王玲玲張國(guó)良(深圳市第三人民醫(yī)院　廣東深圳　518000)

血清白介素－1β和干擾素－γ對(duì)脊柱結(jié)核的診斷價(jià)值

王玲玲張國(guó)良
(深圳市第三人民醫(yī)院廣東深圳518000)

【摘要】目的探討血清中白介素－1β(IL－1β)和干擾素(IFN－γ)檢測(cè)在脊柱結(jié)核診斷中的價(jià)值。方法采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)38例脊柱結(jié)核患者和40例健康人血清中IL－1β和IFN－γ的水平。結(jié)果脊柱結(jié)核組血清中IL－1β和IFN－γ表達(dá)水平均明顯高于健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論血清IL－1β和IFN－γ檢測(cè)有助于脊柱結(jié)核患者的早期診斷。

【關(guān)鍵詞】脊柱結(jié)核;白介素－1β;干擾素－γ;診斷

脊柱結(jié)核多起病隱匿，進(jìn)展緩慢，患者早期臨床癥狀不明顯，易造成臨床漏診或誤診，成為致殘的主要原因，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量［1］。在臨床工作中，及早診斷、盡早抗癆治療、及時(shí)手術(shù)干預(yù)能促進(jìn)患者快速康復(fù)［2］。目前細(xì)菌學(xué)檢查是脊柱結(jié)核的實(shí)驗(yàn)室診斷金標(biāo)準(zhǔn)，但培養(yǎng)周期長(zhǎng)、過(guò)程繁瑣，使其不能作為早期、快速診斷方法。酶聯(lián)免疫法(ELISA)是目前酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用最為廣泛的方法之一，已經(jīng)在國(guó)內(nèi)外用于結(jié)核病的臨床研究。此次采用該方法檢測(cè)脊柱結(jié)核患者和健康志愿者血清中白介素－1β(IL－1β)以及干擾素－γ(IFN－γ)的表達(dá)，探討IL－1β和IFN－γ對(duì)于脊柱結(jié)核早期診斷的意義。

1　資料與方法

1.1一般資料以2011年2月至2013年2月在深圳市第三人民醫(yī)院確診為脊柱結(jié)核的患者38例作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):①病灶組織標(biāo)本病理檢查確診為結(jié)核改變;②術(shù)前或術(shù)中活檢，病灶標(biāo)本培養(yǎng)出結(jié)核分枝桿菌;③脊柱結(jié)核患者抗癆治療3周內(nèi);④經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)鑒定，除外非結(jié)核分枝桿菌感染。排除標(biāo)準(zhǔn):①艾滋病抗體攜帶者;②年齡＜14周歲。其中男性20例，女性18例，平均45.2歲(25～66歲);發(fā)病部位:頸椎3例，胸椎16例，腰椎17例，骶椎2例。同時(shí)隨機(jī)選取健康志愿者40例作為對(duì)照，其中男性20例，女性20例，平均44.8歲(26～60歲);兩組患者年齡、性別等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2研究方法兩組患者均于晨起空腹采集靜脈血5 ml，1 000 r/min離心5 min，分離血清，－80℃冰箱冷凍保存，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)IFN－γ 和IL－1β濃度，嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，試劑盒購(gòu)自美國(guó)R＆D公司。主要步驟:選取包被IFN－γ和IL－1β抗體的酶標(biāo)板，室溫平衡，然后加入外周血清100 μl，37℃孵育2 h，PBS洗滌3次，再加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗，37℃孵育1 h，PBS洗滌3次，加入底物四甲基聯(lián)苯胺(TMB)進(jìn)行顯色，利用Beckman公司DTX－880酶標(biāo)儀檢測(cè)OD 450 nm，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算樣品的細(xì)胞因子濃度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，定量資料以(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

脊柱結(jié)核組血清IL－1β及IFN－γ水平明顯高于健康對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1　兩組血清IL－1β和IFN－γ水平比較(±s，pg/ml)

組別　n　IL－1β　IFN－γ脊柱結(jié)核組38　9.23±3.16　 53.64±23.32健康對(duì)照組40　3.52±2.41　 25.58±14.65

3　討論

根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)結(jié)果，全球每年結(jié)核病新發(fā)病例約800萬(wàn)人，最少300萬(wàn)人死于該病。我國(guó)近年結(jié)核病發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)，每年新增結(jié)核患者約150萬(wàn)人。脊柱結(jié)核又名Pott病，是脊柱椎體感染結(jié)核桿菌后形成的一種破壞性骨關(guān)節(jié)疾病。該病發(fā)病率在骨與關(guān)節(jié)結(jié)核中最高［3］。在成年患者中，以腰椎結(jié)核最為常見(jiàn)，胸椎結(jié)核次之，頸椎、骶椎結(jié)核相對(duì)少見(jiàn)。由于該病病程較長(zhǎng)，發(fā)展速度緩慢，表現(xiàn)為發(fā)病部位疼痛、肌肉痙攣、活動(dòng)受限。嚴(yán)重者可以導(dǎo)致脊柱塌陷、變形、椎管狹窄，從而引起脊髓、神經(jīng)根的壓迫，最終導(dǎo)致截癱及肢體功能喪失。在臨床上常常誤診為椎間盤(pán)突出、脊柱腫瘤、強(qiáng)直性脊柱炎等疾病。在診斷方面，典型病例及中晚期患者不難診斷。對(duì)于早期患者，由于癥狀輕微，體征較少，即使放射學(xué)檢查，也很難確診。

目前臨床工作中，脊柱結(jié)核的診斷主要依據(jù)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查以及病理學(xué)檢查。而細(xì)菌學(xué)檢查周期較長(zhǎng)，約需4～8周，患者往往已經(jīng)出院還尚未得到檢測(cè)結(jié)果。在實(shí)驗(yàn)室檢查中，紅細(xì)胞沉降率的檢測(cè)，在結(jié)核發(fā)病早期具有較高的臨床意義，但不具有特異性。而結(jié)核抗體的測(cè)定，雖然特異性較高，但缺乏較高的敏感性［4］。PPD試驗(yàn)屬于體外試驗(yàn)，對(duì)檢查結(jié)果判別常常受觀察者主觀因素影響。在結(jié)核病高發(fā)地區(qū)，隨著卡介苗預(yù)防接種的普及，假陽(yáng)性增多。PPD試驗(yàn)結(jié)果也會(huì)受機(jī)體免疫狀態(tài)等多種因素影響，使其在結(jié)核的診斷中靈敏度及特異性均較低［5］。

酶聯(lián)免疫法的原理是采用抗原與抗體的特異反應(yīng)，將待測(cè)標(biāo)本與酶連接，通過(guò)酶與底物產(chǎn)生的顏色反應(yīng)，用于定量測(cè)定。白細(xì)胞介素1(IL－1)屬于前炎性細(xì)胞因子，曾被稱(chēng)為淋巴細(xì)胞因子。主要由單核或巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞分泌，能誘導(dǎo)激活多種免疫和炎癥細(xì)胞，其本身具有多種生物學(xué)功能。人體內(nèi)IL－1活性基本由IL－1β介導(dǎo)，IL－1β能通過(guò)自分泌或者旁分泌刺激其他細(xì)胞因子以及炎癥遞質(zhì)的產(chǎn)生，為T(mén)淋巴細(xì)胞激活提供第二信號(hào)，促進(jìn)B細(xì)胞的增殖、分化，介導(dǎo)免疫球蛋白的分泌。由此激活補(bǔ)體，增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫介導(dǎo)的組織損傷過(guò)程［6］。結(jié)核桿菌屬于細(xì)胞內(nèi)致病菌，主要寄生在單核巨噬細(xì)胞中。當(dāng)罹患脊柱結(jié)核時(shí)，結(jié)核菌抗原刺激單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生高水平的IL－1β，從而激活上述機(jī)制，引起組織損傷及一系列的結(jié)核病理改變［7］。

干擾素是一組以糖蛋白為主的多種功能活性蛋白質(zhì)，因?yàn)楦蓴_病毒復(fù)制而得名。依據(jù)產(chǎn)生細(xì)胞的不同分為α干擾素、β干擾素以及γ干擾素3類(lèi)。γ干擾素(IFN－γ)可以調(diào)節(jié)與免疫相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，從而協(xié)調(diào)機(jī)體的免疫反應(yīng)，是機(jī)體內(nèi)非常重要的細(xì)胞因子。當(dāng)機(jī)體罹患結(jié)核菌感染時(shí)，免疫應(yīng)答系統(tǒng)會(huì)被激活。而結(jié)核菌的感染，導(dǎo)致特異性中央型記憶細(xì)胞、效應(yīng)型記憶細(xì)胞在體內(nèi)較長(zhǎng)期存在。在反復(fù)受到抗原刺激時(shí)迅速增殖，大量釋放γ－干擾素［8－9〗。國(guó)外研制的結(jié)核桿菌抗原特異性γ干擾素釋放試驗(yàn)試劑盒，正是利用這一原理，檢測(cè)結(jié)核桿菌特異的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，用于結(jié)核桿菌感染的輔助診斷。目前已經(jīng)取得了較好的臨床應(yīng)用效果［10］。

綜上所述，當(dāng)機(jī)體罹患脊柱結(jié)核時(shí)，血清中白介素－1β(IL－1β)和干擾素－γ(IFN－γ)的水平明顯高于正常人，說(shuō)明IL－1β和IFN－γ參與了脊柱結(jié)核的免疫應(yīng)答。通過(guò)檢測(cè)二者的血清水平變化，對(duì)脊柱結(jié)核的早期診斷具有一定的指導(dǎo)意義。

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The diagnostic value of serum IL－1β and IFN－γ in patients with spinal tuberculosis

Wang Lingling，Zhang Guoliang
(The Third People’s Hospital of Shenzhen City，Shenzhen 51800，China)

【Abstract】Objective To investigate the diagnostic value of serum IL－1β and IFN－γ in patients with spinal tuberculosis.Methods The serum IL－1β and IFN－γ levels in 38 patients with spinal tuberculosis and 40 healthy controls were detected by ELISA.Results Spinal tuberculosis group，serum levels of IL－1β and IFN－γ expression were significantly higher than the control group，and the differences were statistically significant(P＜0.05).Conclusion Detection of serum IL－1β and IFN－γ levels may be helpful in early diagnosing of spinal tuberculosis.

【Key words】spinal tuberculosis; IL－1β; IFN－γ; diagnosis

(收稿日期:2015－02－16)

基金項(xiàng)目:廣東省自然科學(xué)基金課題(408068628042)。

doi:10.3969/j.issn.1004－437X.2015.06.006

【中圖分類(lèi)號(hào)】R 446.6