黃勁柏，吳志群，蘇明珍，李北坤

(英德市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東 英德513000)

地中海貧血的發(fā)生是由于編碼珠蛋白肽鏈的基因發(fā)生缺失或突變，導(dǎo)致一種或者多種珠蛋白肽缺乏或者合成不足而引起的遺傳性溶血性貧血病，血紅蛋白E病屬于β地中海貧血中的一種血紅蛋白疾病[1]，其發(fā)生原因主要是由于β珠蛋白肽第26位的密碼子發(fā)生了突變，對(duì)mRNA前體的加工效率造成影響，進(jìn)而導(dǎo)致β珠蛋白肽的合成降低，是比較常見(jiàn)的一種異常血紅蛋白疾病，主要發(fā)生在東南亞和我國(guó)的南方地區(qū)。高效液相色譜儀以及毛細(xì)管電泳檢測(cè)都是目前臨床上常用的檢測(cè)血紅蛋白E病的方法，高效液相色譜儀雖然應(yīng)用廣泛，也具有一定的篩查價(jià)值，但是在分析血紅蛋白E病方面仍然存在著一定的不足之處，例如不能實(shí)現(xiàn)血紅蛋白E病的定量，而全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀和前者相比有很多的優(yōu)越性，是比較可靠的篩查方式[2]。近年來(lái)，我院對(duì)接受檢測(cè)的孕婦及其配偶7311例樣本的臨床資料進(jìn)行回顧性分析和總結(jié)，旨在研究全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀在HbE病檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)將其報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年10月至2014年10月期間在我院接受檢測(cè)的孕婦及其配偶7311例的樣本為研究對(duì)象，根據(jù)其臨床資料進(jìn)行回顧性分析和研究。受檢者年齡為23~48歲，平均年齡為(32.5±3.2)歲，其中男性為 2456 例，占 33.6%，女性為4855例，占66.4%。

1.2 儀器與試劑 法國(guó)Sebia公司的Capillary2 FlexPricing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀及其原廠配套試劑。廈門(mén)致善生物公司生產(chǎn)的磁珠法基因組DNA提取試劑盒和Lab-Aid820自動(dòng)化儀器。深圳亞能生物有限公司生產(chǎn)的地貧基因檢測(cè)試劑盒。

1.3 方法

1.3 .1樣本采集 使用ACD抗凝管，抽取受檢者靜脈血3ml。將抽取的血液標(biāo)本顛倒混勻10次后，先進(jìn)行血紅蛋白電泳分析；再用ACD抗凝管抽取受檢者靜脈血3m l，顛倒混勻10次后，進(jìn)行地貧基因的分析。

1.3 .2 全自動(dòng)毛細(xì)管電泳血紅蛋白分析 使用Capillary2 FlexPricing全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀對(duì)樣本進(jìn)行Hb電泳分析。在進(jìn)行檢查之前，首先用廠家配套的質(zhì)控定位品進(jìn)行定位，目的在于保證儀器的良好使用，然后將編好號(hào)的樣品放入檢測(cè)架導(dǎo)入儀器中按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，結(jié)果曲線(xiàn)中Z4區(qū)域出現(xiàn)異常Hb區(qū)帶則為疑似HbE病的標(biāo)本[3]。

1.3 .3地貧基因分析 使用地貧基因檢測(cè)試劑盒對(duì)全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀篩選出的疑似HbE病的標(biāo)本進(jìn)行地貧基因的檢測(cè)，首先使用廈門(mén)致善生物公司生產(chǎn)的磁珠法基因組DNA提取試劑盒和Lab-Aid820自動(dòng)化儀器提取受檢者的DNA，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，再進(jìn)行分子雜交后讀取結(jié)果。觀察全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)結(jié)果是否與之相符。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有檢測(cè)數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s)，組間比較采用 t檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 全自動(dòng)毛細(xì)管電泳血紅蛋白分析結(jié)果 接受檢測(cè)的7311例樣本中共檢測(cè)出HbE帶25例，其檢出率為0.34%。HbE帶定量最小值為14.2%，最大值為84.6%，其平均值為(29.68±14.56)%。

2.2 地貧基因分析結(jié)果 使用全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢出的25例HbE帶樣本經(jīng)地貧基因分析證實(shí)全部為HbE，其中包括了HbE復(fù)合α地貧(HbE/α地貧)5例，HbE復(fù)合β地貧 (HbE/β地貧)3例，另外還有HbE雜合子15例以及HbE純合子2例，詳見(jiàn)表1。

表1 HbE病毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)血紅蛋白的結(jié)果分布

3 討論

血紅蛋白病在臨床上分為異常血紅蛋白和地中海貧血，地中海貧血依據(jù)病變發(fā)生的珠蛋白鏈的不同又分為α-地中海貧血和β-地中海貧血。第一例HbE病首先在泰國(guó)被發(fā)現(xiàn)[4]，在我國(guó)HbE病主要分布在廣東、廣西等地區(qū)，是危害人體健康的一種遺傳性疾病，因此對(duì)于血紅蛋白病的篩查就顯得十分重要，關(guān)系著人類(lèi)的身體健康和臨床治療，同時(shí)也關(guān)系著下一代的健康[5]。目前臨床上對(duì)于血紅蛋白病的檢測(cè)方式有很多，其中以血常規(guī)分析最為常見(jiàn)，這種檢測(cè)方式雖然在一定程度上可以判斷檢測(cè)者是否有血紅蛋白病，但是不能判斷患者是否為α-地中海貧血還是β-地中海貧血，或是其他異常血紅蛋白疾病，所以，血細(xì)胞分析檢測(cè)的方式存在一定的不足，容易發(fā)生漏診[6]。

目前臨床上比較常用的篩查血紅蛋白E病的方法有全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀、醋酸纖維素電泳法以及高效液相色譜法等其他篩查方法。其中毛細(xì)管電泳儀作為全自動(dòng)、快速、高效、準(zhǔn)確的血紅蛋白分離、定量系統(tǒng)，在臨床中用于篩查血紅蛋白E病受到廣泛的歡迎。有學(xué)者[7]通過(guò)將全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀、醋酸纖維素電泳法篩查血紅蛋白E病的結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)結(jié)果比醋酸纖維素電泳法的檢測(cè)結(jié)果更加可靠，更適合用于臨床上篩查血紅蛋白病。在地中海貧血的高發(fā)地區(qū)，有學(xué)者通過(guò)對(duì)全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀篩查血紅蛋白病的結(jié)果進(jìn)行研究，認(rèn)為全自動(dòng)毛細(xì)管電泳法篩查地貧的相關(guān)性要優(yōu)于高效液相色譜和低壓液相色譜法，全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀能夠準(zhǔn)確的測(cè)定地中海貧血和異常血紅蛋白，這是上述兩者所不能完成的，而且除此之外，全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀還能分離，定量Hb A2、Hb E、Hb F、Hb H、Hb Bart's，這些都為臨床上診斷地中海貧血和異常血紅蛋白提供了重要的依據(jù)。全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)血紅蛋白病的原理主要是[8]利用充滿(mǎn)電泳液的石英毛細(xì)管進(jìn)行的，溶血?jiǎng)┲羞M(jìn)行稀釋的紅細(xì)胞樣品在高壓電的作用下將其分離，最后利用光波檢測(cè)裝置檢測(cè)，全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀對(duì)血紅蛋白成分分析的靈敏度和分辨率十分高，和其他的一些檢測(cè)方法相比具有很大的優(yōu)越性。本次研究結(jié)果顯示，全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)血紅蛋白病可以區(qū)分HbE雜合子，其值為 (25.41±0.94)%，和 HbE純合子，其值為(83.42±1.45)%，還可以區(qū)分HbE/α-地中海貧血，其值為 (18.32±2.94)%，和HbE/β-地中海貧血，其值為 (52.78±9.45)%，在接受檢測(cè)的7311例樣本中共檢測(cè)出HbE帶樣本25例，其檢出率為0.34%，檢出的樣本經(jīng)過(guò)地貧基因分析驗(yàn)證，其結(jié)果完全相符，說(shuō)明通過(guò)全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀就能檢測(cè)出患者是否為HbE病，其檢查速度快，是臨床上檢測(cè)血紅蛋白病的理想方式。

綜上所述，全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀在HbE病檢測(cè)中發(fā)揮著重要的作用，不僅可以分析出HbE帶，還可以區(qū)分出HbE病是雜合子或是純合子，是篩查血紅蛋白HbE病的理想方式，值得應(yīng)用和推廣。

[1]徐詠梅,段國(guó)慶,龔翠芹,等.醋酸纖維素電泳和毛細(xì)管電泳在HbE病篩查中的價(jià)值比較[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,12(9):1166-1167.

[2]阮麗明,周艷潔,丁進(jìn)龍,等.全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀在血紅蛋白分析中的應(yīng)用[J].海南醫(yī)學(xué),2012,23(1):15-17.

[3]阮麗明,周艷潔,朱茂靈,等.全自動(dòng)毛細(xì)管電泳法定量測(cè)定血紅蛋白A2快速篩查β珠蛋白生成障礙性貧血的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(19):2313-2314,3216.

[4]索明環(huán),溫冬梅,張秀明,等.全自動(dòng)毛細(xì)管電泳檢測(cè)11519例血紅蛋白的結(jié)果分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(8):913-914.

[5]朱紅艷,歐陽(yáng)紅梅,宋建新,等.全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀對(duì)2079例孕婦地中海貧血的篩查[J].中國(guó)婦幼保健,2012,27(30):4833-4834.

[6]劉基鐸,肖明鋒,袁晴,等.高壓毛細(xì)電泳技術(shù)檢測(cè)β-地中海貧血的結(jié)果分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(4):427-429.

[7]盧業(yè)成,鄭師陵,肖艷華,等.全自動(dòng)多通道毛細(xì)管區(qū)帶電泳技術(shù)在血紅蛋白分析中的臨床應(yīng)用[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,30(7):675-676,679.

[8]游雪云,劉艷秋,吳敏.毛細(xì)管電泳在β地中海貧血中的應(yīng)用研究[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2014,32(5):517-519.

[9]李東明,玉晉武,韋媛,等.高效液相色譜分析在HbE篩查中的應(yīng)用價(jià)值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2013,12(14):1808-1809,1811.

[10]吳教仁,林炳忠,陳釗,等.血紅蛋白E及血紅蛋白E復(fù)合β地中海貧血的臨床分析[J].臨床血液學(xué)雜志,2004,17(4):204-206.

[11]陳星,初德強(qiáng),梁開(kāi)艷,等.全自動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù)在篩查地中海貧血中的臨床診斷價(jià)值[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2014,18(4):635-638.

[12]趙應(yīng)斌,黎華蓮,劉鋼毅,等.全自動(dòng)蛋白電泳系統(tǒng)在妊娠婦女產(chǎn)前Hb病檢查中應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2007,14(7):869-870.

[13]Francois F,Zhang K,Varenne A,et al.New integrated measurement protocol using capillary electrophoresis instrumentation for the determination of viscosity,conductivity and absorbance of ionic liquid-molecular solvent mixtures[J].Anal Chim Acta,2006,562:164-170.

[14]Van Delft P,Lenters E,Bakker-Verweij M,et al.Evaluating five dedicated automatic devices for haemoglobinopathy diagnostics in multi-ethnic populations.[J].Pediatr Int,2009,31(5):484-495.

[15]Wang WJ,Wu ZK,Zhang XH,et al.Observations on after-effect duration of kidney-nourishing and marrow-replenishing therapy on 58 cases of Mediterranean anemia[J].JTradit Chin Med,2009,29(4):258-262.