張 迪，牛 雷，樓小偉，楊瑞寧

近年來，由于廣譜抗生素和免疫抑制藥物等的廣泛使用、器官移植和有創(chuàng)導(dǎo)管技術(shù)的開展，致使機(jī)體免疫功能損傷或低下的患者較易感染侵襲性真菌，成為常見的感染和死亡原因［1］，侵襲性真菌感染已成為重癥監(jiān)護(hù)病房及院內(nèi)感染的主要源頭之一［2-3］。引起侵襲性真菌感染的真菌主要有念珠菌、曲霉菌及隱球菌等，其中白色念珠菌感染約占60%～80%。以往這類疾病的診斷主要依靠臨床表現(xiàn)、真菌直接鏡檢及培養(yǎng)、影像學(xué)診斷和組織活檢等，敏感性較低。血培養(yǎng)是目前真菌感染診斷的實(shí)驗(yàn)室金標(biāo)準(zhǔn)，但由于敏感性低(約50%)，培養(yǎng)時(shí)間長，往往延誤了真菌感染的診斷和治療，是造成真菌感染高病死率的部分原因［4］。因此，研究和改進(jìn)檢測真菌的抗原、抗體及代謝產(chǎn)物的血清學(xué)方法，已成為這一領(lǐng)域研究熱點(diǎn)。白色念珠菌含量最為豐富的蛋白質(zhì)之一即白念珠菌烯醇化酶，又稱2-磷酸-D-甘油鹽水解酶，由440個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量在45～48 kD之間，其中P47抗原主要存在于白念珠菌的菌絲胞質(zhì)中，在念珠菌感染中可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體［5-6］，因此研究anti-Eno IgG在侵襲性念珠菌感染中的意義頗具價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 以我院收治的具有完整臨床、病理資料、真菌培養(yǎng)結(jié)果的120例患者，分為血念珠菌培養(yǎng)陽性組30例，其中全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中真菌培養(yǎng)陽性白色念珠菌26例、熱帶念珠菌2例、光滑念珠菌2例;全自動(dòng)血培養(yǎng)儀中中血真菌培養(yǎng)陰性組30例;G試驗(yàn)陽性組30例，每例患者采血后6 h內(nèi)分離血漿，常規(guī)檢驗(yàn)中兩次G試驗(yàn)血樣結(jié)果均在100～800 pg/mL之內(nèi);G試驗(yàn)陰性組30例，G試驗(yàn)測定兩次血樣結(jié)果在100 pg/mL以下。以上各組分別清晨采取靜脈血分離血漿標(biāo)本于－20℃冰箱保存待測。

1.2 試劑與儀器 BD9120全自動(dòng)血培養(yǎng)儀，血真菌培養(yǎng)瓶為BD公司產(chǎn)品;G試驗(yàn)試劑盒和MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測系統(tǒng)均為北京金山川科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品;白念珠菌烯醇化酶IgG抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)為南京軍區(qū)南京總醫(yī)院李芳秋課題組研制，北京貝爾生物公司裝配的臨床試用型試劑盒;BIO-RAD，iMark酶標(biāo)儀為德國伯樂公司產(chǎn)品。

1.3 試驗(yàn)方法 將各組采集分離的血漿嚴(yán)格按說明書要求進(jìn)行anti-Eno IgG(酶聯(lián)免疫法)測定。

2 結(jié)果

2.1 念珠菌培養(yǎng)陽性和陰性患者anti-Eno IgG檢測結(jié)果 血念珠菌培養(yǎng)陽性患者30例，anti-Eno IgG陽性率為93.3%(28/30);血念珠菌培養(yǎng)陰性患者30例，anti-Eno IgG全部陰性。

2.2 G試驗(yàn)陽性和陰性患者anti-Eno IgG檢測結(jié)果G試驗(yàn)陽性患者30例，anti-Eno IgG陽性率為40%(12/30);G試驗(yàn)陰性患者30例，anti-Eno IgG陽性率10%(3/30)。

3 討論

白念珠菌烯醇化酶可刺激機(jī)體產(chǎn)生明顯的細(xì)胞免疫和體液免疫，在侵襲性念珠菌感染患者的血清中anti-Eno IgG含量明顯增高，是侵襲性念珠菌感染的一個(gè)較敏感的檢測指標(biāo)［7-8］。

本試驗(yàn)30例血念珠菌培養(yǎng)陽性患者中anti-Eno IgG測定陽性率達(dá)93.3%，而血念珠菌培養(yǎng)陰性的30份標(biāo)本中，anti-Eno IgG檢測結(jié)果均為陰性。表明anti-Eno IgG對(duì)侵襲性念珠菌病的檢測結(jié)果與血真菌培養(yǎng)結(jié)果具有顯著的一致性。血真菌培養(yǎng)需時(shí)較長，而anti-Eno IgG在侵襲性念珠菌感染早期即可升高［9］，實(shí)際檢測只要4 h左右就可以出結(jié)果，檢測時(shí)效比血真菌培養(yǎng)要高。兩種方法在檢測特異性一致的情況下，anti-Eno IgG檢測具有快速、準(zhǔn)確的優(yōu)越性。試驗(yàn)中30份血培養(yǎng)陽性標(biāo)本中有2例anti-Eno IgG結(jié)果是陰性，可能由于患者處于免疫功能低下狀態(tài)，抗體水平較低，所以結(jié)果顯示陰性。

在G試驗(yàn)陽性的30份標(biāo)本中，anti-Eno IgG測定陽性率40%;G試驗(yàn)陰性組30例，anti-Eno IgG陽性率10%，anti-Eno IgG與G試驗(yàn)陰性組檢測結(jié)果之間存在一定的差異。G試驗(yàn)是一種新型的抗原檢測方法［10-11］，其陽性結(jié)果可提示有侵襲性真菌感染，但只能提示有無真菌感染，不能明確是哪一種真菌感染。且G實(shí)驗(yàn)的干擾因素較多，其產(chǎn)生假陽性的主要原因有:長期血液透析的患者透析膜中含有葡聚糖成分;某些抗腫瘤藥物如香菇菌多糖、磺胺類及其他藥物的使用;靜脈輸注免疫球蛋白、白蛋白等。而造成假陰性的原因主要是臨床抗真菌的預(yù)防性用藥等［12］。因此在檢測同樣快速的情況下，anti-Eno IgG檢測對(duì)于侵襲性念珠菌病的檢測特異性更好。

綜上所述，anti-Eno IgG的檢測具有簡便、快速、特異性好及影響因素少等特點(diǎn)，是侵襲性念珠菌感染實(shí)驗(yàn)室診斷的一種新方法。

［1］ Kriengkauykiat J，Ito JI，Dadwal SS.Epidemiology and treatment approaches in management of invasive fungal infections［J］.Clin Epidemiol，2011，3:175-191.

［2］ Thampson GR，Patterson TF.Pulmonary aspergillosis［J］.Semin Respir Crit Care Med，2008，29(2):103-110.

［3］ 楊 芳，魏宗賽，葉小蘭.某醫(yī)院深部真菌感染調(diào)查分析［J］.東南國防醫(yī)藥，2009，11(5):423.424.

［4］ 胡毓安，史利寧，李芳秋，等.白色念珠菌烯醇化酶免疫磁珠定量檢測方法的建立［J］.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2014，27(6):568-572.

［5］ Delaloye J，Calandra T.Invasive candidiasis as a cause of sepsis in the critically ill patient［J］.Virulence，2014，5(1):161-169.

［6］ Clancy CJ，Nguyen MH.Finding the“missing 50%”of invasive candidiasis:how nonculture diagnostics will improve understanding of disease spectrum and transform patient care［J］.Clin Infect Dis，2013，56(9):1284-1292.

［7］ Li FQ，Ma CF，Shi LN，et al.Diagnostic value of immunoglobulin G antibodies against Candida enolase and fructose-bisphosphate aldolase for candidemia［J］.BMC Infect Dis，2013，13:253.

［8］ 孔小祥，李芳秋，王仕欽，等.抗烯醇化酶抗體檢測對(duì)侵襲性念珠菌病的診斷價(jià)值［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2011，29(6):413-415.

［9］ 孔小祥，李芳秋，王仕欽，等.用動(dòng)物模型評(píng)估抗烯醇化酶抗體測定對(duì)系統(tǒng)性白念珠菌病的診斷價(jià)值［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2011，29(1):69-71.

［10］洪原城，黃鑫成，黃種杰，等.老年肺真菌感染患者檢測葡聚糖的臨床意義［J］.東南國防醫(yī)藥，2011，13(1):28-30.

［11］ Persat F，Ranque S，Derouin F，et al.Contribution of the(1→3)-β-D-glucan assay for diagnosis of invasive fungal infections［J］.J Clin Microbiol，2008，46(3):1009-1013.

［12］廖 紅，李芳秋，張國勇，等.抗烯醇化酶抗體與1-3-β-D葡聚糖檢測診斷侵襲性念珠菌病的臨床比較［J］.中國真菌學(xué)雜志，2014，9(5):271-274.