林 蔚，肖 平，吳祖常

（佛山市第一人民醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究所，廣東 528000）

HLA－B27抗原檢測在強(qiáng)直性脊柱炎診斷中的意義

林 蔚，肖 平，吳祖常

（佛山市第一人民醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究所，廣東 528000）

目的探討HLA－B27抗原表達(dá)與強(qiáng)直性脊柱炎（AS）的相關(guān)性，及其對AS診斷和鑒別診斷的意義。方法采用流式細(xì)胞術(shù)檢測人類白細(xì)胞抗原B27（HLA－B27），納入研究的包括354例疑似AS患者、35例確診AS患者和30例確診類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者。結(jié)果354例疑似AS患者的HLA－B27總陽性率為22.0%，確診AS患者HLA－B27的陽性率為85.7%，均高于RA組（P＜0.05）。AS患者中男性占77.1%，女性占22.9%，且發(fā)病年齡主要集中在青壯年時期；AS患者HLA－B27抗原檢測用于AS診斷的靈敏度為85.7%，特異度為100.0%。結(jié)論HLA－B27抗原的檢測對AS患者的早期診斷和鑒別診斷具有重要意義。

強(qiáng)直性脊柱炎； 人類白細(xì)胞抗原B27； 流式細(xì)胞術(shù)

強(qiáng)直性脊柱炎（AS）是一種高致殘性的自身免疫性疾病，病因未明，主要癥狀為骶髂關(guān)節(jié)痛，其次是髖關(guān)節(jié)痛，腰腿痛常伴晨僵，夜間加重，活動后減輕等，多見于青壯年男性，16～32歲發(fā)病較多，多數(shù)患者呈隱匿發(fā)病，常常不能引起人們的重視。該疾病的診斷主要依據(jù)臨床癥狀和影像學(xué)檢查，但在疾病早期骨骼未發(fā)生改變，影像學(xué)特征不明顯，臨床癥狀與其他骨性疾病相似，容易發(fā)生漏診和誤診，且誤診者以類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）患者居多。國內(nèi)的流行病學(xué)調(diào)查表明，AS在中國漢族人群中的發(fā)病率為0.2%～0.45%［1］。家族調(diào)查結(jié)果顯示，HLA－B27陽性的AS患者一級親屬中，近半數(shù)HLA－B27抗原陽性，其中又有近半數(shù)罹患本??；同卵雙生子HLA－B27陽性和AS的一致率則超過50%，提示本病與HLA－B27陽性具有相關(guān)性。因此，HLA－B27抗原的檢測在該病的診斷及鑒別診斷中有重要意義。流式細(xì)胞儀使用單克隆抗體及熒光素，可多參數(shù)同時測定，不需要分離淋巴細(xì)胞，操作簡便，具有高靈敏度、特異度，標(biāo)本之間、不同實驗室之間可重復(fù)性好，因此被廣泛用于HLA－B27抗原的檢測。本研究旨在探討本地區(qū)AS發(fā)病與HLA－B27抗原表達(dá)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 按照1984年紐約修訂的AS診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］，選取2012年在本院確診為AS的35例患者，其中男28例、女7例，作為AS組；按照1987年美國風(fēng)濕學(xué)會所修正的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)，選取同期于本院確診為RA的30例患者，其中男12例、女18例，作為RA組。另外，選取具有腰腿疼痛癥狀的本院同期疑似AS患者354例作為疑似AS組。

1.2 儀器與試劑 使用的主要儀器為美國BD公司FACS Calibur流式細(xì)胞儀。試劑主要為美國Becton Dickinson公司的HLA－B27試劑盒，其中包括單克隆熒光抗體HLA－B27 FITC/CD3PE，HLA－B27標(biāo)準(zhǔn)微球，溶血素。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集與處理 采集靜脈血2mL，用肝素抗凝。在測定管中加入30μL抗HLA－B27FITC/CD3PE抗體和60 μL肝素抗凝全血，混勻后室溫避光染色15min。加入2mL溶血素，300×g離心5min，棄上清。用PBS洗滌1次，300×g離心5min，棄上清。加0.5mL含1%多聚甲醛的PBS懸浮細(xì)胞，置于4～8℃冰箱待測。

1.3.2 檢測與結(jié)果判斷 （1）用HLA－B27試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)微球調(diào)整儀器設(shè)置，設(shè)定界值。（2）流式細(xì)胞術(shù)法結(jié)果判定：用HLA－B27軟件獲取15 000個細(xì)胞，HLA－B27自動軟件首先通過FSC－SSC這兩個參數(shù)的組合，區(qū)分經(jīng)裂解紅細(xì)胞處理后外周血白細(xì)胞中淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒細(xì)胞三個群體。然后在前向角FSC－熒光FL2點圖上確定CD3強(qiáng)陽性細(xì)胞群體的位置，設(shè)定一個CD3＋T淋巴細(xì)胞門，軟件隨后自動檢測T淋巴細(xì)胞B27的表達(dá)強(qiáng)度，如果大于或等于儀器設(shè)定的界值報告陽性，否則報告陰性。見附圖1（見《國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)分析采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 AS患者的年齡及性別分布情況 AS患者中男性多于女性，男女比例為3.4∶1.0，其中以青壯年的發(fā)病率比較高，見表1。

2.2 HLA－B27陽性率的比較 AS患者HLA－B27陽性率為85.7%，高于RA患者（P＜0.05）。AS患者HLA－B27抗原的陰性率為14.3%。HLA－B27抗原的靈敏度為85.7%，特異度為100.0%。見表2。

3 討 論

HLA－B27抗原是一種免疫遺傳標(biāo)記抗原，為顯性遺傳。在免疫系統(tǒng)中主要負(fù)責(zé)細(xì)胞間的相互識別，誘導(dǎo)免疫反應(yīng)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。HLA－B27分子可以和一些自身肽段結(jié)合，形成復(fù)合體在自身細(xì)胞膜上表達(dá)后，能被相應(yīng)的CD8＋T細(xì)胞識別，從而導(dǎo)致T細(xì)胞對自身靶細(xì)胞的殺傷，造成組織變性，器官受損。AS的病因目前尚未完全闡明，大多認(rèn)為與遺傳、感染、免疫、環(huán)境等因素有關(guān)［3－4］。AS呈常染色體顯性遺傳，家族聚集性是該病的重要特征，由此表明遺傳因素在發(fā)病機(jī)制中的重要作用［5］。HLA－B27抗原陽性的患者應(yīng)進(jìn)行家系調(diào)查，有利于AS的早期發(fā)現(xiàn)，并對早期患者采取預(yù)防或治療措施［6］，如對HLA－B27抗原陽性但無癥狀者或AS患者的子女可及時預(yù)防和治療呼吸道，消化道的細(xì)菌感染以免誘發(fā)本病。

本研究中確診為AS的受檢者男女之比為3.4∶1.0，而我國近年男、女發(fā)病比例從2∶1至10∶1均有報道，這種差異除可能與地區(qū)、種族的不同有關(guān)外，還可能與女性AS患者病情相對較輕，醫(yī)生對女性患者的臨床表現(xiàn)認(rèn)識不足導(dǎo)致診斷率低有關(guān)［7－8］。在不同年齡組中，＜40歲的AS患者占77.1%，≥40歲AS患者占22.9%，這提示AS的發(fā)病與年齡和性別有重要關(guān)聯(lián)，即青壯年男性的發(fā)病率比較高。本研究中，HLA－B27抗原與AS高度相關(guān)，因此建議腰背痛3個月以上，伴晨僵及活動后疼痛減輕的患者應(yīng)及時進(jìn)行HLA－B27抗原的檢測，若陽性者，則進(jìn)行骶髂關(guān)節(jié)CT檢查，以達(dá)到早期診斷和早期治療。

AS以脊柱為主要病變部位，累及骶髖關(guān)節(jié)和周圍大關(guān)節(jié)，該病起病隱匿、病程長、遷延不愈、致殘率高［9］，因臨床癥狀不典型，而紐約標(biāo)準(zhǔn)的條件又過于嚴(yán)格，當(dāng)影像學(xué)有所表現(xiàn)時，往往疾病已存在相當(dāng)長時間，造成該病誤診漏診率高，因此HLA－B27的檢測已成為臨床診斷和鑒別診斷AS的重要指標(biāo)［10］。目前檢測HLA－B27的方法有微量淋巴細(xì)胞毒試驗（MLCT）、ELISA法、流式細(xì)胞儀法、序列特異引物引導(dǎo)的PCR反應(yīng)等。其中MLCT方法操作雖較為簡單，但實驗條件難以控制，加之HLA高度多態(tài)性等因素的影響，易出現(xiàn)誤判錯判；ELISA法操作簡單、快速，無需特殊儀器，適合用于大樣本量的篩選試驗［11］；后2種方法實驗要求高，且均需價格昂貴儀器而難以普及。洪俊等［12］認(rèn)為流式細(xì)胞儀檢測HLA－B27抗原的表達(dá)無須分離淋巴細(xì)胞且操作簡單，比傳統(tǒng)的MLCT節(jié)約時間，且檢測結(jié)果更敏感、準(zhǔn)確、客觀、容易判讀，標(biāo)準(zhǔn)化程度高［13］。因此，目前國際上常規(guī)用流式細(xì)胞法檢測 HLAB27。本研究中檢測HLA－B27抗原的靈敏度和特異度均較高，分別為85.7%和100.0%。

應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測HLA－B27為AS的早期診斷、鑒別診斷、早期治療提供一個重要手段，但不是特異的，并不能對AS確診，X線平片、CT等影像學(xué)表現(xiàn)具有肯定的診斷意義。本研究顯示，雖然HLA－B27陽性結(jié)果與臨床確診結(jié)果具有較高的一致性，但是在目前臨床診斷過程中，HLA－B27檢測結(jié)果并不起決定性作用，陽性結(jié)果中仍有一定數(shù)量的病例未被確診為AS、本實驗室未被確診為AS的病例HLA－B27均為陰性，可能與病例數(shù)和地域有關(guān)，同時，被確診的病例中，也有一定數(shù)量為陰性結(jié)果。雖然HLA－B27陽性不能作為AS的診斷依據(jù)，但對早期及不典型AS的診斷有重要的參考價值，對于1級和輕度的2級改變X線平片往往難以肯定診斷，需要結(jié)合臨床病史和HLA－B27檢測結(jié)果才能確診。所以對疑為AS患者進(jìn)行HLA－B27抗原的檢測有助于提高早期診斷AS的可能性，為此類患者的診斷和鑒別診斷提供線索，可彌補(bǔ)X線不能早期診斷AS的不足［11］，可見HLA－B27和影像學(xué)檢測對AS的診斷是互補(bǔ)的。

總之，通過用流式細(xì)胞儀來檢測HLA－B27抗原，結(jié)合臨床表現(xiàn)和影像學(xué)檢查，不僅可以提高診斷AS的準(zhǔn)確性，還可以作為早期診斷AS和鑒別診斷的指標(biāo)，使更多的患者得到早期診斷，盡早進(jìn)行預(yù)防或及時治療。

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The clinical significance of HLA－B27 antigen detection in the diagnosis of ankylosing spondylitis

Lin Wei，Xiao Ping，Wu Zuchang
（Institute of Clinical Medicine，the First People′s Hospital of Foshan City，F(xiàn)oshan，Guangdong，528000，China）

ObjectiveTo investigate the correlation between the expression of human leukocyte antigen B27（HLA－B27）antigen and ankylosing spondylitis（AS），and its implications for the diagnosis and differential diagnosis of AS.MethodsFlow cytometry was used to detect HLA－B27.354suspected AS patients，35patients final diagnosed with AS and 30patients diagnosed with rheumatoid arthritis（RA）were enrolled in the study.ResultsThe positive rate of HLA－B27in 354patients with suspected AS was 22.0%，in patients diagnosed with AS was 85.7%，which was higher than the RA group（P＜0.05）.In AS patients，Males accounted for 77.1%，females accounted for 22.9%，and the patients′age mainly concentrated in youth.The sensitivity and specificity of HLA－B27test was 85.7%and 100.0%respectively in the diagnosis of AS.ConclusionHLA－B27antigen detection is important for early diagnosis and differential diagnosis of AS patients.

ankylosing spondylitis； human leukocyte antigen B27； flow cytometry

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.03.036

A

1673－4130（2015）03－0371－02

2014－10－08）

林蔚，女，主管檢驗技師，主要從事流式細(xì)胞技術(shù)的研究。