王建舫++穆祥

摘要：為建立一種高效液相色譜-紫外檢測(cè)法（HPLC-UV）測(cè)定貫葉連翹提取物中金絲桃苷含量的方法。采用博納艾杰爾Venusil MP C18色譜柱 （150 mm×4.6 mm， 5 μm），以甲醇-1%磷酸（42：58）為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)350 nm，柱溫25 ℃，結(jié)果表明金絲桃苷在0.025～0.25。mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 5），平均加樣回收率為97.66%（n=6），峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為2.68%。該方法專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于貫葉連翹提取物中金絲桃苷的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：貫葉連翹；金絲桃苷；高效液相色譜；含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：853.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2014）12-0008-02

貫葉連翹（Hypericum performatum L.）為藤黃科金絲桃屬多年生草本植物，其味苦、辛，性平，可清心明目、調(diào)經(jīng)活血、止血生肌、解毒消炎[1]。金絲桃苷（Hyperin）是貫葉連翹主要的有效成分之一，為黃酮醇苷化合物。本試驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)貫葉連翹提取物中金絲桃苷的含量進(jìn)行了測(cè)定，建立了一種專一性強(qiáng)、重復(fù)性好的測(cè)定方法，以期為貫葉連翹提取物的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters Alliance e2695型高效液相色譜儀；美國(guó)Millipore水純化系統(tǒng)；針筒式微孔濾膜過(guò)濾器（上海興亞凈化材料廠產(chǎn)品，孔徑0.22 μm）。

1.2 藥品與試劑

金絲桃苷（批號(hào)E-0193，購(gòu)自上海同田生物技術(shù)股份有限公司）；貫葉連翹提取物，本實(shí)驗(yàn)室自制；甲醇（色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

博納艾杰爾Venusil MP C18色譜柱（5 μm， 150 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相：甲醇-1%磷酸（42：58）；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)350 nm；柱溫25 ℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取金絲桃苷對(duì)照品10 mg置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解定容，制成濃度為1.0 mg/mL的對(duì)照品貯存液。精密吸取金絲桃苷對(duì)準(zhǔn)品貯備液0.125、0.250、0.500、0.750、1.000、1.250 mL，分別放置于5 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分別得到0.025、0.050、0.100、0.150、0.200、0.250 mg/mL的對(duì)照品工作溶液。

2.2.2 樣品溶液的制備 精密稱取貫葉連翹提取物80.0 mg，置5 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容。用0.20 μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得提取物樣品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

精密吸取濃度為0.100 mg/mL的金絲桃苷對(duì)照品溶液和樣品溶液各20 μL，注入液相色譜儀中，由色譜圖（圖1）知，在金絲桃苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，樣品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密吸取濃度為0.025、0.050、0.100、0.150、0.200、0.250 mg/mL的對(duì)照品溶液10 μL，自動(dòng)進(jìn)樣注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以金絲桃苷濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程y=22 613 825x+16 861，r=0.999 5，結(jié)果表明，在0.025～0.25。mg/mL范圍內(nèi)，峰面積與金絲桃苷濃度呈良好的線性關(guān)系（圖2）。

2.5 精密度試驗(yàn)

取濃度為0.100 mg/mL的金絲桃苷對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，結(jié)果峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.25%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

按照“2.2.2”項(xiàng)下方法，重復(fù)配制6份貫葉連翹提取物樣品溶液，各取20 μL注入色譜儀，結(jié)果6份供試品峰面積RSD為2.33%，說(shuō)明方法重復(fù)性良好。

2.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

按照“2.2.2”項(xiàng)下方法，配制樣品溶液，分別于配制后0、2、4、6、8和10 h進(jìn)樣20 μL，測(cè)定峰面積，結(jié)果表明，金絲桃苷10 h內(nèi)峰面積RSD為2.12%，表明樣品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

稱取已知金絲桃苷含量的貫葉連翹提取物約200 mg，平行制備6份，置10 mL棕色容量瓶中，分別加入對(duì)照品貯存液1.0 mL，按“2.2.2”方法制備6份樣品溶液，進(jìn)樣10 μL注入色譜儀，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果6份樣品平均回收率為97.66 %，RSD為2.68%，說(shuō)明回收率良好。

2.9 樣品的測(cè)定

按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備3份樣品溶液，分別注入高效液相色譜儀，進(jìn)樣10 μL，同時(shí)取濃度為0.050 mg/mL的金絲桃苷對(duì)照品進(jìn)樣10 μL，按照“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算貫葉連翹提取物中金絲桃苷的平均含量為0.26%。

3 小結(jié)

本試驗(yàn)采用高效液相色譜-紫外檢測(cè)法測(cè)定了貫葉連翹提取物中金絲桃苷的含量，方法學(xué)考察證明該試驗(yàn)中使用的方法良好，可以作為貫葉連翹提取物中金絲桃苷含量測(cè)定的方法。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王曉利，張俊松，羅 謙，等. HPLC法測(cè)定貫葉連翹藥材及提取物中金絲桃素的含量[J].中藥材，2006，29（10）：1047-1049.