孫淑紅，王樹鶴，孫艷斌，趙巧棉，吉海蓮，于淑莉，徐金環(huán)，馬秀芹

1.067000，河北省承德市婦幼保健院婦科;2.100700，北京軍區(qū)總醫(yī)院婦產(chǎn)科;3.067000,河北省承德市中心醫(yī)院麻醉科

絕經(jīng)前后子宮內(nèi)膜息肉芳香化酶表達的對比研究

孫淑紅1，王樹鶴2，孫艷斌3，趙巧棉1，吉海蓮1，于淑莉1，徐金環(huán)1，馬秀芹1

1.067000，河北省承德市婦幼保健院婦科;2.100700，北京軍區(qū)總醫(yī)院婦產(chǎn)科;3.067000,河北省承德市中心醫(yī)院麻醉科

子宮內(nèi)膜息肉(endometrial polyps, EP)是婦科常見疾病。其病因和發(fā)病機制至今尚未明確。起初認(rèn)為，EP的發(fā)病原因為炎性反應(yīng)，但隨著研究的深入，眾多學(xué)者認(rèn)為EP是一種與激素刺激，尤其是與雌激素增高密切相關(guān)的疾病[1]。絕經(jīng)后，體內(nèi)雌激素水平明顯低于絕經(jīng)前。據(jù)報道，絕經(jīng)后EP的發(fā)生率并不低于絕經(jīng)前[2]。臨床病例分析也闡釋了絕經(jīng)前后不同生理階段的EP在臨床表現(xiàn)，EP的大小、數(shù)量等方面均存在不同[3]。由于絕經(jīng)前后EP的惡變率不同[4]，所以考慮絕經(jīng)前后EP的發(fā)生可能存在不同的機制。基于以前EP的激素刺激理論的研究，EP組織的雌激素檢測確存在困難。為此，本課題組以子宮內(nèi)膜局部雌激素合成的關(guān)鍵酶——芳香化酶為研究的出發(fā)點，對比分析絕經(jīng)前后EP中芳香化酶的表達是否存在不同,以期進一步揭示EP的發(fā)病機制。

1對象與方法

1.1對象選取2013-01至2014-01在北京軍區(qū)總醫(yī)院因EP行宮腔鏡手術(shù)，經(jīng)石蠟病理診斷為EP病例40例，均滿足BMI為13～25 kg/m2，無子宮內(nèi)膜異位癥及子宮肌瘤病史，至少3個月內(nèi)未服用任何外源性激素。其中，絕經(jīng)前組患者還符合以下條件：既往月經(jīng)規(guī)律，無內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病史，為非功能性EP，且處于子宮內(nèi)膜增生期，均選擇月經(jīng)干凈3～7 d手術(shù)(因異常陰道流血月經(jīng)周期不規(guī)律者剔除)。絕經(jīng)后組需滿足至少絕經(jīng)1年以上。每組20例。對于滿足以上篩選條件者，選絕經(jīng)后EP組織為實驗1組，絕經(jīng)后EP患者的遠(yuǎn)離息肉的內(nèi)膜組織為對照1組，絕經(jīng)前EP組織為實驗2組，絕經(jīng)前EP患者的遠(yuǎn)離息肉的內(nèi)膜組織為對照2組，每組20例。本研究經(jīng)過本院倫理委員會批準(zhǔn)，并簽署知情同意書。

1.2試劑和儀器兔抗人 CYP19A1 多抗、Immuno-Bridge+二步法免疫組化檢測試劑、DAB顯色試劑盒(黃)，尼康E100型生物顯微鏡，佳能600D數(shù)碼單反相機。

1.3實驗方法采用免疫組化的方法檢測子宮內(nèi)膜及息肉中芳香化酶的表達。標(biāo)本制作后在光鏡下再次排除子宮內(nèi)膜癌、內(nèi)膜非典型增生，然后行芳香化酶表達量的檢測。每例標(biāo)本隨機選取3張切片(1張進行指標(biāo)檢測，1張備用，1張陰性對照)。顯微鏡下放大400倍，隨機選取5個視野拍照。芳香化酶表達的陽性區(qū)域染色為淡黃色至棕褐色。Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件進行圖片分析,選取平均光密度值[平均光密度值=整張圖片的累積IOD/(圖片面積-空白面積)]為比較指標(biāo)，以每例標(biāo)本的5個視野的平均光密度值的均值代表每例標(biāo)本的平均光密度值，作為最終比較指標(biāo)。

2結(jié)果

2.1形態(tài)學(xué)比較無論絕經(jīng)前后，芳香化酶在EP中均有較強表達，光鏡下切片中受體陽性區(qū)域顯色為黃色。實驗1組表達最強，表達區(qū)域呈深褐色，集中分布于息肉腺體中(圖1A)；實驗2組呈淺棕色，集中分布于息肉腺體中(圖1B)。對照1組腺體中，細(xì)胞核大漿少，僅細(xì)胞漿中少量表達芳香化酶，間質(zhì)中可見大量的梭型細(xì)胞，基本無芳香化酶表達(圖1C)；對照2組中芳香化酶呈低表達，且主要集中于腺體中(圖1D)。

2.2光密度值比較實驗1組和2組分別為0.1001±0.0140和0.0651±0.0098，前者大于后者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=9.16，P<0.01)；對照1組和2組分別為0.0269±0.0066和0.0342±0.0083，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；實驗1組和2組均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于相對應(yīng)的對照1組和2組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=21.16，t=8.49，P均<0.01)。

3討論

3.1EP的類型EP是指子宮內(nèi)膜表面有蒂的良性結(jié)節(jié)狀突起，鏡下檢查至少有灶狀纖維化纖維性間質(zhì)，間質(zhì)中有厚壁、彎曲、擴張的血管。根據(jù)腺體的不同可分為：非功能性息肉、功能性息肉、腺肌瘤性息肉和老年萎縮性息肉4種類型。對于絕經(jīng)前EP，非功能性EP對孕激素?zé)o反應(yīng)，而持續(xù)對雌激素反應(yīng)，因此大部分腺體呈不同程度的增生狀態(tài)，息肉內(nèi)的腺體和間質(zhì)無周期性改變，與息肉外的周圍內(nèi)膜組織能夠分辨出來；老年萎縮性息肉與絕經(jīng)后子宮內(nèi)膜不同，較少受卵巢功能的衰退而萎縮，較多表現(xiàn)為不同程度的增生。所以本實驗絕經(jīng)前組選擇非功能性子宮內(nèi)膜息肉與絕經(jīng)后EP相比，更有比較的價值。

3.2EP的形成與雌激素密切相關(guān)目前認(rèn)為，EP發(fā)生的可能機制有雌/孕激素受體(ER/PR)分布不均衡、細(xì)胞增殖/凋亡失衡、遺傳因素、炎性刺激、蛋白表達異常、他莫昔芬等藥物的影響，以及細(xì)胞因子的參與等[5]。雌孕激素對子宮內(nèi)膜的增殖及分化起調(diào)節(jié)作用，對于不同的生理階段，體內(nèi)激素水平不同，子宮內(nèi)膜的組織結(jié)構(gòu)不同，所以，不同的生理階段EP可能存在差異。對于絕經(jīng)前后EP發(fā)病機制的研究發(fā)現(xiàn)，無論絕經(jīng)前后，EP中雌激素受體的表達均明顯高于相應(yīng)生理階段的子宮內(nèi)膜中該受體的表達，而孕激素受體的表達在絕經(jīng)前后卻存在差異，絕經(jīng)前EP中孕激素受體的表達低于相應(yīng)生理階段的子宮內(nèi)膜中該受體的表達[6]，而絕經(jīng)后EP中孕激素受體的表達明顯高于絕經(jīng)后內(nèi)膜組織中該受體的表達[7]；絕經(jīng)后EP中COX-2的表達明顯高于絕經(jīng)前EP中該蛋白的表達[8]，且有研究發(fā)現(xiàn)在絕經(jīng)后EP及惡變的EP中COX-2呈高表達[9]。關(guān)于EP發(fā)病原因的系統(tǒng)回顧顯示：外源性雌激素的增加、類雌激素的應(yīng)用、非保護性的單一雌激素的激素替代[1]、內(nèi)源性雌激素增加等因素均可誘發(fā)EP的形成。總之，EP的形成與雌激素密切相關(guān)。而芳香化酶，無論在體循環(huán)雌激素還是在子宮內(nèi)膜局部雌激素形成中都發(fā)揮關(guān)鍵性作用。

3.3芳香化酶與EP的關(guān)系芳香化酶是細(xì)胞色素P450酶系的一種，由血紅蛋白和酶蛋白構(gòu)成,是CYP19 基因編碼的產(chǎn)物,是細(xì)胞色素P450 產(chǎn)物中唯一由單基因編碼的酶, 定位在染色體15q21.1,在不同的組織中可以有不同的轉(zhuǎn)錄起始點,調(diào)節(jié)不同組織P450arom 蛋白的表達[10]。芳香化酶在性腺組織中高表達，在性腺外的多種組織中呈低表達，隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)在脂肪、乳腺、骨、子宮組織、血管中均存在芳香化酶的表達[11]。由于不同于性腺組織，這些組織缺乏膽固醇從頭合成的關(guān)鍵酶——CYP17A1，所以循環(huán)中雄激素是這些組織原位雌激素合成的唯一來源[12]。芳香化酶是雌激素合成過程中最后一步限速酶，是催化雄烯二酮和睪酮轉(zhuǎn)變?yōu)榇仆痛贫嫉年P(guān)鍵酶，其數(shù)量和活性直接決定了正常和異常組織中雌激素的水平。芳香化酶的表達及其功能調(diào)節(jié)會使雌激素生成量發(fā)生顯著變化，同時干擾局部或系統(tǒng)的雌激素水平[13]。

王偉娟等[14]對絕經(jīng)后EP發(fā)病機制的研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后EP患者與非EP患者體循環(huán)雌激素水平無統(tǒng)計學(xué)差異，而子宮內(nèi)膜局部雌孕激素受體的表達均高于遠(yuǎn)離息肉的內(nèi)膜組織中的表達，因此考慮絕經(jīng)后EP發(fā)生可能與子宮內(nèi)膜局部雌激素形成有關(guān)。Biron等[15]同樣證實，在64例絕經(jīng)后服用TAM治療子宮內(nèi)膜息肉的乳腺癌患者中,體循環(huán)雌激素水平均在正常范圍,提示絕經(jīng)后子宮內(nèi)膜息肉可能與子宮內(nèi)膜局部的性激素水平有關(guān)。本實驗對絕經(jīng)后EP及內(nèi)膜組織中芳香化酶表達進行對比發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后EP中芳香化酶的表達明顯高于該生理階段遠(yuǎn)離息肉的子宮內(nèi)膜中的表達，進一步證明絕經(jīng)后EP的發(fā)生可能與子宮內(nèi)膜局部雌激素形成密切相關(guān)，而不依賴于體循環(huán)雌激素水平的增加。

對于絕經(jīng)前患者，Maia等[16]研究了118例絕經(jīng)前內(nèi)膜息肉標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)息肉中芳香化酶 P450 的表達水平顯著高于正常內(nèi)膜組織。紀(jì)統(tǒng)慧等[17]對于絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉中芳香化酶表達的研究同樣發(fā)現(xiàn)：絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉中芳香化酶的表達明顯高于相同生理時期的子宮內(nèi)膜組織中該酶的表達。本實驗對絕經(jīng)前EP與遠(yuǎn)離EP的內(nèi)膜組織中該酶的表達進行對比研究，也同樣發(fā)現(xiàn)絕經(jīng)前EP中芳香化酶的表達明顯高于該生理階段子宮內(nèi)膜中的表達，所以，無論絕經(jīng)前后，EP中芳香化酶的表達均高于相應(yīng)生理階段的遠(yuǎn)離息肉的子宮內(nèi)膜中該酶的表達，推測芳香化酶通過促進局部雌激素合成，在息肉形成過程中起關(guān)鍵性作用。

本實驗發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后EP中芳香化酶的表達明顯高于絕經(jīng)前EP中該酶的表達，進一步說明絕經(jīng)前后，子宮內(nèi)膜局部合成的雌激素在息肉形成中參與的程度不同，絕經(jīng)后EP可能更依賴于子宮內(nèi)膜局部雌激素的合成。芳香化酶促進子宮內(nèi)膜局部雌激素的合成有兩條途徑[18]：一是芳香化酶促進C19前體物質(zhì)轉(zhuǎn)化為雌激素，引起局部雌激素水平的升高；二是芳香化酶促進局部內(nèi)膜中COX-2的表達，后者又促進局部內(nèi)膜中前列腺素E2的生成。前列腺素E2進一步促進芳香化酶和雌二醇的生成，即在局部形成PGE2-芳香化酶-雌激素之間的正反饋循環(huán)。絕經(jīng)后EP中芳香化酶的過表達，可以解釋絕經(jīng)后EP及惡性EP中COX-2的增高，且絕經(jīng)后EP較絕經(jīng)前EP的高惡變率可能與此有關(guān)。同樣，關(guān)于絕經(jīng)后EP局部雌孕激素受體的增高，推測與EP局部雌激素的形成、雌激素對局部雌孕激素受體的正性調(diào)節(jié)作用有關(guān)。

無論絕經(jīng)前后，子宮內(nèi)膜息肉中芳香化酶的表達均高于相應(yīng)生理階段的子宮內(nèi)膜中的芳香化酶的表達；絕經(jīng)前后子宮內(nèi)膜息肉中芳香化酶的表達不同，說明絕經(jīng)前后EP的發(fā)生可能存在不同的機制。

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(2014-12-10收稿2015-01-12修回)

(責(zé)任編輯武建虎)

【摘要】目的探討絕經(jīng)前后子宮內(nèi)膜息肉芳香化酶表達的異同。方法選擇臨床診斷子宮內(nèi)膜息肉且行宮腔鏡手術(shù)的患者，按照是否絕經(jīng)分為絕經(jīng)前組及絕經(jīng)后組，每組20例。絕經(jīng)后組取其息肉組織為實驗1組，取遠(yuǎn)離息肉的子宮內(nèi)膜組織為對照1組；絕經(jīng)前組取其息肉組織為實驗2組，取遠(yuǎn)離息肉組織的子宮內(nèi)膜組織為對照2組。采用免疫組化二步法和圖像分析軟件檢測絕經(jīng)前后子宮內(nèi)膜息肉及遠(yuǎn)離息肉的內(nèi)膜組織中芳香化酶的表達情況。結(jié)果實驗1組和2組芳香化酶的表達分別為0.1001±0.0140和0.0651±0.0098，前者大于后者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=9.16，P<0.01)；對照1組和2組分別為0.0269±0.0066和0.0342±0.0083，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；實驗1組和2組均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于相對應(yīng)的對照1組和2組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=21.16，t=8.49，P均<0.01)。結(jié)論無論絕經(jīng)前后，子宮內(nèi)膜息肉中的芳香化酶的表達均高于相應(yīng)生理階段的子宮內(nèi)膜中該酶的表達；絕經(jīng)前后子宮內(nèi)膜息肉中芳香化酶的表達不同，絕經(jīng)前后子宮內(nèi)膜息肉的發(fā)生可能存在不同的機制。

【關(guān)鍵詞】子宮內(nèi)膜息肉；子宮內(nèi)膜；芳香化酶；絕經(jīng)前；絕經(jīng)后；發(fā)病機制

【中國圖書分類號】R711.7

Comparison of aromatase expression in endometrial polyps between premenopausal and postmenopausal period

SUN Shuhong1, WANG Shuhe2, SUN Yanbin3, ZHAO Qiaomian1, JI Hailian1, YU Shuli1, XU Jinhuan1, and MA Xiuqin1.1. Department of Gynecology, Chengde Maternal and Child Health Hospital of Hebei Province, Chengde 067000, China；2. Department of Gynecology and Obstetrics, Beijing Military Command General Hospital, Beijing 100700, China；3. Department of Anesthesiology, Chengde Central Hospital of Hebei Province, Chengde 067000, China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the differences of aromatase expression in endometrial polyps between premenopausal and postmenopausal periods. MethodsAccording to menstrual status, the patients were divided into different groups: premenopausal group and postmenopausal group. According to the strict exclusion criteria, 20 patients were selected into each group. The postmenopausal endometrial polyps were sampled as the experiment group 1, while the postmenopausal remoteendometrial tissues not belonging to the polyp were sampled as the control group 1. The premenopausal endometrial polyps were sampled as the experiment group 2, while the premenopausal remote endometrial tissues not belonging to the polyp were sampled as the control group 2. All patients underwent hysteroscopic resection of endometrial polyps. Immunohistochemistry was used to detect the expression of aromatase in endometrial polyps and the remote endometrial tissues. Images were analyzed by using Image-Pro Plus 6.0 analysis software. The mean optical density values of aromatase expression were taken as comparison index. ResultsThe expressions of aromatase in experiment group 1 and group 2 were 0.1001±0.0140 and 0.0651±0.0098, the differences was statistically significant (t=9.16, P<0.01). The expressions of aromatase in control group 1 and group 2 were 0.0269±0.0066 and 0.0342±0.0083, the differences between two groups was no statistically significant. The expressions of aromatase in two experiment groups were higher than in two corresponding control groups, the differences were statistically significant (t=21.16, P<0.01; t=8.49, P<0.01). ConclusionsThe presence of aromatase expression is significantly higher in endometrial polyps than in endometriam, both in premenopausal and in postmenopausal period. The expression of aromatase in postmenopausal endometrial polyps is higher than in premenopausal endometrial polyps, so the pathogenesis of endometrial polyps may be different in the two different physiological stages.

【Key words】endometrial polyp；endometriam；aromatase；premenopausual；postmenopausal；pathogenesis

通訊作者：王樹鶴，E-mail: haotongzhi8@sina.com

作者簡介：孫淑紅，碩士研究生，主治醫(yī)師，E-mail: ssh.0213@163.com