莊養(yǎng)林，熊麗紅

(江西省血液中心檢驗(yàn)科，南昌330000)

由于窗口期感染、隱匿性感染等原因，ELISA法檢測(cè)獻(xiàn)血者血液中的抗體或抗原存在一定的局限性，輸血?dú)堄喔腥撅L(fēng)險(xiǎn)也時(shí)有發(fā)生[1-8]。因此從2010年開(kāi)始，我國(guó)在15所采供血機(jī)構(gòu)開(kāi)展核酸檢測(cè)(NAT)試點(diǎn)工作，我單位2010年成為首批試點(diǎn)單位后，并于當(dāng)年引進(jìn)羅氏Cobas s 201核酸檢測(cè)系統(tǒng)，目前已平穩(wěn)運(yùn)行4年有余，為更好地推動(dòng)核酸檢測(cè)工作，我單位于2013年4月引進(jìn)諾華TIGRIS全自動(dòng)核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)，該系統(tǒng)也平穩(wěn)運(yùn)行1年。由于這兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)模式不同，實(shí)際檢測(cè)效果也有所不同，在引進(jìn)諾華核酸檢測(cè)系統(tǒng)的初期，為全面評(píng)估兩種核酸檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)能力，對(duì)此我們也做了相關(guān)的比較工作。

1 對(duì)象與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 選自2013年7月24日-2013年10月16日南昌市無(wú)償獻(xiàn)血者標(biāo)本262例，所有標(biāo)本均用帶分離膠的5ml進(jìn)口無(wú)菌乙二胺四乙酸抗凝管留取血樣 (美國(guó)BD公司)，4℃低溫離心機(jī)離心(3000r/min，15 min)使血漿分層，2~8℃保存，24h內(nèi)進(jìn)行核酸檢測(cè)；2014年衛(wèi)生部核酸室間質(zhì)評(píng)(NCCL)標(biāo)本10例。

1.2 儀器 羅氏公司Cobas s 201核酸檢測(cè)系統(tǒng)，諾華公司TIGRIS全自動(dòng)核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)，瑞士Hamlton全自動(dòng)STAR加樣儀，瑞士Hamilton FAME全自動(dòng)酶免分析儀，西門子DIMENSION XPAND全自動(dòng)生化分析儀，XANTUS全自動(dòng)加樣與血型分析儀及長(zhǎng)沙湘麓DL-6M大容量低溫離心機(jī)。

1.3主要試劑 (1)常規(guī)血清學(xué)篩查酶免試劑盒：HBsAg酶免試劑 (廈門英科新創(chuàng)科技有限公司，批號(hào)：2012125133)，抗-HCV酶免試劑(北京萬(wàn)泰生物藥 業(yè) 股 份 有 限 公 司 ， 批 號(hào) ：C20130102、C20130406)，抗-HIV酶免試劑(廈門英科新創(chuàng)科技有限公司，批號(hào)：2013026605)，抗-TP酶免試劑(北京華大吉比愛(ài)生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20130206、20130516；北京金豪制藥股份有限公司，批號(hào)：2012111033、2013041008)；(2)核酸檢測(cè)試劑盒：COBASTaqScreen MPX test核酸檢測(cè)試劑盒(瑞士 Roche 公司，批號(hào)：R01528、R07643)，該試劑可同時(shí)定性檢測(cè)人類血漿中的HIV-1,2 RNA、HCV RNA 和 HBV DNA；Procleix ULTRIO Assay核酸檢測(cè)試劑盒 (Novartis公司，批號(hào)：36247751509149)該試劑可同時(shí)定性檢測(cè)人類血漿中的HIV-1 RNA、HCV RNA 和HBV DNA。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 先進(jìn)行常規(guī)一遍HBsAg、抗-HCV、抗-HIV，兩遍抗-TP和ALT檢測(cè)，篩選出ELISA及ALT合格獻(xiàn)血者標(biāo)本及不合格標(biāo)本，然后將262例標(biāo)本進(jìn)行羅氏6人份混樣檢測(cè)及諾華單人份檢測(cè)，NCCL核酸室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本與獻(xiàn)血者標(biāo)本同批進(jìn)行檢測(cè)。(1)進(jìn)行羅氏6人份混樣核酸檢測(cè)時(shí)，初混無(wú)反應(yīng)性標(biāo)本判為NAT檢測(cè)陰性，初混有反應(yīng)性時(shí)，進(jìn)行下一步拆分檢測(cè)工作：其一，拆分有反應(yīng)性標(biāo)本判為NAT陽(yáng)性標(biāo)本；其二，拆分無(wú)反應(yīng)性標(biāo)本判為NAT檢測(cè)陰性。(2)運(yùn)用諾華單人份檢測(cè)時(shí)，無(wú)反應(yīng)性標(biāo)本判為NAT陰性，有反應(yīng)性標(biāo)本判為NAT陽(yáng)性。(3)ELISA檢測(cè)陰性而羅氏拆分檢測(cè)NAT陽(yáng)性標(biāo)本或諾華檢測(cè)NAT陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行下一步HBV、HCV及HIV鑒別實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 262例血液標(biāo)本ELISA檢測(cè)結(jié)果 262例無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中經(jīng)ELISA檢測(cè)陰性為245例，陽(yáng)性為17例。

2.2 245例血液標(biāo)本兩種核酸檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果245例ELISA陰性獻(xiàn)血者標(biāo)本兩種核酸檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果情況，詳見(jiàn)下表1。

表1 245例ELISA合格獻(xiàn)血者標(biāo)本兩種檢測(cè)系統(tǒng)NAT檢測(cè)結(jié)果

2.3 17例ELISA不合格標(biāo)本及10例NCCL核酸室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本兩種檢測(cè)系統(tǒng)NAT檢測(cè)情況，詳見(jiàn)表2。

表2 17例ELISA不合格標(biāo)本及10例NCCL核酸室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本兩種檢測(cè)系統(tǒng)NAT檢測(cè)情況

2.4 ELISA陰性標(biāo)本而羅氏拆分檢測(cè)NAT陽(yáng)性標(biāo)本或諾華檢測(cè)NAT陽(yáng)性鑒別情況 245例ELISA檢測(cè)陰性的標(biāo)本中，羅氏和諾華各檢出1例和4例NAT陽(yáng)性標(biāo)本。通過(guò)鑒別實(shí)驗(yàn)，羅氏的1例NAT陽(yáng)性標(biāo)本未能鑒別，諾華的4例NAT陽(yáng)性標(biāo)本中1例為HBV，其余3例則未能鑒別。

3 討論

在本文中，245例ELISA檢測(cè)陰性獻(xiàn)血者的標(biāo)本中，羅氏系統(tǒng)檢出1例NAT陽(yáng)性標(biāo)本(此例標(biāo)本諾華NAT檢測(cè)也為陽(yáng)性)，而諾華系統(tǒng)則檢出4例NAT陽(yáng)性的標(biāo)本，后通過(guò)鑒別實(shí)驗(yàn)顯示，羅氏的1例NAT陽(yáng)性標(biāo)本未能鑒別，諾華的4例NAT陽(yáng)性標(biāo)本中1例為HBV，其余3例則未能鑒別。此項(xiàng)結(jié)果也從一方面體現(xiàn)了混樣檢測(cè)與單人份檢測(cè)的差別：混樣檢測(cè)由于吸取檢測(cè)的量較單人份檢測(cè)少，當(dāng)病毒載量比較低時(shí)，混樣檢測(cè)就有可能檢測(cè)不出，這與國(guó)內(nèi)外的研究[9-11]結(jié)果也比較一致，有單人份檢出率 (1:9862)及8人份混樣檢測(cè)率(1:5l011)；還有單人份檢測(cè)率 (26:7613)及16人份混樣檢測(cè)率(27:16064)。因此，諾華系統(tǒng)采用單人份檢測(cè)方式在病毒載量比較低時(shí)實(shí)施血液核酸篩查可能有一定的優(yōu)勢(shì)，諾華1人份標(biāo)本吸取的量為500μl，羅氏為167μl，相對(duì)而言諾華檢測(cè)到病毒的概率大一些。從另一方面講，由于沒(méi)能做追蹤實(shí)驗(yàn)，無(wú)法確證諾華其余3例NAT檢測(cè)陽(yáng)性的這部分標(biāo)本中是否存在病毒。因此，諾華未能鑒別的3例NAT陽(yáng)性的標(biāo)本也有可能是假陽(yáng)性，從節(jié)約血液資源上講，這部分血液經(jīng)NAT檢測(cè)有可能因?qū)嶒?yàn)的假陽(yáng)性而造成血液資源的浪費(fèi)，從而影響無(wú)償獻(xiàn)血者的獻(xiàn)血積極性。此外，在本實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)了羅氏與諾華NAT檢測(cè)同為陽(yáng)性的1例標(biāo)本中，鑒別實(shí)驗(yàn)卻未能鑒別，因條件所限，我們沒(méi)能進(jìn)一步追蹤檢測(cè)，因此是實(shí)驗(yàn)假陽(yáng)性還是病毒載量過(guò)低導(dǎo)致未能鑒別就不得而知。

在11例HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本的NAT檢測(cè)結(jié)果顯示，羅氏和諾華系統(tǒng)分別有5例和3例檢出NAT陽(yáng)性，其中同為陽(yáng)性的有3例，5份抗-HCV陽(yáng)性的標(biāo)本中兩者都有3例NAT檢出。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在ELISA陽(yáng)性的標(biāo)本運(yùn)用NAT檢測(cè)中，羅氏系統(tǒng)較諾華系統(tǒng)有較高的檢出率。因?yàn)?1例HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本我們未進(jìn)行確證及鑒別實(shí)驗(yàn)，因此不能排除有ELISA實(shí)驗(yàn)假陽(yáng)性的部分，但是可能也與HBV在血液中的存在形式有關(guān)，有可能是以小球形顆?；蚬軤铑w粒的形式存在，致NAT檢測(cè)不出。因此此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，在日常的血篩工作中，不能有依賴NAT檢測(cè)結(jié)果的思想，因?yàn)镹AT技術(shù)和血清學(xué)檢測(cè)的病毒標(biāo)志物不同，NAT可以作為血清學(xué)的補(bǔ)充，但不能完全替代。在10份NCCL核酸室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本中，兩種核酸檢測(cè)系統(tǒng)也全部正確檢出，這表明這兩種核酸檢測(cè)系統(tǒng)均能較好地勝任日常核酸檢測(cè)工作。

從日常檢測(cè)工作流程上看，諾華的應(yīng)用不如羅氏簡(jiǎn)便，具體體現(xiàn)在：對(duì)設(shè)備維護(hù)的要求較高、維護(hù)時(shí)間長(zhǎng)、加載試劑及耗材費(fèi)時(shí)；實(shí)驗(yàn)運(yùn)行中工作人員即使發(fā)現(xiàn)可當(dāng)時(shí)解決的問(wèn)題也無(wú)法人為糾正。但是從檢測(cè)及出具檢驗(yàn)報(bào)告時(shí)間上看，羅氏系統(tǒng)可能會(huì)長(zhǎng)于諾華系統(tǒng)，因?yàn)榱_氏為6人份混樣檢測(cè)，檢測(cè)前需進(jìn)行標(biāo)本6人份混樣，而且為減少拆分檢測(cè)，羅氏系統(tǒng)檢測(cè)一般需要等ELISA檢測(cè)結(jié)束后挑取ELISA陰性的標(biāo)本才能進(jìn)行，而諾華系統(tǒng)則與ELISA檢測(cè)同步進(jìn)行，單人份直接加樣檢測(cè)，減少了出具報(bào)告時(shí)間。再者，ELISA陰性的標(biāo)本進(jìn)行羅氏系統(tǒng)檢測(cè)時(shí)如果初混有反應(yīng)性，則需要進(jìn)行拆分檢測(cè)，又增加了工作量，出具報(bào)告的時(shí)間則又會(huì)相應(yīng)延長(zhǎng)，不利于應(yīng)急標(biāo)本的檢測(cè)，而諾華是單人份檢測(cè)則不存在這種情況。總之，兩種核酸檢測(cè)系統(tǒng)在日常血篩檢測(cè)工作中各有優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，但均能較好地勝任日常的核酸檢測(cè)工作。

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