胡才友 黃東挺 周博峰 黃春麗 余天智 唐鳳川 葛 琳 潘尚領(lǐng) 彭均華

廣西壯族自治區(qū)江濱醫(yī)院(南寧530021) 梁慶華 龐國防 呂澤平△

BDNF rs6265和COMT rs4680與廣西壯族散發(fā)性帕金森病的相關(guān)性研究*

胡才友 黃東挺 周博峰 黃春麗 余天智 唐鳳川 葛 琳▲潘尚領(lǐng)▲彭均華▲

廣西壯族自治區(qū)江濱醫(yī)院(南寧530021) 梁慶華 龐國防 呂澤平△

目的：探討腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF) rs6265和兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT )rs4680的多態(tài)性與廣西壯族散發(fā)性帕金森病(PD)的相關(guān)性。方法：使用PCR-RFLP法對112例壯族散發(fā)性PD患者的rs6265和rs4680位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，并與156例健康壯族老年人比較，分析這兩個多態(tài)與PD的相關(guān)性。結(jié)果：除PD早發(fā)亞組rs6265基因型GG的頻率高于同年齡段對照組(P<0.05)，兩組間的等位基因及基因型頻率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。兩位點(diǎn)A等位基因罹患PD的風(fēng)險與正常人群無異，OR分別為1.212(P= 0.572)和0.985(P= 0.427)。結(jié)論：rs6265和rs4680與廣西壯族散發(fā)性PD的遺傳易感缺乏關(guān)聯(lián)性。

帕金森綜合征( PD)是一種復(fù)雜的中樞神經(jīng)退行性疾病，遺傳因素可能在其發(fā)病中起重要作用。因此，對PD易感位點(diǎn)的篩查是其研究熱點(diǎn)之一。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)基因位于11p13，第196位核酸的G > A單核苷酸替換會導(dǎo)致其第66位纈氨酸(Val)變?yōu)榈鞍彼?Met)，即Val66Met(dbSNP: rs6265)。此多態(tài)可改變神經(jīng)元BDNF的分泌及其在細(xì)胞內(nèi)的定位，與PD關(guān)系密切[1]。兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)基因位于22q11，可催化DA的降解。DA的失衡導(dǎo)致前額葉皮質(zhì)執(zhí)行能力缺陷及認(rèn)知障礙。COMT基因的472G>A(dbSNP: rs4680)，使158位的氨基酸Val變成Met，酶活性降低約40%。理論上Val攜帶者可較快地降解腦內(nèi)源性DA，認(rèn)知能力相對差，而Met攜帶者認(rèn)知則較好。已證實(shí)Val與白種人PD發(fā)病密切相關(guān)[2]。rs6265和rs4680與PD的關(guān)聯(lián)研究已在白人及主要東亞群體中進(jìn)行，但目前尚未得到一致性的結(jié)論[1～4]。本研究擬了解這兩個多態(tài)與壯族PD的關(guān)聯(lián)。

對象與方法

1 研究對象 ①PD組：為2011年5月至2013年12月我院收治的壯族散發(fā)PD患者，無家族史，共112例(男59例，女53例)，年齡64.29 ± 12.93，以50歲為界分為早發(fā)及晚發(fā)亞組。②對照組：健康壯族中老年人，156例(男84例，女72例)，年齡62.85 ± 11.62歲。研究對象知情并同意。

2 研究方法

2.1 標(biāo)本采集： 空腹采靜脈血8ml，其中3ml以ACD抗凝血用于DNA提取，余5ml用于提取血清及血脂測定。

2.2 DNA提?。翰捎媒?jīng)典的酚-氯仿法。

2.3 血脂測定：總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)采用酶法，高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)采用酶聯(lián)免疫一步法。

2.4 SNP基因分型：rs4680采用PCR-RFLP方法，PCR引物、分型方法及結(jié)果判讀見文獻(xiàn)[2]。rs6265采用ARMS-PCR方法。詳見文獻(xiàn)[5]。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件?；蝾l率用直接計(jì)數(shù)法計(jì)算。兩組計(jì)量資料的組間比較采用t檢驗(yàn)，兩組以上比較采用方差分析。分類資料組間比較采用卡方檢驗(yàn)。

結(jié) 果

1 研究對象的基本特征 PD組和對照組在性別及年齡構(gòu)成方面無明顯差異(P>0.05)。PD組飲酒者的比例、BMI、收縮壓、TC、TG、及LDL均明顯高于對照組(P均< 0.05)，而吸煙者的比例小于對照組(P<0.05)。

2 基因分型結(jié)果 2個SNP的等位基因及基因型頻率分布見附表。校正混雜因素后，除了PD早發(fā)亞組rs6265基因型GG的頻率高于同年齡段對照組，兩組間(包括總體、早發(fā)、晚發(fā)亞組)的等位基因及基因型頻率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。關(guān)聯(lián)分析顯示，兩位點(diǎn)A等位基因攜帶者罹患PD的風(fēng)險與正常人群無異，OR分別為1.212(95%CI: 0.845-1.346，P= 0.572)和0.985(95%CI: 0.776-1.231，P= 0.427)。

附表 廣西壯族散發(fā)性PD rs6265

注：與對照組相應(yīng)亞組的相同基因型或等位基因比較，*P<0.05

討 論

BDNF主要參與認(rèn)知過程。影像學(xué)顯示，正常美國白人中Met攜帶者海馬的體積比非Met攜帶者小11%，伴記憶功能下降[1,4]。Guerini等[3]發(fā)現(xiàn)rs6265 AA純合子在意大利PD患者中的頻率明顯高于一般人群，并伴有認(rèn)知障礙。但本研究沒發(fā)現(xiàn)rs6265在壯族PD患者和對照組之間的差異及其與PD的相關(guān)性。

COMT Val可較快地降解前額葉內(nèi)源性DA，執(zhí)行能力及認(rèn)知能力就相對差，而進(jìn)化而來的Met個體的認(rèn)知能力則好得多。使用COMT抑制劑，可以增強(qiáng)工作記憶，進(jìn)一步支持了其在認(rèn)知中的重要作用[2]。另外，該多態(tài)目前僅出現(xiàn)于人類，可以解釋為何人類具有其他生物無以倫比的認(rèn)知能力。AD、PD等患者攜帶Val的頻率比自然人群高，而認(rèn)知良好的老年人則攜帶Met比較多。然而，相反的結(jié)果認(rèn)為低活性的Met等位基因增加了PD的風(fēng)險。而在最近的一項(xiàng)Meta分析中，作者既沒發(fā)現(xiàn)rs4680是PD的高危因素，也與PD的各臨床表型無關(guān)[2,6]。本研究結(jié)果沒發(fā)現(xiàn)rs4680與壯族PD的相關(guān)性，進(jìn)一步說明該位點(diǎn)對PD的影響輕微。

綜合上述，盡管有數(shù)據(jù)表明BDNF rs6265 和COMT rs4680對個體的認(rèn)知有著深刻的影響，而且PD的發(fā)生可能存在一定的遺傳背景，但目前尚缺乏強(qiáng)有力的依據(jù)闡明這兩個多態(tài)位點(diǎn)與PD之間的關(guān)聯(lián)性。

[1] Egan MF, Kojima M, Callicott J,etal. The BDNF val66met polymorphism affects activity-dependent secretion of BDNF and human memory and hippocampal function [J]. Cell, 2003, 112(2), 257-269.

[2] Chen J, Lipska BK, Halim N,etal. Functional analysis of genetic variation in catechol-O-methyltransferase (COMT): effects on mRNA, protein, and enzyme activity in postmortem human brain [J]. Am J Hum Genet, 2004, 75(5): 807-821.

[3] Guerini F, Beghi E, Riboldazzi G,etal. BDNF Val66Met polymorphism is associated with cognitive impairment in Italian patients with Parkinson’s disease [J]. Eur J Neurol, 2009, 16 (11):1240-1245.

[4] Lee YH, Song GG. BDNF 196 G/A and 270 C/T polymorphisms and susceptibility to Parkinson's disease: a meta-analysis [J]. J Mot Behav, 2014, 46(1):59-66.

[5] 梁慶華，龐國防，韋 勇，等. BDNF Val66Met多態(tài)性與長壽群體代謝綜合征危險因素的相關(guān)性研究[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2014，32(10)：736-740.

[6] Jiménez-Jiménez FJ, Alonso-Navarro H, García-Martín E,etal. COMT gene and risk for Parkinson's disease: a systematic review and meta-analysis[J]. Pharmacogenet Genomics, 2014, 24(7):331-339.

(收稿：2014-12-20)

Association study between rs6265 and rs4680 on sporadic Parkinson’s disease in Zhuang population

Liang QinghuaPang Gufang Lv Zhepinget al

Department of Neurology, Jiangbin Hospital (Nanning 530021)

Objectives: To investigate the correlation between BDNF rs6265 and COMT rs4680 on sporadic Parkinson’s disease (PD) in Zhuangs. Methods: PCR-RFLP was employed to genotype rs6265 and rs4680 for 112 sporadic PD patients and 156 controls. Results: No difference on allelic and genotypic frequencies was found between the two groups (allP>0.05) under any genetic models except that the GG genotype of rs6265 was higher in the early-onset PD subgroup as compared to controls (P<0.05). Similar PD risk for A and non-A allele carriers was found on both SNP (rs6265: OR = 1.212,P= 0.572; rs4680: OR = 0.985,P= 0.427). Conclusions: No association between rs6265 and rs4680 and the susceptibility of sporadic PD in Zhuangs.

Parkinson disease Brain-derived neurotrophic factor @COMT

*國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31160209)

廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2011GXNSFA018278)

帕金森病 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子 @兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶

R742.5

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.04.015

△通訊作者

▲廣西醫(yī)科大學(xué)病理生理學(xué)教研室