楊映霞，仇一晶，孫玉濱，王丹輝，董小紅，孟多佳

(1．吉林天藥藥物研發(fā)有限公司，長春 130012； 2．吉林天藥本草堂制藥有限公司，長春 130012；3．吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院第一臨床醫(yī)院，長春 130012； 4．長春生物制品研究所有限責(zé)任公司，長春 130062)

鹿哈膠囊來源于名老中醫(yī)多年的臨床經(jīng)驗(yàn)方，是由鹿骨等幾味中藥組成的膠囊劑。該方具有補(bǔ)腎益精、強(qiáng)筋壯骨的功效[1]。臨床上用于治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。處方中鹿骨等藥材均含有大量的蛋白質(zhì)。為了控制產(chǎn)品質(zhì)量，選擇制劑中的總氮量為控制指標(biāo)，并進(jìn)行了方法學(xué)考察，為鹿哈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了保證。

1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑

1.1 材料

鹿哈膠囊中試樣品(批號：20130516、20130518、20130520，為吉林天藥本草堂制藥有限公司中試車間生產(chǎn))。

1.2 儀器

凱氏定氮蒸餾裝置(天長市長城玻璃儀器制造廠)；酸式滴定管(50mL，廣西南寧融儀實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.3 試劑

鹿骨提取干燥物參照物(吉林天藥研發(fā)有限公司實(shí)驗(yàn)室自制)；無水碳酸鈉(基準(zhǔn)物質(zhì)，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司)；硫酸、硫酸銅、硫酸鉀、硼酸、甲基紅、溴甲酚綠、氫氧化鈉均為分析純。

2 方法

總氮量測定：取10粒鹿哈膠囊內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取粉末約1.0g，按照《中國藥典》2010年一部附錄IXL氮測定法第一法測定[2]。

3 結(jié)果

3.1 專屬性考察

按處方比例和制備工藝制備鹿哈膠囊(去除鹿骨和其他藥材的輔料)的陰性對照樣品；取批號為20130516中試樣品。按照上述總氮量測定方法測定總氮量，結(jié)果，陰性對照樣品無干擾。

3.2 線性關(guān)系考察

精密稱取鹿骨提取干燥物參照物測定總氮量，以參照物取樣量為橫坐標(biāo)、總氮量為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=0.0651x+1.772，R2=0.9994(圖1)。

圖1 線性關(guān)系考察

結(jié)果表明，總氮量在24.98mg～29.89mg范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，符合測定的要求。

3.3 取樣量考察

取不同劑量的樣品，按上述總氮量測定方法測定不同劑量樣品中總氮量。當(dāng)取樣量約為1.0g時在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，且消耗滴定液的量也較合適。

3.4 重復(fù)性考察

對批號為20130516的同一批樣品，按上述總氮量測定方法獨(dú)立進(jìn)行6次測定，計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果平均值為2.682%，RSD為1.29%，表明方法重復(fù)性良好(表1)。

表1重復(fù)性考察

Table 1 The repeatability investigate

3.5 中間精密度考察

對批號為20130516的同一批樣品，按上述總氮量測定方法測定，不同人員、不同時間進(jìn)行6次測定，計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果平均值為2.679%，RSD為1.35%，表明方法中間精密度良好(表2)。

表2中間精密度考察

Table 2 Intermediate precision investigate

3.6 穩(wěn)定性考察

取批號為20130516的樣品，按上述總氮量測定方法測定，于0min、10min、20min、30min、40min連續(xù)測定5次，計算其相對標(biāo)準(zhǔn)差。結(jié)果平均值為2.671%，RSD為1.22%，在規(guī)定的限度內(nèi)。表明在40min內(nèi)供試品穩(wěn)定性良好(表3)。

表3穩(wěn)定性考察

Table 3 The stability investigate

3.7 準(zhǔn)確度考察

精密稱取樣品6份(批號為20130516，其中總氮量按重復(fù)性6次測定平均值計算為26.82mg/g)，每份稱樣量約為0.5g，置凱式燒瓶中，精密加入鹿骨提取干燥物參照物(N含量0.0697mg/mg)192mg，按上述總氮量測定方法操作測定，計算回收率。結(jié)果平均回收率98.29%，RSD 1.06%。結(jié)果表明準(zhǔn)確度良好(表4)。

表4準(zhǔn)確度考察

Table 4 Accuracy investigate

3.8 樣品含量測定

測定3批樣品，每批取10粒鹿哈膠囊內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取粉末約1.0g，精密稱定，按照上述總氮量測定方法測定。每個樣品單獨(dú)測定2次，結(jié)果見表5。

通過以上方法學(xué)考察，說明鹿哈膠囊總氮量測定方法穩(wěn)定可行，故列入鹿哈膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文。

4 討論

本試驗(yàn)采用經(jīng)典的氮測定法對鹿哈膠囊進(jìn)行總氮量測定，方法簡便準(zhǔn)確、穩(wěn)定可行，為制定鹿哈膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了可靠依據(jù)，對控制鹿哈膠囊的藥品質(zhì)量和廣泛開發(fā)吉林省鹿產(chǎn)品具有一定意義。

表53批樣品總氮量測定

Table5Thethreebatchoftotalnitrogeninsamplesizedetermination

批號Batchnumber稱樣量(g)Thesamplevolume總氮量(%)Thetotalamountofnitrogen平均總氮量(mg/粒)Theaveragetotalamountofnitrogen(mg/pellet)201305161.00021.00182.69112.06201305181.00091.00012.64611.81201305201.00110.99902.87112.88

[1]衛(wèi)生部藥典委員會．中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)：中藥材第一冊[M]．北京：衛(wèi)生部藥典委員會，1992．

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典版:一部[K].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.