杜虹韋 趙欣蕾 韓德強(qiáng) 姚 琳

（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院·哈爾濱 150036）

黃芪有補(bǔ)氣升陽(yáng)、益衛(wèi)固表、利尿消腫、托毒生肌之功效，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列于上品,是常用補(bǔ)益藥之一，植物資源極為豐富[1]。傳統(tǒng)上應(yīng)用于保肝、防治糖尿病、保護(hù)心肌、抗血小板聚集等方面。近年來(lái)，相關(guān)研究表明黃芪具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性。黃芪用途廣泛，多年來(lái)人們對(duì)黃芪的化學(xué)成分，藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)行大量的研究，特別是近幾年來(lái)對(duì)黃芪抗腫瘤作用成為研究焦點(diǎn)[2]。本實(shí)驗(yàn)選擇小鼠S180實(shí)體瘤作為動(dòng)物移植腫瘤模型，采用不同的提取部分，觀察各部分對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物移植腫瘤的抑瘤率，以確定黃芪抗腫瘤活性的有效部位。

1 材料

1.1 藥材來(lái)源

黃芪藥材Astragalus membranaceus(Fisch.)采集于黑龍江省依蘭縣，經(jīng)鑒定為豆科植物蒙古黃芪的干燥根。

1.2 動(dòng)物與瘤株

小鼠，昆明種，SPF級(jí)，體重20g左右，雌雄各半，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)GLP實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。肉瘤S180細(xì)胞株,由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)提供，以腹水型傳代。環(huán)磷酰胺由上海華聯(lián)制藥有限公司提供。

1.3 儀器設(shè)備

AG135型電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備廠)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)用藥的制備

取干燥的黃芪藥材100g，粉碎至適宜粒度，用1000mL70%乙醇滲漉提取，提取液減壓濃縮至無(wú)醇味，加水分散至100mL制成水混懸液。分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分取有機(jī)層，得到4個(gè)部分:Ⅰ(石油醚層)、Ⅱ(乙酸乙酯層)、Ⅲ(正丁醇層)、Ⅳ(水層部分)。將提取的各個(gè)部分分別減壓回收溶劑至干，加適量95% 乙醇溶解，再加蒸餾水稀釋(乙醇終濃度≤1.5%)制成實(shí)驗(yàn)所需濃度的混懸液。

2.2 小鼠S180實(shí)體瘤模型的建立

在無(wú)菌條件下將S180腹水癌細(xì)胞放入到無(wú)菌容器內(nèi),冰浴中保存。另取少量腹水, 置于加有肝素的試管中,觀察細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞計(jì)數(shù)用。癌細(xì)胞數(shù)大于97%方可使用。腹水用滅菌后的生理鹽水作稀釋, 使細(xì)胞數(shù)為2×107個(gè)/ml，配制成S180 瘤細(xì)胞懸浮液，吹打混勻。于小鼠右前肢腋窩下注射S180細(xì)胞懸0.2mL[3]。24h后將小鼠隨機(jī)分組。

2.3 動(dòng)物分組及給藥方法

將接種腫瘤的昆明小鼠在成瘤后按照瘤體大小隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組以及樣品Ⅰ-Ⅳ給藥試驗(yàn)組。小鼠S180模型制備成功之后，陽(yáng)性對(duì)照組于ip環(huán)磷酰胺1次，給藥劑量為100mg/kg，其他試驗(yàn)組于同一時(shí)間ig給藥1次，試驗(yàn)組黃芪醇提物不同極性部位給藥劑量為21g/kg/d(以生藥量計(jì))，空白對(duì)照組給予相同劑量的空白溶劑，連續(xù)給藥10d。于最后1次給藥24h后將小鼠稱重后脫臼處死，剝?nèi)「鹘M動(dòng)物的腫瘤，稱質(zhì)量，每組計(jì)算10個(gè)鼠腫瘤的平均質(zhì)量，比較治療組與對(duì)照組的平均瘤質(zhì)量，最后計(jì)算各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抑瘤率[4、5]。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以x±s表示，采用方差分析和t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

黃芪提取物對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明黃芪提取物樣品Ⅲ(正丁醇層萃取物)對(duì)小鼠移植S180 實(shí)體瘤具有明顯的抑制作用，其中正丁醇萃取物組，平均抑瘤率為65.91%，結(jié)果見(jiàn)表1。其他提取部位對(duì)小鼠移植S180實(shí)體瘤影響不顯著。以上結(jié)果表明黃芪70%乙醇提取物的正丁醇萃取物具有良好的抗腫瘤活性。

表1 黃芪提取物對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響(±s，n = 10).

表1 黃芪提取物對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響(±s，n = 10).

注:與對(duì)照組比較*P ＜ 0. 05

組別 平均瘤重 抑瘤率%對(duì)照組 1.71 ± 0.43 0陽(yáng)性組 0.46 ± 0.11 83.94樣品Ⅰ 1.28 ± 0.45 44.20樣品Ⅱ 1.56 ± 0.69 49.18樣品Ⅲ 0.77 ± 0.17* 65.91樣品Ⅳ 1.19 ± 0.37 53.94

4 小結(jié)

黃芪作為一種天然抗腫瘤藥物確實(shí)值得人們進(jìn)一步研究和利用。本實(shí)驗(yàn)以S180實(shí)體瘤小鼠為動(dòng)物模型，以抑瘤率為考察指標(biāo)，對(duì)黃芪70%乙醇提取物的不同溶劑萃取部位:石油醚萃取部分、乙酸乙酯萃取部分、正丁醇萃取部分以及水層部分分別進(jìn)行了抗腫瘤活性篩選。將接種腫瘤的昆明小鼠在成瘤后按照瘤體大小隨機(jī)分組，陽(yáng)性對(duì)照組ip環(huán)磷酰胺，給藥劑量為100 mg/kg，其他試驗(yàn)組于同一時(shí)間ig給藥，每天1次，給藥劑量按生藥量計(jì)為20g/kg，空白對(duì)照組給予相同劑量的空白溶劑，連續(xù)給藥10d。結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芪提取物能明顯抑制小鼠S180實(shí)體瘤生長(zhǎng)，其中正丁醇萃取物組，平均抑瘤率為65.91%。正丁醇萃取部分抗腫瘤活性較強(qiáng)，為黃芪抗腫瘤有效部位。

[1]Lu S, Chen KJ, Yang QY, Sun HR. Progress in the research of Radix Astragali in treating chronic heart failure:Effective ingredients, dose-effect relationship and adverse reaction. Chin J Integr Med. 2011;17(6):473-7.

[2]Tang D, He B, Zheng ZG, Wang RS, Gu F, Duan TT, Cheng HQ, Zhu Q. Inhibitory Effects of Two Major Isoflavonoids in Radix Astragali on High Glucose-Induced Mesangial Cells Proliferation and AGEs-Induced Endothelial Cells Apoptosis. Planta Med. 2011;77(7):729-32.

[3]楊淑文，崔喬.5種靈芝硒多糖抑制小鼠 S180肉瘤生長(zhǎng)作用的比較研究. 遼寧師范大學(xué)學(xué)報(bào)( 自然科學(xué)版).2010,9(33).

[4]何照范, 張迪清. 保健食品化學(xué)及其檢測(cè)技術(shù)[M].北京: 中國(guó)輕工業(yè)出版社, 1999: 83.

[5]鄭建仙. 功能性食品[M].北京: 中國(guó)輕工業(yè)出版社,2002:188 -190.