沒有任何干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)的HCC相比，更有侵襲性[16,17]。

值得注意的是，CD90的上調(diào)并不是HCC特有的，在其他肝腫瘤樣本中也有相似的表現(xiàn)，說明CD90可能參與了肝臟腫瘤的形成過程。相關(guān)文獻(xiàn)已經(jīng)證實，CD90作為一個潛在的腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物在人類肝癌癌前病變中起到了關(guān)鍵作用[16,18]。肝癌發(fā)生的過程是最具代表性的混合型損傷如小細(xì)胞異常增生，它提高了HCC進(jìn)展的風(fēng)險[19]。有這樣一種假設(shè)認(rèn)為，肝硬化使HCC加重。未經(jīng)歷過任何癌前病變直接發(fā)生的HCC也在考慮范圍內(nèi)，只是這種現(xiàn)象極其罕見。另一方面，關(guān)于HCC的細(xì)胞起源，有文獻(xiàn)闡明低分化的HCC來自干細(xì)胞，高分化的HCC來自成熟的肝細(xì)胞[1,20]。將之前的研究歸納一下，我們完全得出這樣一個結(jié)論，那就是低分化的HCC要比高分化HCC更容易著色。本文研究對于病理分期與CD90表達(dá)相關(guān)性的結(jié)果同樣支持這一結(jié)論。

在對干細(xì)胞生物學(xué)和腫瘤干細(xì)胞的不斷研究中，逐步意識到癌癥可能是一種干細(xì)胞疾病。腫瘤干細(xì)胞的散播可能是腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的根本原因。通過對相關(guān)患者臨床資料的分析，我們不難得出在臨床分期、包膜完整度以及門脈瘤栓是否存在這幾個方面與CD90陽性表達(dá)相關(guān)，可以間接推測HCC患者CD90陽性表達(dá)與不良預(yù)后的關(guān)系。這可以使我們對腫瘤干細(xì)胞在HCC進(jìn)展和控制上面提供更為深刻的理解。本實驗開展于廣西壯族自治區(qū)，屬于少數(shù)民族區(qū)域。研究選取了壯族與漢族，結(jié)果發(fā)現(xiàn)漢族CD90陽性表達(dá)率顯著高于壯族，具有統(tǒng)計學(xué)意義；這在以往的文獻(xiàn)中鮮有報道，在某些程度上可以將此作為一個切入點(diǎn)進(jìn)行深入探討。

綜上所述，CD90在HCC組織及癌旁組織中高表達(dá)，HCC組織中表達(dá)更高；癌組織中CD90表達(dá)有助于HCC患者預(yù)后的判斷，可為患者進(jìn)行個體化診斷治提供參考。

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Expression and clinical significance of CD90in hepatocellular carcinoma

DAIShang,NINGShu-fang,HUANGJun-qi,LUOCheng-piao,XIEYu-xuan,WEIChang-hong,LIJi-lin,ZHANGLi-tu

(TheAffiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Objective To explore the expression and clinical significance of CD90in hepatocellular carcinoma. Methods The expression of CD90in cancer tissues, para-carcinoma tissues and normal liver tissues were detected by immunohistochemical method, and to analyze the significance. Results The positive expression rate of CD90was 76.7% (46/60) in HCC group, 48.3%(29/60)in paraneoplastic group, 0 in normal group; there were significant differences among three groups (allP<0.01). The expression of CD90in HCC tissues was correlated with gender, ethnicity, portal vein tumor thrombus, envelope integrity, clinical and pathological staging (allP<0.05); which was not associated with age, tumor size, AFP values and the expression of hepatitis B (allP<0.05). Conclusion The expression of CD90increased in cancer tissues and para-carcinoma tissues, especially in cancer tissues, which maight be closely related to a poor prognosis of patients with liver cancer.

liver tumor; hepatocellular carcinoma; stem cell markers; CD90; prognosis

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃基金資助項目(桂科攻1355005-3-10)；廣西醫(yī)科大學(xué)青年科學(xué)基金資助項目(GXMUYSF201215)。

代尚(1987-)，男，碩士研究生，研究方向為腫瘤分子診斷。E-mail： meteorite1987@126.com

張力圖(1966-)，男，主任技師，研究方向為腫瘤分子診斷。E-mail： zhanglitu@gmail.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.08.007

R735.7

A

1002-266X(2015)08-0021-03

2014-12-06)