袁錦玉，盧碧燕

（東莞衛(wèi)生學(xué)校，廣東 東莞 523018）

臨床組織病理診斷技術(shù)進(jìn)展評(píng)述

袁錦玉，盧碧燕

（東莞衛(wèi)生學(xué)校，廣東 東莞 523018）

病理技術(shù)；組織化學(xué)；組織芯片

臨床病理學(xué)屬于診斷學(xué)，組織病理技術(shù)已從制作常規(guī)的石蠟切片及染色發(fā)展到綜合運(yùn)用免疫組化技術(shù)、分子生物技術(shù)、激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)以及芯片技術(shù)等現(xiàn)代方法的階段，極大地提高了病理診斷的效率，為更全面地了解疾病提供了有力依據(jù)。

1 常規(guī)組織病理技術(shù)和染色

16世紀(jì)出現(xiàn)了尸體解剖的記載，18世紀(jì)病理解剖學(xué)已成為一門獨(dú)立的學(xué)科。19世紀(jì)，德國(guó)病理學(xué)家魏爾嘯的《細(xì)胞病理學(xué)》專著出版，奠定了以人體細(xì)胞水平的病理變化作為診斷的理論基礎(chǔ)［1］。20世紀(jì)40年代希臘醫(yī)生發(fā)明了巴氏染色，使巴氏五級(jí)細(xì)胞學(xué)篩查在婦女防癌普查和婦科常規(guī)檢查中起到了重要作用，為當(dāng)今盛行的細(xì)胞學(xué)宮頸癌篩查新技術(shù)TCT（液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)）和TBS（診斷分類方法）奠定了基礎(chǔ)［2］。TCT是20世紀(jì)末細(xì)胞學(xué)最顯著的進(jìn)步。

自從Guthrie首創(chuàng)針吸活檢病理，細(xì)胞穿刺就逐漸被臨床應(yīng)用，如骨穿、胸腰椎穿刺、乳腺甲狀腺等皮下腫瘤的穿刺［3］，B超引導(dǎo)下的肝臟穿刺和腎臟穿刺，CT引導(dǎo)下的經(jīng)皮肺穿刺，都為臨床提供了常規(guī)、簡(jiǎn)便、有效的服務(wù)。

2 電子顯微鏡技術(shù)

電子顯微鏡是根據(jù)電子光學(xué)的原理，使物體非常細(xì)微的結(jié)構(gòu)能在極高的放大倍數(shù)下成像。20世紀(jì)50年代電子顯微鏡的出現(xiàn)，將病理引入了超微結(jié)構(gòu)，在電子顯微鏡下，可觀察到艾滋病病毒，甚至DNA分子。目前主要應(yīng)用在腎病病理診斷［4］和少數(shù)腫瘤的鑒別診斷中，20世紀(jì)70年代冷凍技術(shù)原理應(yīng)用于病理，有了冰凍切片技術(shù)，這是一種用冰凍切片機(jī)將手術(shù)標(biāo)本快速冷凍變硬利于制片的方法，在手術(shù)過(guò)程中可得到快速病理報(bào)告［5］。

3 酶組織化學(xué)技術(shù)、免疫組織化學(xué)技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

3.1 酶組織化學(xué)技術(shù)

酶是由生物體產(chǎn)生的一類具有催化活性的物質(zhì)，酶組織化學(xué)技術(shù)是利用酶可以催化某些反應(yīng)的特性來(lái)檢測(cè)酶的活性，并對(duì)其進(jìn)行定性和定量的研究，常用的方法有沉淀法、酶偶聯(lián)法和合成法等。徐永平等［6］應(yīng)用乙酰膽堿酯酶組織化學(xué)技術(shù)觀察了28條不同胚齡的雞腦內(nèi)微血管，發(fā)現(xiàn)在孵化的第18天出現(xiàn)了含乙酰膽堿酯酶陽(yáng)性反應(yīng)物的微血管，提供了重要的形態(tài)學(xué)資料。

3.2 免疫組織化學(xué)技術(shù)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

免疫組織化學(xué)技術(shù)是利用抗原與抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)來(lái)鑒定組織或細(xì)胞中特定化學(xué)物的一種組織化學(xué)方法，是研究和觀察細(xì)胞中某些結(jié)構(gòu)和分子物質(zhì)及組織細(xì)胞間成分的主要手段。當(dāng)20世紀(jì)80年代制備出多克隆、單克隆抗體，免疫組織化學(xué)方法——免疫病理被快速推廣應(yīng)用，在整個(gè)病理學(xué)發(fā)展中是個(gè)突破，在臨床中很大程度上解決了腫瘤性質(zhì)和來(lái)源的問(wèn)題，如對(duì)胃腫物L(fēng)CA和CK類的檢測(cè)，可鑒別是胃癌還是胃淋巴瘤。CK7/CK20/Villin的聯(lián)合標(biāo)記，有助于確定轉(zhuǎn)移癌的原發(fā)部位。腫瘤細(xì)胞的耐藥標(biāo)記可判斷預(yù)后，如ER（雌激素受體）、PR（孕激素受體）的陽(yáng)性表達(dá)是乳腺癌預(yù)后良好的指標(biāo)，c-erbB-2的陽(yáng)性表達(dá)是乳腺癌預(yù)后不良的指標(biāo)。免疫病理的應(yīng)用提高了病理診斷的準(zhǔn)確性和實(shí)用性［7］，成為目前疑難腫瘤診斷中常規(guī)的檢查項(xiàng)目。而細(xì)胞化學(xué)技術(shù)可提高細(xì)胞學(xué)的診斷準(zhǔn)確性，并在鑒定上皮性、間葉性或淋巴性腫瘤方面以及淋巴瘤亞型分類中發(fā)揮著重要作用。

4 原子力顯微鏡和激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)

20世紀(jì)90年代，原子力顯微鏡（AFM）——掃描探針顯微鏡問(wèn)世，生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域就將其積極應(yīng)用于分子結(jié)構(gòu)的觀察。AFM可直觀呈現(xiàn)出物質(zhì)的分子和原子結(jié)構(gòu)，提供真正的三維表型圖［8］。其應(yīng)用前景包括細(xì)胞計(jì)數(shù)，細(xì)胞直徑、平均高度、體積、表面積測(cè)定，單個(gè)細(xì)胞的形態(tài)和動(dòng)態(tài)觀察以及細(xì)胞膜表面微觀結(jié)構(gòu)的觀察等。目前AFM的應(yīng)用研究還處于初步階段，而且其成像范圍太小、速度慢、受探頭的影響太大，尚未在醫(yī)院應(yīng)用。

20世紀(jì)90年代推出的激光掃描共聚焦顯微鏡（CLSM）很快得到了推廣應(yīng)用［9］，它相當(dāng)于細(xì)胞的“CT機(jī)”，通過(guò)對(duì)活細(xì)胞和組織或細(xì)胞切片進(jìn)行斷層掃描和圖像分析軟件的幫助，可獲得清晰的細(xì)胞形狀，染色體、細(xì)胞器和細(xì)胞膜系統(tǒng)的三維圖像。它相當(dāng)于多種常用光學(xué)顯微鏡的有機(jī)組合，如倒置光學(xué)顯微鏡、紫外線顯微鏡、熒光顯微鏡等，因此稱為萬(wàn)能顯微鏡。國(guó)內(nèi)有些大學(xué)實(shí)驗(yàn)室和研究所已經(jīng)開始應(yīng)用。

5 組織芯片技術(shù)

組織芯片技術(shù)［10］能將多個(gè)甚至幾千個(gè)不同來(lái)源的組織固定到同一載體上，形成組織微陣列，可以對(duì)多個(gè)標(biāo)本進(jìn)行同一指標(biāo)的研究，提高了檢測(cè)樣本的工作效率，使病理技術(shù)走向簡(jiǎn)易化、標(biāo)準(zhǔn)化、程序化。它是繼基因芯片、蛋白質(zhì)芯片之后的一種特殊的生物芯片，并與傳統(tǒng)的組織化學(xué)技術(shù)、免疫組織化學(xué)技術(shù)（IHC）、原位雜交技術(shù)（ISH）、熒光核酸原位雜交技術(shù)（FISH）及原位PCR技術(shù)等相結(jié)合，能在DNA、RNA和蛋白質(zhì)等不同分子水平上研究病理組織，將在臨床有更廣泛的應(yīng)用前景。

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，病理學(xué)科也引進(jìn)了許多自動(dòng)化裝置，如病理標(biāo)本的自動(dòng)脫水機(jī)、自動(dòng)包埋機(jī)、自動(dòng)切片機(jī)、自動(dòng)染色機(jī)等，且隨著互聯(lián)網(wǎng)技術(shù)的發(fā)展，開展了遠(yuǎn)程病理圖文會(huì)診，為臨床提供了更便捷、更可靠、更有效的診斷治療建議。

6 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，在一個(gè)世紀(jì)里，我國(guó)病理診斷技術(shù)經(jīng)歷了第一階段肉眼水平、第二階段光學(xué)顯微鏡水平、第三階段電子顯微鏡水平、第四階段分子技術(shù)水平、第五階段基因水平。我國(guó)許多病理學(xué)家和專業(yè)人才為病理學(xué)的發(fā)展做出了巨大貢獻(xiàn)，推出了很多新的儀器和實(shí)驗(yàn)方法，并應(yīng)用于醫(yī)學(xué)及其他生物科學(xué)領(lǐng)域的實(shí)際工作中。20世紀(jì)初，世界著名的臨床學(xué)家和診斷學(xué)家William Osler對(duì)病理學(xué)在醫(yī)學(xué)中的地位做了重要評(píng)價(jià)：As is our pathology，so is our medicine（病理為醫(yī)之本）。這種評(píng)價(jià)也包含著臨床對(duì)病理的需求和期待，賦予了病理更高的使命和責(zé)任。

［1］紀(jì)小龍.從病理看臨床醫(yī)學(xué)的難度和挑戰(zhàn)［J］.實(shí)用醫(yī)院臨床雜志，2004（1）：21-22.

［2］趙晶，王志宇，商文清.宮頸癌放療后液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)分析［J］.中華放射腫瘤學(xué)雜志，2007（1）：45-47.

［3］于澤平，祈正茂.乳腺腫塊細(xì)針穿刺抽吸細(xì)胞學(xué)檢查［J］.江蘇醫(yī)藥，1991（6）：306-307.

［4］王素霞，鄒萬(wàn)忠.腎活檢標(biāo)本包埋后免疫電鏡技術(shù)［J］.北京大學(xué)學(xué)報(bào)，2002（3）：306-308.

［5］王杰，楊春育.甲狀腺癌術(shù)中冰凍切片病理檢查可信性分析［J］.實(shí)用外科雜志，1989（4）：185-186.

［6］徐永平，范光麗.應(yīng)用乙酰膽堿酯酶組織化學(xué)技術(shù)對(duì)雞胚腦內(nèi)微血管的觀察［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，1998，19（3）：33.

［7］朱力，李寶珠.原發(fā)性宮頸腺癌的臨床病理及免疫組織化學(xué)分析［J］.中華病理學(xué)雜志，1999（4）：252-254.

［8］紀(jì)小龍，申明識(shí)，尹彤.原子力顯微鏡對(duì)人尿液的直接觀察［J］.中國(guó)體視學(xué)與圖像分析，2002（2）：101-102.

［9］沈注，陳凌，李承新.尋常型銀屑病的皮膚CT特征初探［J］.中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志，2008（4）：301-303.

［10］周小鴿，張勁松，張小平.組織芯片技術(shù)在檢測(cè)正常組織和腫瘤組織抗原表達(dá)中的應(yīng)用［J］.中華病理學(xué)雜志，2002（2）：181-182.

G353.11

A

1671-1246（2015）14-0149-02

東莞市科研基金項(xiàng)目“病理檢驗(yàn)技術(shù)職業(yè)教育評(píng)價(jià)指標(biāo)體系的研究”（20141051500041）