謝欣彤 吳漫茵 林 瑤 蔡 颯 潘 宇 付小兵

（1. 深圳大學(xué)醫(yī)學(xué)部，廣東 深圳 518060；2. 廣東省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究中心，廣東 廣州 510080；3．解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院全軍創(chuàng)傷修復(fù)與組織再生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨皮膚損傷修復(fù)與組織再生北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100048）

機(jī)體發(fā)育過程中，干細(xì)胞通過程序性分化過程產(chǎn)生具有特定形態(tài)和功能的體細(xì)胞。細(xì)胞再程序化是通過外源性導(dǎo)入轉(zhuǎn)錄因子等方法，使之重新獲得分化前的多能性（即去分化）或改變其特性進(jìn)而轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N組織細(xì)胞（即轉(zhuǎn)分化）[1]。通過轉(zhuǎn)染4種轉(zhuǎn)錄因子（Oc t4、Sox 2、c-My c和Klf4，OSKM），可誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞再程序化為具有胚胎干細(xì)胞特性的誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells, iPSCs）[2]。Kim等[3-4]通過導(dǎo)入特定細(xì)胞分化所需的關(guān)鍵因子直接誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞再程序化為神經(jīng)、心肌等細(xì)胞。細(xì)胞再程序化技術(shù)日漸成為獲得各種體細(xì)胞的重要途徑。然而，目前細(xì)胞再程序化技術(shù)效率還很低下，這可能與再程序化發(fā)生過程中表觀遺傳學(xué)調(diào)控所致的細(xì)胞分化命運(yùn)的隨機(jī)性有關(guān)。細(xì)胞分化過程中，表觀遺傳學(xué)調(diào)控使染色質(zhì)變得致密，多能性因子的表達(dá)位點(diǎn)被封閉；而再程序化使染色質(zhì)重構(gòu)為疏松狀態(tài)，重新暴露多能因子的結(jié)合位點(diǎn)，這些位點(diǎn)的利用效率決定再程序化的效率。事實(shí)上在誘導(dǎo)過程中所生成的部分再程序化的前iPSCs（pre-iPSCs）的數(shù)量遠(yuǎn)高于完全再程序化的細(xì)胞數(shù)量（如iPSCs）。Pre-iPSCs無多向分化潛能，不表達(dá)或低表達(dá)核心多能性基因，雖然表觀遺傳修飾向iPSCs轉(zhuǎn)變，仍保留分化狀態(tài)的表觀遺傳修飾。能否使pre-iPSCs完成再程序化過程變?yōu)閕PSCs依賴于隨機(jī)的表觀遺傳事件。因此，探討再程序化過程中的表觀遺傳修飾機(jī)制將對(duì)提高再程序化效率提供重要依據(jù)。本文將近年表觀遺傳修飾在再程序化過程中的研究進(jìn)展，及其在提高細(xì)胞再程序化效率中的應(yīng)用情況綜述如下。

1 表觀遺傳修飾

表觀遺傳修飾即在DNA序列不發(fā)生改變的情況下，基因表達(dá)和細(xì)胞表型產(chǎn)生可逆性可遺傳改變，主要包括DNA甲基化、組蛋白修飾和染色質(zhì)重塑，以及mic ro RNA等非編碼RNA的調(diào)控等。研究表明，在再程序化過程中表觀遺傳修飾可重新激活內(nèi)源性多能性相關(guān)基因、建立開放的染色質(zhì)狀態(tài)、并抑制種系特異性基因，有利于部分再程序化狀態(tài)向完全再程序化狀態(tài)轉(zhuǎn)變，從而提高再程序化效率。

2 DNA甲基化修飾

DNA甲基化是指甲基被選擇性轉(zhuǎn)移至胞嘧啶的過程。對(duì)于脊椎動(dòng)物，DNA甲基化主要發(fā)生的位點(diǎn)是胞苷磷酸鳥苷（Cp G），成簇Cp G所在區(qū)域被稱為Cp G島。許多基因啟動(dòng)子都包含Cp G島，啟動(dòng)子Cp G島的DNA甲基化可影響蛋白質(zhì)與DNA的相互作用，導(dǎo)致基因沉默；而基因激活時(shí)啟動(dòng)子Cp G島往往是去甲基化狀態(tài)。這些過程主要受DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（Dnmt）和DNA脫甲基酶（d MTase）的調(diào)控。目前認(rèn)識(shí)到，甲基化轉(zhuǎn)移酶家族成員包括Dnmt l、Dnmt 2、Dnmt 3a、Dnmt 3b 和 Dnmt 3L[5]，其中 Dnmt l、Dnmt 3a、Dnmt 3b是DNA甲基化所必需的3種酶。Dnmt1維持細(xì)胞分裂過程中DNA復(fù)制時(shí)半甲基化DNA的進(jìn)一步全甲基化，它以非甲基化DNA為底物，識(shí)別已甲基化的親代鏈, 使相應(yīng)位置的胞嘧啶甲基化。Dnmt3a、Dnmt3b參與建立重頭DNA甲基化，先半甲基化DNA，繼而全甲基化，其中Dnmt3a似乎是Dnmt1、Dnmt3b的共調(diào)節(jié)因子。在機(jī)體發(fā)育過程中，祖生殖細(xì)胞幾乎完全地去甲基化，如受精卵最初幾次卵裂時(shí)，其甲基化水平極低。而胚胎發(fā)育及干細(xì)胞分化的過程中，可以觀察到大量的重新建立的甲基化。DNA甲基化促進(jìn)細(xì)胞分化而使細(xì)胞的多能性逐漸減少，據(jù)此可推斷，細(xì)胞再程序化過程中這種表觀遺傳修飾需被逆轉(zhuǎn)。在再程序化的過程中，Dnmt的總體表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致多能性因子基因啟動(dòng)子區(qū)幾乎被完全去甲基化。因此，iPSCs誘導(dǎo)因子啟動(dòng)子區(qū)的甲基化水平也成為評(píng)估再程序化誘導(dǎo)效果的重要指標(biāo)之一。

目前研究顯示，通過調(diào)控相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平可有效影響再程序化過程。通過抑制Dnmt1可降低多能性轉(zhuǎn)錄因子Oct4、Nanog、Sox2啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平，從而促進(jìn)細(xì)胞再程序化效率。在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（mouse embryonic fibroblasts，MEFs）誘導(dǎo)成iPSCs的過程中加入Dnmt1的抑制物5-氮雜胞苷（5-Aza）后，甲基化水平降低，再程序化效率可提高將近10倍[6]。利用siRNA干擾Dnmt1的表達(dá), 也可明顯提高再程序化效率。d MTase作用與Dnmt相反，抑制d MTase可促進(jìn)DNA甲基化，因而可能阻礙細(xì)胞再程序化。Tet1（ten-eleven translocation-1）能夠催化5-甲基胞嘧啶（5-mC）轉(zhuǎn)化為5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC），參與DNA 去甲基化，從而維持再程序化因子Nanog的表達(dá)。Tet1敲除可導(dǎo)致Nanog基因啟動(dòng)子DNA甲基化，繼而通過抑制Nanog基因表達(dá)降低iPSCs誘導(dǎo)效率[7]?；罨T導(dǎo)胞嘧啶核苷脫氨酶（ac tivation-induced c ytidine deaminase，AID）可促進(jìn)多能性基因啟動(dòng)子去甲基化。在鼠胚胎干細(xì)胞與人成纖維細(xì)胞融合的過程中，利用微小RNA（siRNA）抑制AID表達(dá)，DNA去甲基化減少，從而抑制Oc t4和Nanog基因的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞融合的再程序化效率顯著下降[7]。

因此，多能性因子基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化水平是影響細(xì)胞再程序化的一個(gè)非常重要的表觀遺傳修飾因素，通過Dnmt及d MTase的調(diào)控改變相關(guān)基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)，有利于提高再程序化的誘導(dǎo)效率[6-7]。

3 通過組蛋白修飾提高再程序化誘導(dǎo)效率

組蛋白的轉(zhuǎn)錄后修飾包括在酶的作用下進(jìn)行甲基化、乙?；矁r(jià)修飾，是作用于染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)。組蛋白乙?；谷旧w處于開放狀態(tài)從而利于基因轉(zhuǎn)錄；組蛋白甲基化能抑制或激活轉(zhuǎn)錄，取決于甲基化作用的位點(diǎn)和程度。

3.1 組蛋白乙?；?組蛋白乙?；稽c(diǎn)位于核心組蛋白N末端尾部保守的賴氨酸殘基，在組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（HAT）和組蛋白去乙?；福℉DAC）的調(diào)控下進(jìn)行。HAT將乙?；D(zhuǎn)移到核心組蛋白氨基末端尾部保守的賴氨酸殘基上，中和了組蛋白的正電荷，使組蛋白與帶負(fù)電荷的DNA相互作用減弱，導(dǎo)致染色體結(jié)構(gòu)變得疏松，這種松弛的結(jié)構(gòu)促進(jìn)了DNA 分子與各種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的接觸, 促進(jìn)基因的轉(zhuǎn)錄過程[8]。相反，HDAC催化組蛋白上的乙?；D(zhuǎn)移，增加了組蛋白和DNA的相互作用，染色體結(jié)構(gòu)變得緊密從而抑制轉(zhuǎn)錄。在胚胎干細(xì)胞分化早期，可見廣泛的組織特異性基因組蛋白乙?；皆龈撸鸾M織特異性基因的表達(dá)上調(diào)。未分化細(xì)胞的多能性基因（Oc t4、 Nanog、 Rex 3等）的組蛋白處于高水平乙?；逊只?xì)胞多能性基因的組蛋白乙?；瘏s處于很低水平。再程序化是體細(xì)胞重獲多能性的過程，因此體細(xì)胞再程序化過程中增強(qiáng)組蛋白乙?；苁辜尤氲亩嗄苄赞D(zhuǎn)錄因子與DNA分子更充分的接觸，有利于多能性基因表達(dá)上調(diào)，有利于體細(xì)胞再程序化。

組蛋白去乙?；敢种苿┛稍黾咏M蛋白乙?；?。丙戊酸（VPA）是一種組蛋白去乙?；敢种苿?lián)合OSKM因子誘導(dǎo)MEFs時(shí)，可顯著地把iPSCs的誘導(dǎo)效率提高超過100倍。在沒有c-Myc誘導(dǎo)的情況下，VPA聯(lián)合Oc t4、Sox2、Klf4因子誘導(dǎo)MEFs能顯著地把iPSCs的誘導(dǎo)效率提高50倍，甚至高于僅用OSKM 4因子的誘導(dǎo)效率[6]。其機(jī)制可能與VPA上調(diào)了胚胎干細(xì)胞特異性基因的表達(dá)有關(guān)。例如，Rex3和Zfp7基因在未分化的胚胎干細(xì)胞中表達(dá)，在未轉(zhuǎn)染的MEFs細(xì)胞中不表達(dá)，使用VPA處理已轉(zhuǎn)染的MEFs，Rex 3 、Zfp7基因表達(dá)上調(diào)超過20倍[6]。此外，VPA在僅有Oc t4、Klf4因子轉(zhuǎn)導(dǎo)的情況下也能提高iPSCs誘導(dǎo)效率[9]。另外一種非特異性組蛋白去乙?；敢种苿┒∷徕c（Na B或SB）也常被用于提高再程序化效率。NaB可增強(qiáng)miR302/367簇啟動(dòng)子中Oct4的轉(zhuǎn)錄活性從而提高miR302/367簇的轉(zhuǎn)錄水平，很大程度地促進(jìn)人成纖維細(xì)胞再程序化產(chǎn)生iPSCs的過程[10]。3種組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA, VPA和SB中，SB能最顯著地提高再程序化效率。將pre-iPSCs暴露于SB，4種再程序化因子和細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)相關(guān)性增加，能有效地促進(jìn)部分再程序化的pre-iPSCs向完全再程序化的iPSCs轉(zhuǎn)變，顯著提高iPSCs誘導(dǎo)效率[11]。因此，調(diào)控相關(guān)基因特定位點(diǎn)組蛋白乙?；灿型蔀榇龠M(jìn)體細(xì)胞再程序化的有效手段。

3.2 組蛋白甲基化 組蛋白甲基化通常發(fā)生在組蛋白H3、H4的賴氨酸（K）和精氨酸（R）殘基上，包括單甲基化、雙甲基化和三甲基化，受組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶（histone methyltransferase，HMT）和組蛋白脫甲基酶（histone demethylase，HDM）調(diào)控。組蛋白甲基化對(duì)基因轉(zhuǎn)錄活性的影響取決于甲基化的位點(diǎn)和甲基原子團(tuán)的數(shù)量，比如H3K9、H3K 27和H3K 79位點(diǎn)的甲基化發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制作用，然而H3K 4位點(diǎn)的甲基化則有利于激活轉(zhuǎn)錄。體細(xì)胞多能性相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域多表現(xiàn)為H3K4去甲基化、H3K 27甲基化和H3K 9甲基化。胚胎干細(xì)胞無論是靠近啟動(dòng)子區(qū)還是基因間區(qū)域，均呈現(xiàn)高密度H3K4me3單價(jià)鍵或 H3K 4me3、H3K 27me3二價(jià)鍵。在再程序化過程中，處于開放染色質(zhì)狀態(tài)的基因被H3K 4me3或H3K 4me3、H3K27me3二價(jià)標(biāo)記，沉默的基因只有H3K27me3標(biāo)記。

多能干細(xì)胞的組蛋白修飾模式與胚胎干細(xì)胞相似而與體細(xì)胞相反，調(diào)控特定的組蛋白甲基化狀態(tài)形成可促進(jìn)部分再程序化細(xì)胞發(fā)生完全再程序化。H3K 9位點(diǎn)甲基化是pre-iPSCs向iPSCs轉(zhuǎn)化的主要表觀遺傳障礙。目前報(bào)道的H3K 9轉(zhuǎn)移酶主要有：Setdb1、Ehmt2（G9a）和Suv39h1/2。敲除H3K 9甲基轉(zhuǎn)移酶Setdb1可促進(jìn)preiPSCs進(jìn)一步再程序化為iPSCs，提高iPSCs的誘導(dǎo)效率[12]。BIX01294是一種H3K 9甲基轉(zhuǎn)移酶G9a抑制劑，可通過抑制G9a而減少H3K9me2水平。在該抑制劑的共同作用下，Oc t4和Klf4兩種因子即可誘導(dǎo)MEFs發(fā)生再程序化[13]。另一種H3K 9甲基轉(zhuǎn)移酶SUV 39h1受到抑制同樣能有效地提高再程序化效率[14]。與H3K9位點(diǎn)相似，組蛋白H3K 27位點(diǎn)甲基化同樣可抑制轉(zhuǎn)錄，降低H3K27甲基化則有利于再程序化因子表達(dá)。EZH2是一種重要的H3K 27甲基轉(zhuǎn)移酶，磷酸化EZH2可使其活性受到抑制，從而降低H3K27甲基化水平，增加再程序化基因的表達(dá)，有利于提高再程序化效率[15]。然而，H3K27脫甲基酶，如Utx，可減少H3K 27甲基化水平，并通過與再程序化因子相互作用，在體細(xì)胞再程序化過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用；缺少Utx則抑制再程序化中多能性基因重激活的過程，導(dǎo)致再程序化缺陷[16]。組蛋白上另一個(gè)與H3K27位點(diǎn)甲基化效果相似的位點(diǎn)是H3K 79。用sh RNA在再程序化早期抑制H3K 79甲基轉(zhuǎn)移酶（Dot1L），可致Nanog和Lin28因子表達(dá)增加，甚至替代Klf4和c-Myc 因子的作用，促進(jìn)再程序化[14]。

與以上3個(gè)位點(diǎn)甲基化作用相反，H3K4位點(diǎn)的甲基化則有利于激活轉(zhuǎn)錄。KDM5B是一種H3K 4的脫甲基酶，降低H3K4位點(diǎn)甲基化水平，因而阻礙再程序化過程，減少iPSCs的誘導(dǎo)效率；抑制KDM5B則可提高Pou5f1、Tbx 3等胚胎干細(xì)胞特異性基因的啟動(dòng)子H3K 4me3水平，從而提高iPSCs的誘導(dǎo)效率[17]。

4 染色質(zhì)重塑對(duì)再程序化的促進(jìn)作用

染色質(zhì)重塑是指染色質(zhì)位置和結(jié)構(gòu)上發(fā)生的復(fù)雜變化過程，參與調(diào)節(jié)該過程的主要因子統(tǒng)稱為染色質(zhì)重塑復(fù)合物，主要包括染色質(zhì)共價(jià)修飾復(fù)合物（histonemodifying complex，HMC）和ATP 依賴的染色質(zhì)重塑酶（ATP-dependent chromatin remodeling complex，ADCRC）。HMC包括對(duì)組蛋白的尾部進(jìn)行乙?；⒓谆裙矁r(jià)修飾的相關(guān)酶類。ADCRC主要有三大家族：SWI/SNF、ISWI和 CHD（chromodomain helicase DNA-binding）。這些酶通過與組蛋白甲基化或乙?；嚓P(guān)酶類的相互作用，利用ATP水解釋放出來的能量導(dǎo)致染色體結(jié)構(gòu)變得疏松，使得轉(zhuǎn)錄因子在細(xì)胞再程序化過程中對(duì)DNA/染色質(zhì)有可接近性，促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。在細(xì)胞分化過程中，染色質(zhì)重塑導(dǎo)致染色質(zhì)結(jié)構(gòu)逐漸變得致密。體細(xì)胞再程序化過程中，染色質(zhì)緊密程度下降從而向開放的染色質(zhì)狀態(tài)改變，但局部的染色質(zhì)重塑導(dǎo)致種系基因沉默及多能性相關(guān)基因激活。目前多個(gè)報(bào)道證實(shí)，通過調(diào)解ATP 依賴的染色質(zhì)重塑酶可使染色質(zhì)向開放狀態(tài)改變從而促進(jìn)再程序化的過程。

SWI/SNF家族是目前研究較多的ATP 依賴的染色質(zhì)重塑酶，它在體細(xì)胞再程序化和維持干細(xì)胞多能性中有著重要的作用。從分子水平上，SWI/SNF家族由BAF組成，BAF155和BRG1協(xié)同地促進(jìn)DNA在多能性相關(guān)基因Oct4、Nanog、Rex1 啟動(dòng)子的去甲基化，增強(qiáng)了再程序化因子在多能性基因啟動(dòng)子的結(jié)合活性，從而促進(jìn)了再程序化過程[18]。ISWI的作用方式則大為不同，通過動(dòng)員核小體和控制分隔核小體的連接DNA的長(zhǎng)度，保持核小體合適的間距來調(diào)控轉(zhuǎn)錄，從而影響再程序化效率[19]。CHD1對(duì)于維持胚胎干細(xì)胞多能性及維持其染色質(zhì)開放狀態(tài)是必需的。通過調(diào)控多能基因的染色質(zhì)開放程度促進(jìn)再程序化。下調(diào)CHD1的表達(dá)可導(dǎo)致再程序化MEFs產(chǎn)生的iPSCs克隆的數(shù)量明顯減少，再程序化效率下降[20]。因此，染色質(zhì)體結(jié)構(gòu)的開放程度影響再程序化過程，染色質(zhì)重塑酶類可作為提高再程序化效率的重要靶點(diǎn)。

5 miRNA調(diào)控提高再程序化效率

非編碼RNA（noncoding RNA，nc RNA），尤其是微小RNA（micro RNA, miRNA），作為一種重要的基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因素，在再程序化過程中發(fā)揮的重要作用受到普遍關(guān)注。miRNA通過堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式識(shí)別靶mRNA，通過沉默復(fù)合體降解靶mRNA而阻遏其表達(dá)。miRNA與細(xì)胞發(fā)育的時(shí)序調(diào)控有關(guān)，參與調(diào)控細(xì)胞發(fā)育、細(xì)胞增殖和凋亡等過程。最近，越來越多的研究表明，胚胎干細(xì)胞特異性的miRNA在維持iPSCs多能性的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中扮演著重要角色，能明顯提高再程序化效率[21-24]。

目前被報(bào)道較多的胚胎特異性miRNA主要有miR-302-367 簇，miR-371/290簇（miR-371存在于人的細(xì)胞中，鼠細(xì)胞中的同源是miR-290簇），以及miR-17–92 簇。在體細(xì)胞再程序化過程中，胚胎特異性miRNA能阻遏以細(xì)胞周期基因及多能性基因Oct4、 Nanog、 Sox2、 Klf4和Myc為靶向的轉(zhuǎn)錄抑制因子，促進(jìn)多能性基因的表達(dá)及自我更新，并且能直接阻斷細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)，阻礙細(xì)胞分化的過程，促進(jìn)再程序化。報(bào)道證實(shí)，miR302/367能把人類成纖維細(xì)胞高效地再程序化形成一種多能性狀態(tài)，將近10%的細(xì)胞產(chǎn)生iPSCs克隆，比標(biāo)準(zhǔn)的OSKM因子誘導(dǎo)更有效率，并且不需要外源轉(zhuǎn)錄因子的參與[21]。此外，研究人員還通過誘導(dǎo)miR-302過度表達(dá)成功將人類毛囊細(xì)胞再程序化成iPSCs。目前認(rèn)為，miR302可抑制4種表觀遺傳調(diào)節(jié)因子：AOF2 （又稱KDM1或or LSD1，通過使H3K4脫甲基化抑制基因轉(zhuǎn)錄）、 AOF1、 MECP1/2。以上甲基化調(diào)節(jié)酶酶類受到抑制后，可導(dǎo)致廣泛的DNA去甲基化和H3K4甲基化修飾，結(jié)果引起Oct3/4、Sox2和Nanog表達(dá)上調(diào)，這些因子又可進(jìn)一步刺激miR302的表達(dá)，形成體細(xì)胞再程序化所需要的正反饋循環(huán)[22]。此外，研究還發(fā)現(xiàn)miR302簇的各個(gè)miRNA單獨(dú)作用時(shí)對(duì)再程序化效果均有不同程度的影響，如miR367為再程序化中激活內(nèi)源性O(shè)ct4所必需。miR-302a、 miR-302b和miR-200c可顯著提高OSKM和Oc t4、Sox 2、Klf4誘導(dǎo)豬成纖維細(xì)胞的再程序化效率和縮短再程序化時(shí)間，并且發(fā)現(xiàn)Oct4、Sox 2、Klf4聯(lián)合 miR-302a、miR-302b 和 miR-200c誘導(dǎo)系統(tǒng)的誘導(dǎo)效率與OSKM 4因子誘導(dǎo)系統(tǒng)差別不大，推測(cè)這3個(gè) miRNA 可以替代c-Myc的作用[23]。其他胚胎干細(xì)胞特異性miRNA簇也可以提高再程序化效率，例如miR-29b通過靶向結(jié)合Dnmt3a 和Dnmt3b促進(jìn)iPSCs形成[24]。MEFs特異性miR-291-3p、 miR-294和miR-295可代替c-My c，提高Klf4、Oct4和 Sox2誘導(dǎo)體細(xì)胞去分化成為多能干細(xì)胞的效率。

此外，在誘導(dǎo)跨細(xì)胞系直接轉(zhuǎn)分化的再程序化中，miRNA也凸顯出其重要價(jià)值。最近，Lu等[25]用miR-302聯(lián)合表達(dá)Pdx 1、Ngn3、Maf A的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人類肝細(xì)胞，隨后用培養(yǎng)成熟分泌胰島素的細(xì)胞的特定化學(xué)培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)，共轉(zhuǎn)染增加胰腺發(fā)育相關(guān)基因（Sox 17、 Fox a2和endogenous Pdx1）的表達(dá)，最終肝細(xì)胞被誘導(dǎo)成β樣細(xì)胞分泌胰島素，并且能生理性地根據(jù)葡萄糖變化釋放激素。因此，miRNA誘導(dǎo)的再程序化不僅效率較高，而且還可作為一種非病毒載體、非轉(zhuǎn)錄因子介導(dǎo)的誘導(dǎo)方法，為進(jìn)一步提高再程序化效率的研究提供了思路。

6 結(jié) 語

越來越多的研究表明，表觀遺傳修飾在再程序化中扮演至關(guān)重要的角色。近年來，針對(duì)細(xì)胞分化和去分化過程中表觀遺傳調(diào)控機(jī)制的研究飛速進(jìn)展，目前表觀遺傳修飾對(duì)再程序化的調(diào)控還存在缺乏特異性等問題，這都體現(xiàn)出目前我們對(duì)表觀遺傳學(xué)的認(rèn)識(shí)還不夠完整。因此，還需更深入解析表觀修飾事件發(fā)生的順序、識(shí)別其中作用的因子、明確不同事件和不同因子之間的關(guān)系。

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