李 新，姜 勝，侯金龍，范宏剛，王洪斌

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030)

小型豬復(fù)合麻醉劑對(duì)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)p-p38MAPK蛋白表達(dá)的影響

李 新，姜 勝，侯金龍，范宏剛，王洪斌*

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030)

為研究小型豬復(fù)合麻醉劑(XFM)對(duì)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)p-p38蛋白表達(dá)的影響，將30只大鼠分為對(duì)照組(C組)和麻醉劑組(M組)，M組又分為4個(gè)亞組：M1組(注射XFM后大鼠翻正反射消失即刻)、M2組(注射XFM后大鼠翻正反射消失后1 h)、M3組(注射XFM后大鼠翻正反射恢復(fù)即刻)和M4組(注射XFM后大鼠翻正反射恢復(fù)后1 h)，各組大鼠到達(dá)預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)后分別采取腦組織，應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)腦內(nèi)p38 mRNA轉(zhuǎn)錄量，應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中p-p38蛋白的表達(dá)量。大鼠注射XFM后，與對(duì)照組比較，試驗(yàn)組大鼠大腦皮層和丘腦p38 mRNA轉(zhuǎn)錄量顯著降低(P<0.05)，在蘇醒過(guò)程中有所恢復(fù)，但仍顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；大腦皮層和丘腦內(nèi)p-p38蛋白的相對(duì)表達(dá)量，在M1、M2組的時(shí)間點(diǎn)顯著低于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)；大鼠注射XFM后，與對(duì)照組比較，試驗(yàn)組大鼠小腦、海馬、腦干內(nèi)p38 mRNA轉(zhuǎn)錄量顯著升高(P<0.05)，在蘇醒過(guò)程中仍顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；小腦、海馬、腦干內(nèi)p-p38蛋白的表達(dá)量，在M1組、M2組、M3組顯著升高，與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05或P<0.01)，在M4組表達(dá)量下降，與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果表明，XFM誘導(dǎo)大鼠大腦皮層、丘腦內(nèi)p38 mRNA及p-p38蛋白表達(dá)下調(diào)，p38 mRNA及磷酸化蛋白的改變可能是XFM作用的機(jī)制之一。

小型豬復(fù)合麻醉劑；中樞神經(jīng)系統(tǒng)；p-p38蛋白；p38 mRNA

小型豬專用復(fù)合麻醉劑(XFM)對(duì)小型豬具有誘導(dǎo)迅速，麻醉維持時(shí)間適宜，蘇醒平穩(wěn)，麻醉效果確實(shí)，無(wú)明顯副作用的特點(diǎn)[1-2]。但是其麻醉作用的相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。近年來(lái)，絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)級(jí)聯(lián)反應(yīng)途徑與麻醉的關(guān)系逐漸成為眾多學(xué)者研究麻醉與鎮(zhèn)痛機(jī)制的熱點(diǎn)，有研究報(bào)道全身麻醉劑與中樞神經(jīng)系統(tǒng)中MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)關(guān)系密切[3-4]，而且發(fā)現(xiàn)麻醉劑(如異氟醚、七氟醚和異丙酚等)能夠影響p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[5-8]，由此推測(cè)p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能與麻醉作用機(jī)制相關(guān)。本試驗(yàn)旨在通過(guò)研究XFM對(duì)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)途徑中p-p38表達(dá)的影響，探討p-p38與XFM麻醉的關(guān)系，為深入研究p38蛋白調(diào)控XFM麻醉機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

小型豬復(fù)合麻醉劑(XFM)由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)外科教研室提供；一抗為兔抗p-p38(Tyr182)IgG(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)ZS-101759)，小鼠抗β-action IgG(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)TA-09)；二抗為辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)ZB-2301)，辣根酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)ZB-2305)；Blue PlusTMProtein Marker(14～100 ku)(北京全式金生物技術(shù)有限公司，目錄號(hào)DM101)；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型)(碧云天生物技術(shù)研究所，產(chǎn)品編號(hào)P0010S)，超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒(碧云天生物技術(shù)研究所，貨號(hào)P0018)，Western blot及IP細(xì)胞裂解液(碧云天生物技術(shù)研究所，貨號(hào)P0013)；PVDF膜(0.45 μm)購(gòu)自Sigma公司。Rever Tra Ace qPCR RT Master Mix with東洋紡(上海)生物科技有限公司(貨號(hào)FSQ-301)，LightCycler?Capillaries(20 μL)，美國(guó) Roche 公司(貨號(hào) 04929292001)；Epoch 酶標(biāo)儀(美國(guó)BioTek公司)，蛋白電泳轉(zhuǎn)印系統(tǒng)(美國(guó)Bio-Rad公司)；德國(guó)Sigma 3-30K高速低溫離心機(jī)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

30只Wistar大鼠，雌雄兼有，體重210 g ±20 g，12～14周齡，購(gòu)于吉林省長(zhǎng)春市伊斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。隨機(jī)選取6只作為對(duì)照組(C組)；其余24只大鼠作為麻醉劑組(M組)，M組又隨機(jī)均分為4個(gè)亞組：M1組(注射XFM后大鼠翻正反射消失即刻)、M2組(注射XFM后大鼠翻正反射消失后1 h)、M3組(注射XFM后大鼠翻正反射恢復(fù)即刻)和M4組(注射XFM后大鼠翻正反射恢復(fù)后1 h)，每組6只。C組大鼠注射等量的生理鹽水。大鼠置于安靜的環(huán)境中飼養(yǎng)，自由采食和飲水，試驗(yàn)前12 h限飼不限水。

1.3 樣品采集

各組大鼠到達(dá)預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)后分別斷頭處死，取出全腦，用4 ℃生理鹽水沖洗血跡，在生理鹽水冰面上，用DEPC處理過(guò)的器械迅速分取大腦皮質(zhì)、小腦、腦干、海馬及丘腦。將采集的樣品裝入去RNA酶凍存管中，液氮速凍后，-80 ℃保存?zhèn)溆茫謩e用于p38 mRNA及p-p38蛋白含量的測(cè)定。

1.4 引物設(shè)計(jì)與合成

根據(jù) GenBank 中公布大鼠p38(NM_017347.2)基因序列，大鼠β-actin(NM_031144.2)內(nèi)參基因序列，使用Primer 5.0進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，委托生工生物工程(上海)有限公司合成引物(表1)。

表1 引物序列

1.5 樣品檢測(cè)

1.5.1 大腦組織總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄 按照操作說(shuō)明采用Trizol 法提取不同腦區(qū)總RNA，并用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)總RNA OD260 nm/280 nm比值，測(cè)得 RNA純度和濃度；并通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) RNA的完整性。

根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書步驟，將提取的mRNA反轉(zhuǎn)錄成單鏈cDNA。反轉(zhuǎn)錄操作步驟為：Total RNA 0.5 pg～0.5 μg(本試驗(yàn)根據(jù)測(cè)得的RNA濃度將反轉(zhuǎn)錄的RNA量統(tǒng)一調(diào)整為 0.5 μg左右)，4×DN Master Mix(已添加gDNA Remover)2 μL，加Nuclease-free Water適量補(bǔ)齊總體積為8 μL，37 ℃ 水浴 5 min，加5×RT Master Mix II 2 μL，將反應(yīng)液混勻后按以下溫度進(jìn)行反應(yīng)：37 ℃ 15 min，50 ℃ 5 min，98 ℃ 5 min，4 ℃ hold，將反應(yīng)完成的cDNA 4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.2 熒光定量 PCR反應(yīng)和標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 PCR條件優(yōu)化如下，反應(yīng)體系為 SYBR?Premix Ex TaqTMII(2×)10 μL，上游引物(10 μmol·L-1)0.8 μL，下游引物(10 μmol·L-1)0.8 μL，cDNA 2 μL，ddH2O(滅菌)6.4 μL。β-actin與p38的反應(yīng)條件：95 ℃ 30 s預(yù)變性；95 ℃ 5 s、57 ℃ 20 s、72 ℃ 20 s共45個(gè)循環(huán)；熔解曲線分析：95 ℃ 0 s，20 ℃· s-1；65 ℃ 15 s，20 ℃· s-1；95 ℃ 0 s，0.1 ℃· s-1。對(duì)PCR產(chǎn)物于1%瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，檢測(cè)引物特異性。隨機(jī)取1個(gè)cDNA樣品，以10倍梯度倍比稀釋5個(gè)梯度，以此作為標(biāo)準(zhǔn)品模板分別制作β-actin和p38的標(biāo)準(zhǔn)曲線，各樣品均按上述條件檢測(cè)，每個(gè)樣品 3個(gè)重復(fù)，以均值計(jì)算結(jié)果。

1.5.3 腦內(nèi)p38蛋白提取及蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度測(cè)定 將樣品稱重后轉(zhuǎn)移至玻璃勻漿器中，按照每10 mg組織加入70～120 μL裂解液的比例加入蛋白裂解液，在冰浴中充分勻漿研磨后將懸液轉(zhuǎn)移至EP管中，4 ℃ 10 000 g離心5 min，取上清。采用BCA法測(cè)定樣品中總蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度。

本試驗(yàn)選擇RIPA蛋白裂解液裂解方法提取組織蛋白質(zhì)，采用BCA法檢測(cè)蛋白質(zhì)濃度，使用酶標(biāo)儀在562 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度值，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品蛋白質(zhì)濃度。

1.5.4 蛋白質(zhì)電泳與印跡 試驗(yàn)選擇制備10%的分離膠和 5%的積層膠分離蛋白質(zhì)。選擇濕轉(zhuǎn)法進(jìn)行免疫印跡轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜條件為恒流300 mA轉(zhuǎn)膜50 min。封閉轉(zhuǎn)印PVDF膜選擇5%的脫脂奶粉，室溫?fù)u床搖動(dòng)封閉2 h。隨后將膜轉(zhuǎn)入一抗(β-actin的稀釋比例為1∶500，p-p38的稀釋比例為1∶400，一抗稀釋液為5%的脫脂乳)4 ℃ 搖動(dòng)孵育過(guò)夜。一抗孵育結(jié)束后，用TBST在室溫下?lián)u床上漂洗3次，每次5 min。隨后二抗(羊抗兔二抗稀釋比例為1∶3 000，羊抗小鼠二抗稀釋比例為1∶4 000，二抗稀釋液為TBST)室溫孵育2 h，用TBST在室溫下?lián)u床上漂洗3次，每次15 min結(jié)束后使用ECL發(fā)光試劑盒檢測(cè)目的蛋白，在暗室中顯影，曝光，保存。

1.6 結(jié)果分析與數(shù)據(jù)處理

2 結(jié) 果

2.1 RNA純度與完整性

將提取的總RNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳鑒定，可見(jiàn) 28S與18S RNA 條帶清晰，無(wú)明顯降解，每個(gè)樣品測(cè)OD值均在1.8～2.0，提取的 RNA樣品質(zhì)量符合RT-PCR試驗(yàn)要求。

2.2 蛋白質(zhì)免疫印跡

提取大鼠腦組織總蛋白質(zhì)，測(cè)定濃度。各個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣品處理后，加適量樣品緩沖液煮沸，進(jìn)行電泳，轉(zhuǎn)膜，后經(jīng)一抗、二抗體孵育后，ECL發(fā)光，顯影，曝光后的X光片結(jié)果見(jiàn)圖1，結(jié)果顯示，條帶清晰，背景干擾小。

圖1 各組大鼠在應(yīng)用XFM后β-actin蛋白和p-p38蛋白的免疫印跡結(jié)果Fig.1 Result of β-actin protein and p-p38 protein Western blot

大鼠注射XFM后，與對(duì)照組比較，試驗(yàn)組大鼠大腦皮層p38 mRNA轉(zhuǎn)錄量(表2)顯著降低(P<0.05)，在蘇醒過(guò)程中有所恢復(fù)，但仍顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；大腦皮層p-p38蛋白的相對(duì)表達(dá)量(表3)，在翻正反射消失(M1組)、翻正反射消失后1 h(M2組)的時(shí)間點(diǎn)顯著降低，與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01)，翻正反射恢復(fù)(M3組)的時(shí)間點(diǎn)有所恢復(fù)，但沒(méi)有恢復(fù)到正常水平，與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)，在翻正反射恢復(fù)后1 h(M4組)的時(shí)間點(diǎn)恢復(fù)到正常的水平，與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。

2.3 小型豬復(fù)合麻醉劑對(duì)大鼠腦內(nèi)p38 mRNA及p38蛋白表達(dá)的影響

大鼠注射XFM后，與對(duì)照組比較，試驗(yàn)組大鼠小腦p38 mRNA轉(zhuǎn)錄量(表2)顯著升高(P<0.05)，在蘇醒過(guò)程中仍顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；小腦p-p38蛋白的表達(dá)量(表3)，在翻正反射消失(M1組)、翻正反射消失后1 h(M2組)、翻正反射恢復(fù)(M3組)的時(shí)間點(diǎn)顯著升高，與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01)，在翻正反射恢復(fù)后1 h(M4組)表達(dá)量下降，與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。

大鼠注射XFM后，與對(duì)照組比較，試驗(yàn)組大鼠海馬p38 mRNA轉(zhuǎn)錄量(表2)顯著升高(P<0.05)，在蘇醒過(guò)程中仍顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；海馬p-p38蛋白的表達(dá)量(表3)，在翻正反射消失(M1組)時(shí)間點(diǎn)和翻正反射消失后1 h(M2組)的時(shí)間點(diǎn)顯著升高，與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)，在翻正反射恢復(fù)(M3組)的時(shí)間點(diǎn)顯著升高，與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01)，在翻正反射恢復(fù)后1 h(M4組)表達(dá)量下降，對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。

大鼠注射XFM后，與對(duì)照組比較，試驗(yàn)組大鼠腦干p38 mRNA轉(zhuǎn)錄量(表2)在翻正反射消失后1 h(M2組)的時(shí)間點(diǎn)顯著升高，與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)；腦干p-p38蛋白的表達(dá)量(表3)，在麻醉過(guò)程中至翻正反射恢復(fù)時(shí)顯著高于對(duì)照組，差異顯著(P<0.05或P<0.01)，在翻正反射恢復(fù)后1 h(M4組)恢復(fù)到正常水平，與對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05)。

大鼠注射XFM后，與對(duì)照組比較，試驗(yàn)組大鼠丘腦內(nèi)p38 mRNA轉(zhuǎn)錄量顯著降低(P<0.05)，在蘇醒過(guò)程中翻正反射恢復(fù)及恢復(fù)后1 h有所恢復(fù)，仍顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；丘腦內(nèi)p-p38的表達(dá)量(表3)，在翻正反射消失(M1組)、翻正反射消失后1 h(M2組)、翻正反射恢復(fù)(M3組)和翻正反射恢復(fù)后1 h(M4組)的時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量顯著下降，與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01)。

表2 XFM對(duì)大鼠不同腦區(qū)p38 mRNA轉(zhuǎn)錄量的影響

表3 XFM對(duì)大鼠不同腦區(qū)p-p38蛋白表達(dá)的影響

3 討 論

p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮重要的作用，p38蛋白激酶是絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中的重要成員，參與細(xì)胞增殖、凋亡和分化等多種細(xì)胞生物學(xué)反應(yīng)，已被證實(shí)在神經(jīng)損傷導(dǎo)致的痛覺(jué)敏化的形成和維持中起著關(guān)鍵作用[9]，近年來(lái)研究還發(fā)現(xiàn)p38MAPK信號(hào)通路在長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)調(diào)控學(xué)習(xí)與記憶功能的作用機(jī)制中發(fā)揮重要作用[10]。

在本試驗(yàn)中，大鼠根據(jù)不同組別進(jìn)行處理后，分別在不同的時(shí)間點(diǎn)采取大腦皮層、小腦、海馬、腦干和丘腦，應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)腦內(nèi)p38 mRNA轉(zhuǎn)錄量，應(yīng)用Western blot方法檢測(cè)p-p38蛋白的相對(duì)表達(dá)量，麻醉劑組試驗(yàn)結(jié)果顯示注射小型豬復(fù)合麻醉劑后，在麻醉過(guò)程中大腦皮層和丘腦的p38 mRNA 和p-p38蛋白的相對(duì)表達(dá)量顯著降低，而小腦、海馬和腦干中p38 mRNA 和p-p38蛋白的相對(duì)表達(dá)量顯著升高。結(jié)果提示XFM對(duì)大腦皮層和丘腦的p-p38蛋白的相對(duì)表達(dá)量有抑制作用，對(duì)小腦、海馬和腦干的p-p38蛋白的相對(duì)表達(dá)量有促進(jìn)作用。以往的研究表明，α2受體激動(dòng)藥右美托咪定能夠抑制p38MAPK信號(hào)通路的激活，減少異氟醚所引起的神經(jīng)元凋亡[11]，這與本試驗(yàn)中XFM抑制大腦皮層p-p38蛋白的含量的結(jié)果相近。吸入麻醉劑異氟醚能夠提高海馬腦區(qū)p38蛋白的含量而激活p38MAPK信號(hào)通路[12]，這與本試驗(yàn)中XFM激活海馬腦區(qū)p-p38蛋白的含量的結(jié)果一致。本試驗(yàn)結(jié)果表明，注射XFM產(chǎn)生的麻醉作用與影響p-p38蛋白的相對(duì)表達(dá)量有關(guān)。

4 結(jié) 論

p38蛋白參與了小型豬復(fù)合麻醉劑(XFM)的麻醉過(guò)程。XFM能夠抑制大腦皮層和丘腦p-p38蛋白的表達(dá)，提高小腦、海馬和腦干p-p38蛋白的表達(dá)，這可能是其產(chǎn)生麻醉作用的機(jī)制之一。

[1] 王洪斌，范宏剛，盧德章，等.噻環(huán)乙胺對(duì)大鼠不同腦區(qū)NOS活性及NO產(chǎn)量和cGMP含量的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2008，39(11)：1599-1605. WANG H B，F(xiàn)AN H G，LU D Z，et al.Effects of tiletamine on the activity of NOS，NO production，and cGMP content in rat different brain regions[J].ActaVeterinariaetZootechnicaSinica， 2008，39(11)：1599-1605.(in Chinese)

[2] 范宏剛，盧德章，胡 魁，等.小型豬復(fù)合麻醉劑對(duì)小型豬血流動(dòng)力學(xué)及血漿中腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2009，40(8)：1244-1248. FAN H G，LU D Z，HU K，et al.Effects of the combined anaesthetic for miniature pigs on hemodynamics and renin-angiotensin-aldosterone-system in miniature pigs[J].ActaVeterinariaetZootechnicaSinica，2009，40(8)：1244-1248.(in Chinese)

[3] 張麗華，侯蕾娜，鄧立琴，等.脊髓背角 p38MAPK 活化在瑞芬太尼誘發(fā)術(shù)后痛覺(jué)過(guò)敏中的作用[J].中國(guó)疼痛醫(yī)學(xué)雜志，2014，20(9)：620-624. ZHANG L H，HOU L N，DENG L Q，et al.The role of p38MAPK activation in spinal cord dorsal horn in reminfentanil induced postoperative hyperalgesia[J].ChineseJournalofPainMedicine，2014，20 (9)：620-624.(in Chinese)

[4] 王 強(qiáng)，由振東，石雪銀，等.異氟醚吸入對(duì)新生大鼠認(rèn)知功能的影響及p38MAPK抑制劑的干預(yù)作用[J].山東醫(yī)藥，2011，51(19)：21-23. WANG Q，YOU Z D，SHI X Y，et al.Effects of isoflurane on the cognitive function of neonatal rats and intervention roles of p38MAPK inhibitor[J].ShandongMedicalJournal，2011，51(19)：21-23.(in Chinese)

[5] LYCNCH M A.Long-term potentiation and memory[J].PhysiolRev，2004，84(1)：87-136.

[6] 李玉娟，柳垂亮，張 靜，等.異氟醚和七氟醚對(duì)新生大鼠皮質(zhì)凋亡以及JNK和p38表達(dá)的不同影響[J].中國(guó)病理生理雜志，2011，27(1)：72-76. LI Y J，LIU C L，ZHANG J，et al.Effects of isoflurane and sevoflurane on apoptosis of cortical neuron in neonatal rats and the role of MAPKs pathway[J].ChineseJournalofPathophysiology，2011，27(1)：72-76.(in Chinese)

[7] 曹慧靈，但 伶，鄧必高.異丙酚抑制脂多糖致大鼠腦損傷時(shí)p38MAPK的活化[J].中國(guó)病理生理雜志，2011，27(8)：1639-1642. CAO H L，DAN L，DENG B G.Propofol inhibits activation of p38 MAPK in rat brain tissues with LPS-induced brain injury[J].ChineseJournalofPathophysiology，2011，27(8)：1639-1642.(in Chinese)

[8] 潘彩飛，祝勝美.異丙酚通過(guò)抑制p38激活下調(diào)氨處理的大鼠腦星型膠質(zhì)細(xì)胞AQP4的表達(dá)并減輕細(xì)胞水腫[J].中國(guó)病理生理雜志，2010，26(1)：96-100. PAN C F，ZHU S M.Propofol attenuates aquaporin-4 over-expression through p38 pathway on ammonia-induced neocortical astrocyte in rats[J].ChineseJournalofPathophysiology，2010，26(1)：96-100.(in Chinese)

[9] JI R R，KAWASAKI Y，ZHUANG Z Y，et al.Protein kinases as potential targets for the treatment of pathological pain[J].HandbExpPharmacol，2007(177)：359-389.

[10] COOGAN A N，O’NEILL L A，O’CONNOR J J.The P38 mitogen-activated protein kinase inhibitor SB203580 antagonizes the inhibitory effects of interleukin-1β on long-term potentiation in the rat dentate gyrusinvitro[J].Neuroscience，1999，93(1)：57-69.

[11] 王 飛，李玉娟，曾敏婷，等.右美托咪啶通過(guò)抑制 p38 和 JNK 活化減少異氟醚誘導(dǎo)的新生大鼠海馬神經(jīng)元凋亡[J].中國(guó)病理生理雜志，2013，29(9)：1651-1656. WANG F，LI Y J，ZENG M T，et al.Dexmedetomidine reduced isoflurane- induced neuroapoptosis by inhibiting activation of p38 and JNK proteins in hippocampus of neonatal rats[J].ChineseJournalofPathophysiology，2013，29(9)：1651-1656.(in Chinese)

[12] 劉永哲，高明龍，張 宏，等.異氟醚和七氟醚對(duì)腦室內(nèi)注射β-淀粉樣蛋白單體的老年大鼠海馬內(nèi)磷酸化JNK p38及tau蛋白的影響[J].中國(guó)藥物與臨床，2009，9(7)：553-556. LIU Y Z，GAO M L，ZHANG H，et al.Effect of isoflurane and sevoflurane on hippocampal expressions of p-JNK，p-p38 and p-tau in aged rats after intracerebroventricular injection of amyloid-beta protein[J].ChineseRemedies&Clinics，2009，9(7)：553-556.(in Chinese)

(編輯 白永平)

Effects of the Combined Anaesthetic for Miniature Pigs on the Expression of p-p38MAPK in Central Nervous System of Rats

LI Xin，JIANG Sheng，HOU Jin-long，F(xiàn)AN Hong-gang，WANG Hong-bin*

(VeterinaryMedicineCollege，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China)

In order to investigate the expression of p-p38 in central nervous system in rats anesthetized with the Combined Anaesthetic for Miniature Pigs (XFM)，30 rats were divided randomly into two groups：control group and XFM group.XFM group consisted of four subgroups：M1 subgroup (rats received XFM intraperitoneally and then waiting the disappearance of right reflection)；M2 subgroup (rats received XFM intraperitoneally and then waiting for 1 h after the disappearance of right reflection)；M3 subgroup (rats received XFM intraperitoneally and then waiting the recovery of right reflection) and M4 subgroup (rats received XFM intraperitoneally and then waiting for 1 h after the recovery of right reflection).The brain tissues were taken when reaching each time point.With the method of RT-PCR，expression of p38 mRNA were detected，and the expression of p-p38 in central nervous system was detected with Western blot.The results showed that，compared with the control group，the transcription ofp38 mRNA on cerebellum and thalamus in experiment groups were significant lower than that in control group (P<0.05)，andp38 mRNA increased at group M3 and group M4，but significantly lower than control group (P<0.05).In group M1 and group M2，the expression of p-p38 in cerebellum and thalamus were significantly lower than that in the control group (P<0.05)，but the expression of p-p38 in cerebellum，hippocampus，brainstem increased significantly after administration of XFM (P<0.05) in group M1，group M2，and group M3，compared with the control group，and in group M4，the expression of p-p38 decreased，were no difference with the control group (P>0.05).These results indicated that the decrease of the expression of p-p38 in cerebellum and thalamus were induced by XFM，and these changes ofp38 mRNA and p-p38 maybe one of the anaesthetic mechanisms of XFM.

XFM；central nervous system；p-p38；p38 mRNA

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.07.024

2014-11-10

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31272617；31472245)

李 新(1988-)，女，碩士生，主要從事動(dòng)物麻醉與鎮(zhèn)痛的研究，E-mail：747309128@qq.com

*通信作者：王洪斌，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail：hbwang1940@163.com

S859.791

A

0366-6964(2015)07-1253-06