變應(yīng)性鼻炎患者組織及血液中的白介素-25表達(dá)和意義

徐麗1, 關(guān)兵1, 張俊中1, 王瑩2

(1. 江蘇省蘇北人民醫(yī)院 耳鼻咽喉頭頸外科, 江蘇 揚(yáng)州, 225000, 2. 揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院, 江蘇 揚(yáng)州, 225001)

關(guān)鍵詞:白細(xì)胞介素-25; 變應(yīng)性鼻炎; 免疫組織化學(xué)

IL-25又稱IL-17E, 是IL-17家族成員之一，為一種廣泛前炎性因子，具有多種生物學(xué)特性，可刺激多種來源的細(xì)胞系表達(dá)IL-6及IL-8等前炎癥因子和粒細(xì)胞集落刺激因子等造血因子，同時(shí)也可促進(jìn)Th2類細(xì)胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)的產(chǎn)生，介導(dǎo)Th2免疫應(yīng)答，并在嗜酸粒細(xì)胞趨化過程中起著重要作用[1]。變應(yīng)性鼻炎是耳鼻喉科常見病，易反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響病人生活質(zhì)量。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道變應(yīng)性鼻炎發(fā)病率高達(dá)12%～30%。實(shí)驗(yàn)證實(shí), IL-25與支氣管哮喘疾病有密切相關(guān)性，變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘由于解剖連續(xù)性，為同一氣道疾病，變應(yīng)性鼻炎與支氣管哮喘在發(fā)病機(jī)制方面相似，有許多共同因子參與疾病發(fā)生并影響免疫應(yīng)答和炎癥過程。

1資料與方法

1.1　一般資料

收集2012年1月—2013年2月江蘇省蘇北人民醫(yī)院耳鼻咽喉科住院行手術(shù)治療的變應(yīng)性鼻炎合并鼻中隔偏曲及單純鼻中隔偏曲患者63例，年齡20～62歲，平均(30.6士10)歲，其中男32例，女31例。變應(yīng)性鼻炎組患者分別按照變應(yīng)性鼻炎(2009武夷山標(biāo)準(zhǔn))診斷標(biāo)準(zhǔn)納入。單純鼻中隔偏曲矯正的病人為正常對(duì)照組。全部病人治療前3周均未用抗炎藥、抗組胺及皮質(zhì)類固醇激素等治療，常規(guī)行內(nèi)窺鏡檢查了解黏膜有無蒼白水腫、有無鼻息肉?；颊吆炇鹬橥鈺?，并通過倫理審核。其中變應(yīng)性鼻炎組33例，正常對(duì)照組30例。

1.2　標(biāo)本及取材

變應(yīng)性鼻炎組：收集患者術(shù)前空腹靜脈血液標(biāo)本,術(shù)中在鼻內(nèi)窺鏡下鼻中隔偏曲矯正后取患者部分下鼻甲黏膜組織；正常對(duì)照組：收集患者術(shù)前空腹靜脈血液標(biāo)本,術(shù)中鼻內(nèi)窺鏡下取鼻中隔偏曲矯正術(shù)患者部分下鼻甲黏膜組織。標(biāo)本常規(guī)制成石蠟塊保存。血標(biāo)本，室溫凝固1 h，2 000 r/min 離心15 min, 收集血清，置-20 ℃冷凍保存。

1.3　組織及血清中IL-25的檢測表達(dá)及檢測

以S-P免疫組織化學(xué)法檢測標(biāo)本組織中IL-25的表達(dá)。IL-25陽性表達(dá)呈棕褐色,在400倍光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞，取平均值為該標(biāo)本的IL-25陽性細(xì)胞數(shù)/HP。以ELISA法檢測血清中IL-25含量。IL-25定量酶聯(lián)檢測試劑盒(購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，將酶標(biāo)板放入酶標(biāo)儀測光密度值，選擇450 nm光進(jìn)行比色，采取數(shù)據(jù)。

2結(jié)果

免疫組化染色片上所有染色背景清晰，陽性表達(dá)呈棕褐色，在變應(yīng)性鼻炎鼻黏膜下層浸潤的炎性細(xì)胞中表達(dá)顯著，間質(zhì)中腺腔內(nèi)和血管周圍炎細(xì)胞有不同程度表達(dá)，變應(yīng)性鼻炎中上皮層少量表達(dá)。IL-25在對(duì)正常照組中表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)少或幾乎不表達(dá)。變應(yīng)性鼻炎患者組陽性細(xì)胞數(shù)為(15.94±9.03)/HP, 正常對(duì)照組陽性細(xì)胞數(shù)為(4.19±2.54)/HP。變應(yīng)性鼻炎患者組血清IL-25含量為(227.71±139.37) pg/mL，正常對(duì)照組IL-25 含量為(98.68±52.06) pg/mL, 2組組織間IL-25陽性細(xì)胞表達(dá)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01), 2組血清中IL-25含量表達(dá)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

3討論

IL-25是Lee等[2]首先報(bào)道命名為IL-17E,為IL-17家族的新成員,同時(shí)是Fort等[3]發(fā)現(xiàn)報(bào)道的由Th2細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，其結(jié)構(gòu)與IL-17 存在相似的細(xì)胞因子, 在NCBI表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行了BLAST搜索, 找到一段與IL-17有顯著同源性的EST序列, 通過反向遺傳學(xué)的方法，克隆了IL-25 的基因。人的IL-25基因全長為3987 bp, 染色體位于14q11.2，其中有2個(gè)外顯子和1個(gè)內(nèi)含子。成熟的IL-25是一種分泌性糖蛋白，為同源二聚體。

IL-25是極其重要前炎性因子，與多種臨床疾病發(fā)生發(fā)展有著密切相關(guān)性，目前研究發(fā)現(xiàn)IL-25具有多種生物學(xué)功能，尤其可以多方面調(diào)節(jié)黏膜免疫，促進(jìn)Th2細(xì)胞分化，促進(jìn)免疫應(yīng)答反應(yīng),還能夠影響Thl7細(xì)胞的分化并調(diào)節(jié)自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展[4]。最近國外學(xué)者研究確定有兩種細(xì)胞因子IL-25和胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)能夠啟動(dòng)Th2型過敏反應(yīng)，IL-25不僅是Th2反應(yīng)增強(qiáng)劑，更為Th2反應(yīng)引發(fā)劑[5]。

國內(nèi)外多個(gè)學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)IL-25這個(gè)細(xì)胞因子主要是影響IL-4、IL-5與IL-13等Th2類細(xì)胞因子的表達(dá)和活化信號(hào)通路，參與免疫疾病的發(fā)生發(fā)展。國外學(xué)者Fort等[3]實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，被IL-25處理組小鼠除了IL-13、IL-5、IL-4表達(dá)增加外，同時(shí)發(fā)現(xiàn)其血EOS增多，血清IgE水平增高。肺組織的組織切片發(fā)現(xiàn)上皮細(xì)胞增生肥大、EOS及單核細(xì)胞浸潤、黏液產(chǎn)生過多。Tamachi等[6]在其研究中證實(shí)經(jīng)變應(yīng)原吸入而致敏的小鼠肺組織中發(fā)現(xiàn)lL-25mRNA的表達(dá)。用slL-25R中和IL-25后減少了EOS及CD4+T細(xì)胞向氣道內(nèi)募集。Ballantyne等[7]制備了IL-25單克隆抗體,中和封閉IL-25，有效抑制了哮喘模型小鼠的氣管高反應(yīng)性(AHR)。這些實(shí)驗(yàn)證實(shí)了IL-25與支氣管哮喘疾病有密切相關(guān)性，支氣管哮喘具有嗜酸性粒細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞氣道浸潤、黏液分泌增多、氣道重塑及高反應(yīng)性等特征，是由Th2細(xì)胞及其細(xì)胞因子IL-13、IL-5和IL-4誘導(dǎo)的一種免疫炎癥，是呼吸系統(tǒng)的常見病和多發(fā)病。變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘由于解剖連續(xù)性，為同一氣道疾病，變應(yīng)性鼻炎與支氣管哮喘在發(fā)病機(jī)制方面相似，有許多共同因子參與疾病發(fā)生并影響免疫應(yīng)答和炎癥過程[8-10]。

本研究中發(fā)現(xiàn), IL-25在變應(yīng)性鼻炎鼻黏膜下層浸潤的炎性細(xì)胞中表達(dá)顯著，間質(zhì)中腺腔內(nèi)和血管周圍炎細(xì)胞有不同程度表達(dá)，上皮層見少量表達(dá)，IL-25在正常下鼻甲對(duì)照組表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)少或幾乎不表達(dá)。變應(yīng)性鼻炎組血清中IL-25含量明顯高于正常對(duì)照組的血清含量(P<0.05)。近年來對(duì)變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制研究有了一系列進(jìn)展，認(rèn)為其發(fā)病機(jī)制為變態(tài)反應(yīng), 與免疫功能紊亂有關(guān)。最新研究表明Th1/Th2/Th17的失衡是免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。變應(yīng)性鼻炎是由Th2細(xì)胞及其細(xì)胞因子IL-4、IL-5和IL-13誘導(dǎo)的一種免疫炎癥，作為一種免疫變態(tài)反應(yīng)疾病，許多細(xì)胞因子參與其發(fā)病過程，因此對(duì)這些細(xì)胞因子的研究已成為研究該疾病的重要方向，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了IL-25參與變應(yīng)性鼻炎發(fā)病過程。IL-25在變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生與進(jìn)展中起重要作用。

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通信作者:張俊中

收稿日期:2015-05-23

中圖分類號(hào):R 765.21

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

文章編號(hào):1672-2353(2015)21-202-02DOI: 10.7619/jcmp.201521079