張玉成，張欣然，劉 翠，朱 彪，錢智勇，郭希民，郭紅延

PAA-CS超吸水海綿應(yīng)用于喂服華法林大鼠拔牙創(chuàng)模型的止血效果

張玉成1,2，張欣然1,2，劉 翠1,2，朱 彪1,2，錢智勇3，郭希民3，郭紅延1

目的 探討PAA-CS超吸水海綿應(yīng)用于口腔拔牙創(chuàng)的優(yōu)勢。方法 建立對照組(A組)SD大鼠拔牙創(chuàng)模型和華法林組(B組)SD大鼠凝血功能異常拔牙創(chuàng)模型，以紗布棉球做陰性對照對拔牙創(chuàng)進(jìn)行止血，比較PAA-CS超吸水海綿與紗布棉球的止血效果。結(jié)果 B組凝血酶原時間(s)較A組顯著延長[(19.73±2.74)vs(10.04±0.95)，P<0.05]，INR值增大(3.49vs1)。A、B兩組中，PAA-CS超吸水海綿止血時間均少于紗布棉球，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；A組止血后無繼發(fā)出血；B組應(yīng)用紗布棉球止血后有4只繼發(fā)出血。結(jié)論 成功建立了因喂服華法林而導(dǎo)致凝血功能異常的大鼠拔牙創(chuàng)模型，PAA-CS超吸水海綿的止血效果明顯優(yōu)于紗布棉球。

PAA-CS超吸水海綿；華法林；拔牙創(chuàng)止血

心血管疾病已成為中國成人首要的死亡原因，華法林是治療心血管疾病常用藥物[1]。同時,華法林也有不良反應(yīng)，如導(dǎo)致出凝血時間延長。因此，長期服用抗凝藥物華法林的患者,在拔牙時會有出凝血時間延長和持續(xù)出血的風(fēng)險。因此，對這類患者進(jìn)行拔牙操作，一直被口腔頜面外科視為禁忌。然而,國內(nèi)外最新研究認(rèn)為，該類患者可以在不停藥的情況下拔牙,條件是在國際標(biāo)準(zhǔn)化率(international normalized ratio，INR)值的安全范圍內(nèi)[2]，同時保證局部有效止血[3],而用合適的材料進(jìn)行有效止血則是關(guān)鍵的一步。本研究旨在探討新型止血材料——PAA-CS超吸水海綿用于拔牙創(chuàng)快速止血的效果。

1 材料與方法

1.1 材料 紗布棉球；PAA-CS超吸水海綿由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所研制；華法林鈉片由齊魯制藥藥業(yè)有限公司提供；SD大鼠由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物實驗中心提供；凝血檢測儀器是SYSMEX系列CA7000全自動凝血分析儀。

1.2 動物模型的建立 將體重均為300±5 g左右的60只SD大鼠隨機(jī)分為兩組：對照組(A組)30只，每次1 ml生理鹽水灌胃，1次/d；華法林組(B組)30只，用生理鹽水和華法林粉末混勻(華法林含量0.15 mg/kg[4])，每次1 ml混勻液灌胃，1次/d。兩組均給藥7 d。

1.3 凝血功能異常的檢測 大鼠喂服華法林7 d，全麻后取血3 ml進(jìn)行凝血四項檢測[5]，記錄PT，然后計算華法林鈉的國際標(biāo)準(zhǔn)化比值INR(INR=PTRISI；PTR 為喂藥大鼠PT均值/正常對照PT均值；ISI 為國際敏感度指數(shù)1.85)。

1.4 拔牙創(chuàng)模型的建立 兩組SD大鼠腹腔注射2%戊巴比妥鈉液(30 mg/kg)，固定于實驗臺，口腔消毒，鋪巾。下頜左側(cè)切牙分離牙齦，將牙與牙槽骨輕輕分離使持針器能夾住大鼠下頜切牙即可?？焖侔纬?，以減少出血時間[6](圖1)。

圖1 SD大鼠拔牙創(chuàng)模型建立

A.完整的大鼠下頜切牙；B.拔下大鼠下頜切牙后出血,拔牙創(chuàng)出血迅速，很快充滿口腔內(nèi)，右側(cè)前牙也很快被血液覆蓋；C.拔除下頜切牙后用PAA-CS超吸水海綿止血,30 s后材料緊緊黏附在拔牙創(chuàng)周圍，不易被取下來；D.PAA-CS超吸水海綿止血后的大鼠拔牙創(chuàng)，無流動性出血，創(chuàng)面干凈

1.5 拔牙創(chuàng)止血 準(zhǔn)備質(zhì)量均等的紗布棉球和PAA-CS超吸水海綿各30塊，兩組均抽取15只大鼠用紗布棉球止血，另15只用PAA-CS超吸水海綿止血。將紗布棉球或PAA-CS超吸水海綿止血材料按壓在拔牙創(chuàng)上30 s后慢慢松開，觀察紗布棉球或止血材料止血的情況。如果沒有流動性出血，證明止血完全，記錄止血時間；如果有流動性出血則繼續(xù)壓迫，直到不出血，記錄止血時間。將吸收了血液的紗布棉球和止血材料取下，進(jìn)行稱重，減去止血材料或紗布棉球自身的重量后，記錄為出血量。完全止血后的0.5、1、6、12 h，觀察有無繼發(fā)出血情況。

2 結(jié) 果

2.1 凝血時間比較 B組凝血酶原時間較A組顯著延長[(19.73±2.74)svs(10.04±0.95)s，P<0.05]，INR值增大(3.49vs1)，證明B組大鼠凝血時間延長，凝血受到抑制，模型建立成功。

2.2 拔牙創(chuàng)止血實驗 在B組拔牙后，可以觀察到拔牙創(chuàng)出血迅速，血液很快充滿口腔，右側(cè)前牙也被浸潤。分別用紗布棉球和PAA-CS超吸水海綿止血后，按壓30 s，觀察到兩者均有流動性出血。止血完全后，用鑷子夾取止血用的PAA-CS超吸水海綿時，觀察到止血材料是黏附在拔牙創(chuàng)上的，而紗布棉球較易被取下。A組行常規(guī)拔牙。

2.3 止血效果比較 A、B兩組中，PAA-CS超吸水海綿止血時間均少于紗布棉球，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而兩種材料止血時的平均出血量無統(tǒng)計學(xué)差異。A組止血后無繼發(fā)出血；B組應(yīng)用紗布棉球止血后有4只繼發(fā)出血。

組別止血材料止血時間(s)出血量(ml)A組 PAA-CS超吸水海綿60±3①1.37±0.16 紗布棉球90±10 2.29±0.36B組 PAA-CS超吸水海綿60±5①1.82±0.26 紗布棉球120±10 2.73±0.63

注：A組為對照組，B組為華法林組；與紗布棉球比較，①P<0.05

3 討 論

最近研究表明，服用抗凝藥物華法林的患者，可以在不停藥的情況下進(jìn)行拔牙操作[7]，但需要在術(shù)后應(yīng)用有效的止血材料進(jìn)行止血，目前國內(nèi)外還沒有專門針對服用抗凝藥物患者拔牙創(chuàng)應(yīng)用止血材料的相關(guān)研究。臨床上醫(yī)師會要求患者停服1周抗凝藥物，然后再進(jìn)行拔牙操作，但這種方法增加了患者心血管疾病復(fù)發(fā)的風(fēng)險。同時，應(yīng)用紗布棉球止血對凝血功能異常的拔牙創(chuàng)患者達(dá)不到預(yù)想的止血效果。筆者應(yīng)用的PAA-CS超吸水海綿是在殼聚糖鏈上支接了聚丙烯酸，材料依靠強(qiáng)吸水性和殼聚糖的止血特性對拔牙創(chuàng)進(jìn)行止血[8,9]；材料本身未添加任何凝血因子，生物相容性好；殼聚糖具有抗菌作用，還可促進(jìn)損傷組織修復(fù)。

本實驗用劑量為0.15 mg/kg的華法林溶液1 ml[10,11]灌胃給藥SD大鼠，經(jīng)凝血四項檢測證實大鼠的凝血功能產(chǎn)生障礙后，進(jìn)行拔牙操作，成功建立了凝血功能異常的拔牙創(chuàng)大鼠模型。在今后的研究中，本課題組會繼續(xù)應(yīng)用同種方法進(jìn)行其他抗凝藥物的大鼠拔牙創(chuàng)模型研究，進(jìn)而，將PAA-CS超吸水海綿應(yīng)用于多種模型，檢驗PAA-CS超吸水海綿對其他拔牙創(chuàng)模型的止血有效性。

本研究中PAA-CS超吸水海綿與紗布棉球的止血效果比較表明，PAA-CS超吸水海綿止血時間明顯縮短(P<0.01)，繼發(fā)性出血情況為零，但出血量無明顯差異?？傮w來說，對于凝血功能正常的拔牙創(chuàng)出血，PAA-CS超吸水海綿和紗布棉球止血效果均可；而對于凝血功能異常的拔牙創(chuàng)出血，PAA-CS超吸水海綿較紗布棉球止血效果更好。這一結(jié)果表明，PAA-CS超吸水海綿可能是潛在的口腔拔牙創(chuàng)止血材料，且止血效果明顯優(yōu)于紗布棉球，筆者下一步擬將該材料應(yīng)用于人口腔拔牙創(chuàng)完全止血，替代臨床上用的紗布棉球，提高凝血功能異常患者拔牙的安全性。

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(2015-01-22收稿 2015-04-15修回)

(責(zé)任編輯 尤偉杰)

PAA-CS superabsorbent sponge used for hemostasis of tooth extraction wounds in rats fed on warfarin

ZHANG Yucheng1,2，ZHANG Xinran1,2，LIU Cui1,2，ZHU Biao1,2，QIAN Zhiyong3，GUO Ximin3，and GUO Hongyan2.

1.Deptartment of Dentistry，General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces，Beijing 100039，China； 2. Liaoning Medical College，Jinzhou 121001, China; 3.PLA Key Labaratory of Stem Cells and Regenerative Medicine, Beijing Institute of Basic Medical Sciences, Beijing 100850, China

Objective To observe hemostatic effects of PAA-CS(poly(acrylic acid)-chitosan) superabsorbent sponge on SD rats fed on warfarin after their tooth extraction, discussing the advantages of PAA-CS superabsorbent sponge applied for tooth extraction wounds.Methods Group A,a model of tooth extraction wounds of SD rats, and Group B,a model of tooth extraction wounds of SD rats with coagulation function abnormality, were established to carry out hemostasis on tooth extraction wounds with a negative control group using gauze tampons. Hemostatic effects of PAA-CS superabsorbent sponge and gauze cotton balls were compared.Results By four coagulation tests, the coagulation function of rats in Group B became abnormal. During the examination of hemostasis of tooth extraction wounds, the time used for hemostasis by the PAA-CS Superabsorbent Sponge(about 60 s) was significantly less than that by gauze tampons(>90 s,P<0.01). After the PAA-CS superabsorbent sponge was used to stop bleeding of tooth extraction wounds in the bleeding model of rat tooth extraction wounds, there was no secondary hemorrhage and its hemostatic effect was reliable. Conclusions This examination established a model of tooth extraction wounds of rats fed on warfarin resulting in abnormality of rats’ coagulation function successfully. The hemostatic tests have proved that the hemostatic effect of PAA-CS superabsorbent sponge is much better than that of gauze cotton balls.

PAA-CS superabsorbent sponge；warfarin；hemostasis on tooth extraction

武警總醫(yī)院二類課題基金項目(WZ20130209)

張玉成，碩士研究生，E-mail:yucheng0728@163.com

1.100039 北京，武警總醫(yī)院口腔醫(yī)學(xué)中心；2.121001 錦州，遼寧醫(yī)學(xué)院；3.100850 北京，軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，全軍干細(xì)胞與再生醫(yī)學(xué)重點實驗室

郭紅延，E-mail:ghyfmmu@126.com

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