申琳曲佳

天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院(天津300150)

牛蒡子苷濃度對(duì)其純度測(cè)定的影響

申 琳曲 佳△

天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院(天津300150)

目的:研究牛蒡子苷濃度對(duì)純度測(cè)定的影響。方法:分別研究了對(duì)照品濃度對(duì)測(cè)定的雜質(zhì)數(shù)量、主峰面積、回歸系數(shù)及純度的影響。結(jié)果:表明濃度對(duì)純度分析有較大影響，隨著濃度增加，測(cè)出的純度下降。結(jié)論:牛蒡子測(cè)定純度的適宜濃度為1.0mg/mL～2.0mg/mL。

化學(xué)對(duì)照品是新藥質(zhì)量研究、藥品質(zhì)量檢測(cè)和質(zhì)量控制使用的實(shí)物對(duì)照，可用于確定藥品的真?zhèn)?，評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量的優(yōu)劣，進(jìn)而控制藥品生產(chǎn)、供應(yīng)、儲(chǔ)存、使用過(guò)程中的質(zhì)量。用對(duì)照品作為標(biāo)準(zhǔn)參照物對(duì)藥品質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，可以保證分析測(cè)試質(zhì)量，且測(cè)試結(jié)果具有可溯源性、準(zhǔn)確性與合法性。 對(duì)照品的質(zhì)量直接影響到檢驗(yàn)樣品的結(jié)果。純度指物質(zhì)含雜質(zhì)多少的程度，是物質(zhì)單一程度的表征參數(shù)，作為傳遞量值的化學(xué)對(duì)照品，其本身的純度對(duì)被測(cè)物質(zhì)的量值的準(zhǔn)確性是至關(guān)重要的[1-5]。純度分析是化學(xué)對(duì)照品建立、標(biāo)定過(guò)程中的一個(gè)重要內(nèi)容。

在采用HPLC色譜歸一化法純度測(cè)定時(shí)，對(duì)照品濃度選擇是一個(gè)重要問(wèn)題，目前，作者未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本文以牛蒡子苷為例，就對(duì)照品濃度對(duì)液相色譜法測(cè)定純度的影響展開(kāi)研究。

1 儀器與試劑 SHIMADZU(島津)LC-2010CHT高效液相色譜儀，Solution工作站；牛蒡子苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110819-200404，供含量測(cè)定用)；甲醇為色譜純(天津市康科德科技有限公司，130812)，水為去離子水(實(shí)驗(yàn)室自備)。

2 方 法 2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取牛蒡子苷對(duì)照品適量，用甲醇制成濃度為4.1864 mg/mL的對(duì)照品溶液，然后分別稀釋為0.041864 mg/mL、0.083728 mg/mL、0.167456 mg/mL、0.41864 mg/mL、1.0466 mg/mL、2.0932 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱：DiamonsilTMC18(250×4.6 mm，5 μm)。流動(dòng)相：甲醇—水(1∶1.1)；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；進(jìn)樣量：10μL[6]。

2.3 測(cè)定方法 按照面積歸一化法計(jì)算主成分含量及雜質(zhì)含量，每個(gè)濃度的對(duì)照品溶液分別測(cè)三次，計(jì)算平均峰面積，測(cè)量精密度用相對(duì)平均偏差RAD表示。

3 結(jié) 果 3.1 濃度對(duì)雜質(zhì)數(shù)量的影響 經(jīng)查閱文獻(xiàn)及《中國(guó)藥典》，有關(guān)測(cè)定牛蒡苷含量的藥品中大部分用0.1～0.2mg/mL這個(gè)濃度。依據(jù)與取溶解牛蒡苷對(duì)照品的甲醇溶劑為空白溶液相比較，以10μL為進(jìn)樣量，將不同濃度的對(duì)照品溶液與空白溶液相比較，得出雜質(zhì)個(gè)數(shù)。表1列出了不同濃度下的對(duì)照品溶液中檢測(cè)出的雜質(zhì)數(shù)量。從表1可以看出，當(dāng)濃度較小時(shí)，檢測(cè)出雜質(zhì)的數(shù)量少，因?yàn)椴糠蛛s質(zhì)由于濃度非常小，不能被檢出。隨著對(duì)照品濃度的增大，檢測(cè)出的雜質(zhì)數(shù)量逐漸增加，當(dāng)濃度達(dá)到0.83728mg/mL時(shí)，檢測(cè)出雜質(zhì)的數(shù)量達(dá)到5個(gè)，此后，雜質(zhì)數(shù)量不再隨著濃度的增大而增加。這表明當(dāng)濃度達(dá)到0.83728mg/mL時(shí)，可以完全檢測(cè)出對(duì)照品溶液中的雜質(zhì)。圖1、2分別是對(duì)照品濃度為0.167456 mg/mL、1.0466 mg/mL時(shí)的液相色譜圖，具有代表性，且這兩個(gè)圖圖形分離度好，清晰，故選取這兩個(gè)濃度下的色譜圖。

3.2 濃度對(duì)主峰面積的影響 濃度對(duì)主峰面積的影響見(jiàn)表2。從表2中可見(jiàn)，隨著對(duì)照品濃度的增加，主成分峰面積呈等比例增加。當(dāng)濃度達(dá)到2.0932mg/mL時(shí)，峰面積與對(duì)照品濃度逐漸不再呈等比例增加。這主要是因?yàn)樽贤鈾z測(cè)器的作用原理是基于被分析試樣組分對(duì)特定波長(zhǎng)紫外光的選擇性吸收，組分濃度與吸光度的關(guān)系遵守比爾定律。比爾定律僅適用于稀溶液。隨著濃度的增加，逐漸偏離了比爾定律。

表1 對(duì)照品濃度與檢出雜質(zhì)數(shù)量

濃度(mg/mL)雜質(zhì)數(shù)量0．04186420．08372830．16745630．4186440．8372851．046652．093254．186456．27965

圖1 牛蒡子苷(濃度為0.167456 mg/mL)液相色譜圖

圖2 牛蒡子苷(濃度為1.0466 mg/mL)液相色譜圖

表2 對(duì)照品濃度與主成分峰面積

3.3 濃度對(duì)回歸系數(shù)的影響 從濃度0.83728mg/mL～6.2796mg/mL，HPLC均檢測(cè)出5個(gè)雜質(zhì)，但隨著濃度的增加其相關(guān)系數(shù)逐漸下降，不成線性。因此，選擇5～9這五個(gè)濃度作為測(cè)試點(diǎn)。根據(jù)對(duì)照品的濃度及對(duì)應(yīng)的峰面積，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，以下為選擇不同數(shù)量的試驗(yàn)點(diǎn)及其對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程及其回歸系數(shù)。從表3中可以看出，隨著試驗(yàn)點(diǎn)數(shù)的增加，回歸系數(shù)值下降。

表3 回歸系數(shù)與試驗(yàn)點(diǎn)數(shù)的關(guān)系

試驗(yàn)點(diǎn)回歸方程回歸系數(shù)5y=13667597．84x+110545．360．99986y=13451128．30x+152149．470．99987y=12143483．52x+601596．080．99788y=8996402．83x+2294172．380．98129y=7079651．83x+3768594．390．9683

3.4 濃度對(duì)純度的影響 不同濃度下計(jì)算出的主成分含量及雜質(zhì)含量結(jié)果見(jiàn)表2。從表中可以看出，隨著對(duì)照品濃度的升高，計(jì)算出的主成分含量降低。尤其是當(dāng)濃度達(dá)到6.2796mg/mL時(shí)，測(cè)出的主成分含量下降明顯。這也是因?yàn)閷?duì)照品濃度過(guò)高，主成分峰面積并沒(méi)有隨濃度呈等比例增加，而雜質(zhì)的峰面積卻呈等比例增加，當(dāng)濃度高時(shí)，現(xiàn)象尤為嚴(yán)重。因此，在選擇濃度時(shí)，不宜過(guò)高。

4 結(jié) 論 本文考察了牛蒡子苷濃度對(duì)液相色譜分析其純度的影響，結(jié)果表明濃度對(duì)純度分析有較大影響，隨著濃度增加，測(cè)出的純度下降。當(dāng)濃度過(guò)低時(shí)，部分雜質(zhì)不能被檢出。合適的測(cè)定濃度為1.0mg/mL～2.0mg/mL之間。在此范圍內(nèi)，不僅所有的雜質(zhì)都可以檢測(cè)到，而且主成分峰面積與濃度呈等比關(guān)系。

[1] 張潮林,徐文杰,沈雪梅.中國(guó)藥典2005年版中藥對(duì)照品的應(yīng)用[J].齊魯藥事,2007,26(1): 29.

[2] 王國(guó)榮,石上梅,張慶生.世界衛(wèi)生組織有關(guān)化學(xué)對(duì)照品建立、保存及分發(fā)情況介紹[J].藥物分析雜志,2002, 22(6):491.

[3] 申蘭慧,王 麗,陳國(guó)清.化學(xué)對(duì)照品色譜純度檢測(cè)的影響因素[J].中國(guó)藥事,2012,26(3):235-237.

[4] 樸君紅,崔永學(xué).藥品檢驗(yàn)中對(duì)照品使用的常見(jiàn)問(wèn)題探析.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2011,5(19):135.

[5] 孫文基.中藥新藥研究中的化學(xué)對(duì)照品[J].中國(guó)新藥雜志,2001,10(4):305.

[6] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:67.

(收稿2014-09-18；修回2014-10-23)

The study of the concentration of Arctiin on its purity determination

Second Affiliated Hospital of Tianjin University of TCM(Tianjin 300150)

Shen Lin Qu Jia

Objective：To study the influence of the concentration of Arctiin on its purity determination. Methods：The influences of concentration on the number of impurity, on the main peak area, on the regression coefficient and on the purity were studied respectively. Results：The results showed that the concentration had a large influence on the purity determination.Conclusion：The suitable concentration is between 1.0 mg/mL and 2.0 mg/mL.

Arctiin Chromatography,high pressure liquid

牛蒡子苷 色譜法，高壓液相

R94

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.03.046

△天津市藥品檢驗(yàn)所(天津 300070)