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        直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)法在臨床血液檢驗(yàn)中的應(yīng)用探討

        2015-04-01 05:38:42賀春連湖南省隆回縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科湖南隆回422200
        吉林醫(yī)學(xué) 2015年17期
        關(guān)鍵詞:方法

        賀春連 (湖南省隆回縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖南 隆回 422200)

        抗菌藥物的發(fā)明和應(yīng)用,使得感染性疾病的治療進(jìn)入了一個劃時代的階段[1-2],但是近年來,由于抗生素的廣泛和不規(guī)范使用,導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性不斷提高,新的抗菌藥物的研發(fā)速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)跟不上細(xì)菌耐藥性的發(fā)展速度[3],細(xì)菌的耐藥性已成為臨床上治療感染性疾病的棘手問題,而且增加了患者的醫(yī)療費(fèi)用。因此,如何選擇合適的、快速有效的細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)方法,對于正確掌握細(xì)菌耐藥性的發(fā)展趨勢,指導(dǎo)臨床合理用藥及制定防治策略非常重要,對于挽救患者生命具有重要的意義。目前,臨床檢驗(yàn)中常用的細(xì)菌鑒定方法有:鏡檢法、直接藥敏試驗(yàn)法、常規(guī)檢驗(yàn)法、血清凝集試驗(yàn)法等[4],我科自2013年4月~2014年4月,隨機(jī)選擇420份血液標(biāo)本對直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)方法進(jìn)行了應(yīng)用探討,現(xiàn)報告如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料:本研究血液培養(yǎng)的標(biāo)本均來自我院2013年4月~2014年4月間,因發(fā)熱并(或)伴有全身感染癥狀在我院住院治療,且均排除血液系統(tǒng)疾病和凝血功能障礙的患者,隨機(jī)選擇420例患者,在無菌條件下,于發(fā)熱初初期或高峰期抽取血培養(yǎng)標(biāo)本,毎例患者采集靜脈血20 ml,冷藏后盡快送檢。

        1.2 方法:將每份樣本同時分別應(yīng)用常規(guī)檢測法進(jìn)行細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)和通過Bactec9240生化自動血培養(yǎng)儀直接進(jìn)行細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn),并分成相應(yīng)的常規(guī)細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)組(常規(guī)檢測法組)和直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)組(直接法組),然后根據(jù)兩組試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評價和分析。

        1.2.1 直接法組:將臨床血培養(yǎng)標(biāo)本接種置Bactec9240型生化自動血培養(yǎng)儀對其進(jìn)行自動培養(yǎng)及檢測,當(dāng)培養(yǎng)儀自動報警時,提示血液樣本檢測呈陽性,有細(xì)菌生長,然后用無菌注射器快速抽取10 ml陽性樣品,注入無菌試管,以1 500 r/min,離心5~10 min,收集上清液,再以3 000 r/min,離心15~20 min,最后取其沉淀,用無菌生理鹽水洗滌兩次后收集細(xì)菌懸液,取20μl懸液涂片,行革蘭染色后鏡檢:①如果鏡檢為革蘭氏陽性菌(G+)且鏡下細(xì)菌呈鏈狀,則使用濃度為MH+5%的羊血板作初步藥敏試驗(yàn);②根據(jù)鏡檢結(jié)果選擇合適的觸酶或氧化酶且將菌液濃度調(diào)整至6.9×108cfu/L后,將其接種至NCH21或PC11綜合板上,用微生物分析儀對其進(jìn)行細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)。其他一般接種選用MH平板,且向平板內(nèi)接種1~2滴懸液,并用無菌拭子均勻涂抹于平板上,貼上藥敏紙片。根據(jù)2005NCCLSI標(biāo)準(zhǔn),對陽性樣品的敏感性、中度敏感性、耐藥性進(jìn)行判斷[5]。記錄最終檢驗(yàn)結(jié)果報告所需時間。

        1.2.2 常規(guī)檢測法組:將所選陽性血液樣本分別接種在巧克力平板、麥康凱平板及血平板上,在溫度為35℃、濃度為5%的二氧化碳下孵育18~24 h后,取出菌落涂片,對其進(jìn)行革蘭染色鏡檢,然后根據(jù)鏡檢結(jié)果選擇相應(yīng)的觸酶或氧化酶進(jìn)行試驗(yàn),使用URITEST-3000生物鑒定儀對其進(jìn)行鑒定,及進(jìn)行藥敏試驗(yàn)[2]。記錄最終檢驗(yàn)結(jié)果報告所需時間。

        1.3 統(tǒng)計學(xué)處理:所得數(shù)據(jù)均采用SPSS13.00軟件包進(jìn)行統(tǒng)計處理,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較進(jìn)行t檢驗(yàn),等級資料采用u檢驗(yàn),計數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn),P﹤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩種檢測方法藥敏試驗(yàn)符合率:兩種檢測方法藥敏試驗(yàn)結(jié)果示:兩種方法對所有陽性標(biāo)本細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果的符合率較高,其中,對革蘭陰性菌桿菌:敏感、中度敏感、耐藥的符合率分別為94.7%,91.3%,96.3%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);對革蘭陽性菌球菌:敏感、中度敏感、耐藥的符合率分別為96.7%,93.6%,98.9%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),見表1。

        2.2 兩種檢測方法最終檢驗(yàn)結(jié)果報告所需時間:直接法為10±2.3 h,常規(guī)檢測法為72±13.6 h,直接法所需時間明顯短于常規(guī)檢測法,P<0.05,有統(tǒng)計學(xué)意義,見表1。

        表1 兩組藥敏試驗(yàn)符合率及獲取檢驗(yàn)報告時間比較(例)

        2.3 兩種檢測方法菌種鑒定檢出符合率:420例血培養(yǎng)標(biāo)本經(jīng)血培養(yǎng)儀報警為陽性的169例,其中經(jīng)常規(guī)藥敏試驗(yàn)組鑒定出革蘭陽性菌桿菌130株,革蘭陽性菌球菌39株,直接藥敏試驗(yàn)組鑒定出革蘭陽性菌桿菌112株,革蘭陽性菌球菌29株。兩種方法菌種鑒定總符合率為85.3%,其中腸桿菌科鑒定符合率為86.3%,革蘭陽性菌球菌符合率76.9%,見表2。

        表2 兩種檢測方法菌種鑒定符合率比較(%)

        3 討論

        菌血癥和敗血癥是臨床上嚴(yán)重危及患者生命的疾病。據(jù)統(tǒng)計,患者病死率可達(dá)28%,特別是在近年來,抗菌藥物的不規(guī)范使用,細(xì)菌耐藥性不斷提高的情況下,這一比率成增高趨勢。臨床檢驗(yàn)中,常規(guī)檢驗(yàn)法檢測陽性血液標(biāo)本較為準(zhǔn)確,但其細(xì)菌鑒定速度及藥敏試驗(yàn)結(jié)果報告時間均較慢[6],通常,臨床醫(yī)生獲取一份完整的報告需要3~4 d時間[7-9],這不利于指導(dǎo)臨床醫(yī)生盡早選擇合理的藥物對感染性疾病進(jìn)行治療,因此,對細(xì)菌菌種進(jìn)行快速而準(zhǔn)確的鑒定與藥敏試驗(yàn)是臨床診斷和治療的關(guān)鍵[7],對于盡早指導(dǎo)臨床合理應(yīng)用抗生素亦具有重要意義。本研究采用Bectec9240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)對血液標(biāo)本自動培養(yǎng),直接進(jìn)行細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn),其原理:利用熒光探測技術(shù)連續(xù)測定封閉培養(yǎng)瓶內(nèi)微生物代謝引起的氧或二氧化碳濃度變化,來檢測微生物增殖情況,以判斷是否感染細(xì)菌、真菌及分支桿菌[10],與常規(guī)檢驗(yàn)法的細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)相比,直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)法省略了分離培養(yǎng)步驟,操作方便快捷,結(jié)果準(zhǔn)確,本研究結(jié)果顯示,隨機(jī)選擇的420份血液樣本中,共檢測出169份陽性血液標(biāo)本,對革蘭陽性菌桿菌和革蘭陽性菌球菌分別應(yīng)用直接和常規(guī)細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)法進(jìn)行細(xì)菌鑒定,其總一致率為85.3%,兩種方法菌種鑒定符合率均較高,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在對陽性血液標(biāo)本的藥敏試驗(yàn)中,兩種方法的藥物敏感,中度耐藥,耐藥符合率亦較高,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),但直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)法的平均檢測結(jié)果報告時間為(10±2.3)h,與常規(guī)檢測法的細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)報告時間(72±13.6)h相比,時間明顯縮短,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),這與此前相關(guān)報道:與常規(guī)方法比較,在時間上提前了24~48 h[11]基本一致。

        綜合上述,通過Bectec9240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行的直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn),與常規(guī)檢測法的細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)一樣,其檢測結(jié)果具有可靠的準(zhǔn)確性,但直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)方法更加方便快捷,有效地縮短了臨床醫(yī)生獲取檢驗(yàn)報告的時間,使臨床醫(yī)生可盡早根據(jù)檢測結(jié)果指導(dǎo)或修正給藥方案,合理應(yīng)用抗菌藥物,延緩耐藥性的出現(xiàn)和發(fā)展,為患者盡早進(jìn)行有效的治療贏得了時間,因此,可以認(rèn)為直接細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)方法在臨床檢驗(yàn)中是一種可靠、有效的,值得推廣的細(xì)菌鑒定與藥敏試驗(yàn)方法。

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